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去泛素化酶OTUB1抑制c-Maf多聚泛素化的机制和功能研究

中文摘要第4-7页
abstract第7-9页
引言第12-15页
材料和方法第15-24页
    一、实验材料第15-17页
        1.细胞系第15页
        2.主要试剂第15-16页
        3.仪器设备第16-17页
        4.抗体第17页
    二、试剂的配制第17-19页
        1.磷酸缓冲液(10×PBS)第17页
        2.SDS裂解液(1×SDS lysis,1L)第17-18页
        3.电泳缓冲液(10×Running,1L)第18页
        4.湿转缓冲液(1×Trans buffer, 1L)第18页
        5.洗膜缓冲液(10×TBS, 1L)第18页
        6.SDS-PAGE分离胶和浓缩胶的配制第18页
        7.IP裂解液(1 × IP PLC lysis,500 mL)第18-19页
        8.上样缓冲液(5 × SDS Loading buffer,100 mL)第19页
        9. LB培养基(1 × LB,200 mL)第19页
    三、实验方法第19-24页
        1.细胞培养第19-20页
        2.蛋白免疫印迹分析第20页
        3.细胞接种与转染第20页
        4.免疫沉淀(Immunoprecipitation,IP)第20-21页
        5.荧光素酶报告基因检测第21页
        6.慢病毒的包装与侵染第21-22页
        7.OTUB1标签载体的连接第22-23页
        8.OTUB1点突变突变体及截断体的构建第23-24页
实验结果第24-38页
    1.发现OTUB1可能与c-Maf泛素化相关第24-25页
    2. OTUB1与c-Maf结合第25-27页
    3.OTUB1抑制c-Maf的泛素化第27-29页
    4.OTUB1抑制MafA的泛素化, 但是对MafB没有显著作用第29-30页
    5.OTUB1上调了c-Maf和MafA的蛋白水平,对MafB没有显著影响第30-31页
    6.OTUB1增加了c-Maf蛋白的稳定性第31-32页
    7.OTUB1主要抑制c-Maf的K85,K283,K347位赖氨酸的泛素化第32-33页
    8.K71是OTUB1发挥去泛素化作用重要位点第33-35页
    9.OTUB1促进c-Maf和MafA的转录活性第35-36页
    10.OTUB1稳定内源性c-Maf蛋白水平,促进多发性骨髓瘤细胞的生长第36-38页
总结与讨论第38-40页
参考文献第40-44页
综述第44-54页
    1.OTUB1经典的去泛素化机制第46-47页
    2.OTUB1通过非催化型作用抑制E2对泛素分子的传递第47-49页
    3 OTUB1的功能第49-50页
    4 展望第50页
    参考文献第50-54页
攻读学位期间公开发表的文章第54-55页
附录:中英文缩略词对照表第55-56页
致谢第56-58页

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