中文摘要 | 第4-7页 |
abstract | 第7-9页 |
引言 | 第12-15页 |
材料和方法 | 第15-24页 |
一、实验材料 | 第15-17页 |
1.细胞系 | 第15页 |
2.主要试剂 | 第15-16页 |
3.仪器设备 | 第16-17页 |
4.抗体 | 第17页 |
二、试剂的配制 | 第17-19页 |
1.磷酸缓冲液(10×PBS) | 第17页 |
2.SDS裂解液(1×SDS lysis,1L) | 第17-18页 |
3.电泳缓冲液(10×Running,1L) | 第18页 |
4.湿转缓冲液(1×Trans buffer, 1L) | 第18页 |
5.洗膜缓冲液(10×TBS, 1L) | 第18页 |
6.SDS-PAGE分离胶和浓缩胶的配制 | 第18页 |
7.IP裂解液(1 × IP PLC lysis,500 mL) | 第18-19页 |
8.上样缓冲液(5 × SDS Loading buffer,100 mL) | 第19页 |
9. LB培养基(1 × LB,200 mL) | 第19页 |
三、实验方法 | 第19-24页 |
1.细胞培养 | 第19-20页 |
2.蛋白免疫印迹分析 | 第20页 |
3.细胞接种与转染 | 第20页 |
4.免疫沉淀(Immunoprecipitation,IP) | 第20-21页 |
5.荧光素酶报告基因检测 | 第21页 |
6.慢病毒的包装与侵染 | 第21-22页 |
7.OTUB1标签载体的连接 | 第22-23页 |
8.OTUB1点突变突变体及截断体的构建 | 第23-24页 |
实验结果 | 第24-38页 |
1.发现OTUB1可能与c-Maf泛素化相关 | 第24-25页 |
2. OTUB1与c-Maf结合 | 第25-27页 |
3.OTUB1抑制c-Maf的泛素化 | 第27-29页 |
4.OTUB1抑制MafA的泛素化, 但是对MafB没有显著作用 | 第29-30页 |
5.OTUB1上调了c-Maf和MafA的蛋白水平,对MafB没有显著影响 | 第30-31页 |
6.OTUB1增加了c-Maf蛋白的稳定性 | 第31-32页 |
7.OTUB1主要抑制c-Maf的K85,K283,K347位赖氨酸的泛素化 | 第32-33页 |
8.K71是OTUB1发挥去泛素化作用重要位点 | 第33-35页 |
9.OTUB1促进c-Maf和MafA的转录活性 | 第35-36页 |
10.OTUB1稳定内源性c-Maf蛋白水平,促进多发性骨髓瘤细胞的生长 | 第36-38页 |
总结与讨论 | 第38-40页 |
参考文献 | 第40-44页 |
综述 | 第44-54页 |
1.OTUB1经典的去泛素化机制 | 第46-47页 |
2.OTUB1通过非催化型作用抑制E2对泛素分子的传递 | 第47-49页 |
3 OTUB1的功能 | 第49-50页 |
4 展望 | 第50页 |
参考文献 | 第50-54页 |
攻读学位期间公开发表的文章 | 第54-55页 |
附录:中英文缩略词对照表 | 第55-56页 |
致谢 | 第56-58页 |