| 摘要 | 第6-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 第一章 引言 | 第14-21页 |
| 1.1 木霉菌的生防特性及作用机制 | 第14页 |
| 1.2 木霉菌的应用现状及其发展前景 | 第14-15页 |
| 1.3 异源三聚体G蛋白 | 第15-16页 |
| 1.3.1 异源三聚体G蛋白的结构和作用机制 | 第15页 |
| 1.3.2 丝状真菌G蛋白的研究进展 | 第15-16页 |
| 1.4 转录因子概述 | 第16-18页 |
| 1.4.1 转录因子的分类 | 第16-17页 |
| 1.4.2 锌指蛋白类转录因子的结构及其功能研究 | 第17-18页 |
| 1.5 转录因子的功能研究方法 | 第18-19页 |
| 1.5.1 功能突变分析 | 第18-19页 |
| 1.5.2 瞬间表达分析 | 第19页 |
| 1.6 本实验的研究目的及技术路线 | 第19-21页 |
| 1.6.1 本实验的研究目的意义 | 第19页 |
| 1.6.2 本研究的主要内容 | 第19-20页 |
| 1.6.3 本研究的技术路线 | 第20-21页 |
| 第二章 哈茨木霉转录因子tha09974基因的克隆 | 第21-29页 |
| 2.1 材料与方法 | 第21-23页 |
| 2.1.1 试剂 | 第21页 |
| 2.1.2 菌株 | 第21页 |
| 2.1.3 培养基及主要试剂配方 | 第21-22页 |
| 2.1.4 引物 | 第22页 |
| 2.1.5 木霉基因组的提取 | 第22页 |
| 2.1.6 tha09974基因片段的克隆 | 第22-23页 |
| 2.2 结果与分析 | 第23-27页 |
| 2.2.1 tha09974基因的克隆 | 第23-24页 |
| 2.2.2 tha09974基因的序列分析 | 第24页 |
| 2.2.3 tha09974基因开放阅读框分析及其对编码的蛋白质预测 | 第24-27页 |
| 2.3 讨论 | 第27-29页 |
| 第三章 哈茨木霉tha09974基因回复载体的构建 | 第29-37页 |
| 3.1 材料与方法 | 第29-30页 |
| 3.1.1 供试菌株和质粒 | 第29页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第29-30页 |
| 3.1.3 培养基 | 第30页 |
| 3.1.4 引物 | 第30页 |
| 3.2 方法 | 第30-33页 |
| 3.2.1 tha09974基因回复载体pKH-KO-G418-THA09974的构建示意图 | 第30-31页 |
| 3.2.2 目的基因的获得 | 第31-32页 |
| 3.2.3 载体pKH-KO-G418-THA09974的构建 | 第32-33页 |
| 3.3 结果与分析 | 第33-35页 |
| 3.3.1 tha09974基因、启动子及终止子序列的获得 | 第33-34页 |
| 3.3.2 tha09974基因表达盒的构建 | 第34-35页 |
| 3.4 讨论 | 第35-37页 |
| 第四章 tha09974基因回复株的构建 | 第37-53页 |
| 4.1 材料 | 第37-38页 |
| 4.1.1 供试菌株 | 第37页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第37页 |
| 4.1.3 供试培养基 | 第37-38页 |
| 4.1.4 引物 | 第38页 |
| 4.2 方法 | 第38-44页 |
| 4.2.1 tha09974基因在THA09974~-和TH-33 中存在状态的验证 | 第38-39页 |
| 4.2.2 原生质体转化法步骤 | 第39页 |
| 4.2.3 THA09974~(+/- )的筛选和分子验证 | 第39页 |
| 4.2.4 THA09974~(+/-)的RT-PCR验证 | 第39-40页 |
| 4.2.5 绝对荧光定量检测TH-33 菌株和THA09974~(+/-)菌株的拷贝数 | 第40-44页 |
| 4.3 结果与分析 | 第44-52页 |
| 4.3.1 tha09974基因在THA09974~-和TH-33 中存在状态的验证 | 第44-45页 |
| 4.3.2 THA09974~(+/- )的筛选和分子验证 | 第45-47页 |
| 4.3.3 绝对荧光定量计算TH-33 及THA09974~(+/-)拷贝数 | 第47-52页 |
| 4.3.3.1 载体pT-THGA1的构建和验证 | 第47页 |
| 4.3.3.2 载体pBlue-THA09974的构建与验证 | 第47-52页 |
| 4.4 讨论 | 第52-53页 |
| 第五章 THA09974对菌株生物学特性影响研究 | 第53-60页 |
| 5.1 材料与方法 | 第53-55页 |
| 5.1.1 菌株 | 第53页 |
| 5.1.2 培养基及主要试剂配方 | 第53页 |
| 5.1.3 方法 | 第53-54页 |
| 5.1.4 THA09974对菌株果胶酶的影响 | 第54-55页 |
| 5.2 结论 | 第55-58页 |
| 5.2.1 THA09974转录因子对菌株生长速度的影响 | 第55页 |
| 5.2.2 THA09974转录因子对菌株生物量形成的影响 | 第55-56页 |
| 5.2.3 THA09974转录因子对菌株产孢的影响 | 第56页 |
| 5.2.4 THA09974转录因子对菌落形态和分生孢子梗形态的影响 | 第56-57页 |
| 5.2.5 THA09974转录因子对果胶酶产量的影响 | 第57-58页 |
| 5.3 讨论 | 第58-60页 |
| 第六章 THA09974对哈茨木霉抗逆性的影响 | 第60-69页 |
| 6.1 材料与方法 | 第60-62页 |
| 6.1.1 菌株 | 第60页 |
| 6.1.2 培养基及主要试剂配方 | 第60页 |
| 6.1.3 方法 | 第60-62页 |
| 6.2 结果与分析 | 第62-67页 |
| 6.2.1 THA09974转录因子在不同Cu~(2+)浓度下对菌株菌落形态的影响 | 第62-63页 |
| 6.2.2 THA09974转录因子在不同Cu~(2+)浓度下对TH-33、THA09974~-、THA09974~(+/- )菌株生长速度的影响 | 第63页 |
| 6.2.3 THA09974转录因子在铜胁迫下对菌株生物量的影响 | 第63页 |
| 6.2.4 THA09974转录因子对菌株产孢的影响 | 第63-64页 |
| 6.2.5 TH-33、THA09974~-、THA09974~(+/-) 菌株在不同H_2O_2浓度下的菌落形态比较 | 第64-65页 |
| 6.2.6 THA09974转录因子在不同浓度H_2O_2下对菌株生长的影响 | 第65-66页 |
| 6.2.7 不同浓度的H_2O_2下THA09974转录因子菌株产生物量的影响 | 第66页 |
| 6.2.8 THA09974转录因子对菌株产孢的影响 | 第66-67页 |
| 6.3 讨论 | 第67-69页 |
| 第七章 THA09974对哈茨木霉拮抗特性的影响 | 第69-75页 |
| 7.1 材料与方法 | 第69-74页 |
| 7.1.1 菌株 | 第69页 |
| 7.1.2 培养基及主要试剂配方 | 第69-70页 |
| 7.1.3 方法 | 第70-71页 |
| 7.1.4 THA09974转录因子对菌株拮抗特性的影响 | 第71-72页 |
| 7.1.5 TH-33、THA09974~-、THA09974~(+/-)纤维素酶初筛 | 第72-73页 |
| 7.1.6 TH-33、THA09974~-、THA09974~(+/- )纤维素酶标准曲线的建立 | 第73页 |
| 7.1.7 THA09974转录因子对菌株纤维素酶产量的影响 | 第73-74页 |
| 7.2 讨论 | 第74-75页 |
| 第八章 全文总结 | 第75-77页 |
| 参考文献 | 第77-83页 |
| 附录 | 第83-85页 |
| 致谢 | 第85-86页 |
| 作者简介 | 第86页 |
