| 摘要 | 第6-7页 |
| abstract | 第7页 |
| 第一章 引言 | 第11-19页 |
| 1.1 苏云金芽胞杆菌概述 | 第11-12页 |
| 1.1.1 苏云金芽胞杆菌的特征 | 第11页 |
| 1.1.2 苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白 | 第11-12页 |
| 1.2 苏云金芽胞杆菌在农业生产应用中面临的问题 | 第12-13页 |
| 1.2.1 改良制剂提高Bt田间应用稳定性的策略 | 第12-13页 |
| 1.2.2 通过分子遗传改良提高Bt田间应用稳定性的策略 | 第13页 |
| 1.3 细菌肽聚糖水解酶及其生理功能 | 第13-16页 |
| 1.3.1 肽聚糖水解酶的种类 | 第13-14页 |
| 1.3.2 参与细胞壁生长相关水解酶基因 | 第14-15页 |
| 1.3.3 参与子细胞分离的基因 | 第15页 |
| 1.3.4 参与芽胞形成的基因 | 第15-16页 |
| 1.3.5 参与芽胞萌发相关基因 | 第16页 |
| 1.3.6 参与母细胞裂解基因 | 第16页 |
| 1.4 蜡样芽胞杆菌族肽聚糖水解酶 | 第16-17页 |
| 1.5 水解酶的杀菌活性概述 | 第17-18页 |
| 1.6 细菌细胞程序性死亡（Programmed cell death, PCD） | 第18页 |
| 1.7 研究内容、目的和意义 | 第18-19页 |
| 1.7.1 研究内容 | 第18页 |
| 1.7.2 目的与意义 | 第18-19页 |
| 第二章 材料与方法 | 第19-29页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-23页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第19-20页 |
| 2.1.2 生化试剂 | 第20-22页 |
| 2.1.3 抗生素 | 第22页 |
| 2.1.4 常用培养基 | 第22页 |
| 2.1.5 溶液与缓冲液 | 第22-23页 |
| 2.2 实验仪器 | 第23-24页 |
| 2.3 实验方法 | 第24-29页 |
| 2.3.1 PCR扩增 | 第24页 |
| 2.3.2 总RNA的提取 | 第24页 |
| 2.3.3 总RNA提取后的抽滤 | 第24-25页 |
| 2.3.4 反转录PCR（RT-PCR）和 5? RACE | 第25页 |
| 2.3.5 同源重组构建突变体 | 第25-26页 |
| 2.3.6 β-半乳糖苷酶活性检测 | 第26页 |
| 2.3.7 大肠杆菌中蛋白表达与纯化 | 第26-27页 |
| 2.3.8 Bt细胞壁的制备 | 第27页 |
| 2.3.9 细胞壁结合实验 | 第27页 |
| 2.3.10 水解细胞壁 | 第27页 |
| 2.3.11 激光共聚焦显微镜观察 | 第27-28页 |
| 2.3.12 芽胞形成率 | 第28页 |
| 2.3.13 Cry1Ac晶体蛋白定量 | 第28页 |
| 2.3.14 光学显微镜观察 | 第28页 |
| 2.3.15 CwlC蛋白水解活细胞的细胞壁 | 第28-29页 |
| 第三章 结果与分析 | 第29-54页 |
| 3.1 候选水解酶的生物信息分析 | 第29页 |
| 3.2 候选水解酶基因HD73_RS07140和HD73_RS11745转录活性分析 | 第29-31页 |
| 3.3 候选水解酶基因cwlC的转录调控分析 | 第31-34页 |
| 3.3.1 cwlC基因转录单元分析 | 第31-32页 |
| 3.3.2 cwlC基因的转录调控 | 第32-34页 |
| 3.4 CwlC的生物学功能分析 | 第34-47页 |
| 3.4.1 cwlC基因缺失菌株表型分析 | 第34-41页 |
| 3.4.2 Bt cwlC基因的缺失对芽胞形成率和晶体蛋白产量的影响 | 第41-42页 |
| 3.4.3 CwlC蛋白表达与纯化 | 第42页 |
| 3.4.4 CwlC蛋白与细胞壁的结合能力分析 | 第42-44页 |
| 3.4.5 CwlC蛋白水解细胞壁活性分析 | 第44页 |
| 3.4.6 CwlC水解酶水解活细胞活性分析 | 第44-47页 |
| 3.5 Bt CwlC分泌途径探究 | 第47-51页 |
| 3.6 Bt CwlC蛋白在芽胞杆菌中的保守分析 | 第51-52页 |
| 3.7 Bc族代表菌株中的cwl C基因查找及缺失突变体构建 | 第52-54页 |
| 3.7.1 cwlC在Bc族代表菌株中的保守分析 | 第52页 |
| 3.7.2 cwlC基因缺失载体的构建 | 第52-54页 |
| 第四章 讨论 | 第54-56页 |
| 4.1 母细胞裂解水解酶的比较 | 第54页 |
| 4.2 CwlC蛋白水解细胞活性 | 第54-55页 |
| 4.3 Bt细胞母细胞裂解的细胞学分析 | 第55-56页 |
| 第五章 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 作者简历 | 第69页 |
