| 致谢 | 第4-5页 |
| 资助资金 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 绪论 | 第15-28页 |
| 1.1 中药药效物质发现研究概况 | 第15-16页 |
| 1.2 具有聚集诱导发光现象的荧光探针设计及其应用 | 第16-22页 |
| 1.2.1 具有AIE性质的分子 | 第17-18页 |
| 1.2.2 AIE分子的机制研究 | 第18-19页 |
| 1.2.3 具有AIE性质的分子在荧光检测中的应用 | 第19-22页 |
| 1.2.4 具有AIE性质的分子在细胞成像中的应用 | 第22页 |
| 1.3 SIRT1蛋白的研究进展 | 第22-26页 |
| 1.3.1 SIRT1蛋白的生理活性 | 第22-23页 |
| 1.3.2 SIRT1抑制剂的应用 | 第23-24页 |
| 1.3.3 SIRT1激动剂的研究进展 | 第24-25页 |
| 1.3.4 组蛋白去乙酰化酶活性的检测和调节剂的筛选方法 | 第25-26页 |
| 1.4 本论文研究内容 | 第26-28页 |
| 第二章 具有AIE特性的SIRT1荧光探针设计 | 第28-41页 |
| 2.1 设计思路 | 第28-29页 |
| 2.2 材料与仪器 | 第29页 |
| 2.2.1 实验试剂 | 第29页 |
| 2.2.2 实验仪器 | 第29页 |
| 2.3 AIE荧光探针TPE-GK(Ac)YDD的合成 | 第29-31页 |
| 2.4 AIE荧光探针TPE-GK(Ac)YDD的鉴定 | 第31页 |
| 2.5 AIE荧光探针TPE-GK(Ac)YDD的“开-关”效应研究 | 第31-32页 |
| 2.5.1 SIRT1蛋白和赖氨酰肽链内切酶对荧光探针的荧光吸收能力的影响 | 第31-32页 |
| 2.5.2 不同探针水解产物比较 | 第32页 |
| 2.6 荧光探针用于SIRT1蛋白活性检测的方法学研究 | 第32-34页 |
| 2.6.1 反应体系缓冲液pH的考察 | 第32-33页 |
| 2.6.2 SIRT1蛋白与荧光强度的量效关系 | 第33页 |
| 2.6.3 荧光探针与荧光强度的量效关系 | 第33页 |
| 2.6.4 荧光探针与SIRT1蛋白的反应的酶动力曲线 | 第33页 |
| 2.6.5 荧光探针对SIRT1蛋白的检测灵敏度考察 | 第33页 |
| 2.6.6 荧光探针对SIRT1蛋白的胞外检测特异性考察 | 第33-34页 |
| 2.6.7 统计学分析 | 第34页 |
| 2.7 实验结果 | 第34-40页 |
| 2.7.1 荧光探针TPE-Gly-Lys(Ac)-Tyr-Asp-Asp的鉴定 | 第34-36页 |
| 2.7.2 SIRT1蛋白和赖氨酰肽链内切酶对荧光探针的荧光吸收能力的影响及相关产物分析 | 第36-37页 |
| 2.7.3 缓冲液溶液pH的考察 | 第37-38页 |
| 2.7.4 荧光强度与SIRT1蛋白浓度、荧光探针浓度的量效关系 | 第38页 |
| 2.7.5 荧光探针与SIRT1蛋白的反应的酶动力曲线 | 第38-39页 |
| 2.7.6 荧光探针对SIRT1蛋白的检测灵敏度和特异性考察 | 第39-40页 |
| 2.8 讨论与小结 | 第40-41页 |
| 第三章 基于AIE荧光探针的SIRT1调节剂筛选方法研究 | 第41-54页 |
| 3.1 研究思路 | 第41页 |
| 3.2 材料与仪器 | 第41-42页 |
| 3.2.1 细胞株来源 | 第41页 |
| 3.2.2 实验试剂 | 第41-42页 |
| 3.2.3 实验仪器 | 第42页 |
| 3.3 荧光探针TPE-GK(Ac)YDD在活细胞成像中的应用 | 第42-45页 |
| 3.3.1 MTT法检测荧光探针对心肌细胞活力的影响 | 第42-43页 |
| 3.3.2 荧光探针在H9c2细胞成像中的应用 | 第43页 |
| 3.3.3 荧光探针对SIRT1蛋白胞内检测特异性的考察 | 第43-44页 |
| 3.3.4 荧光探针在SIRT1蛋白敲除的大鼠间充质干细胞(rMSC)成像中的应用 | 第44-45页 |
| 3.3.5 荧光探针在活细胞筛选中的应用 | 第45页 |
| 3.4 荧光探针TPE-GK(Ac)YDD在体外筛选SIRT1调节剂中的应用 | 第45页 |
| 3.4.1 荧光探针在筛选SIRT1抑制剂中的应用 | 第45页 |
| 3.4.2 荧光探针在筛选SIRT1激动剂中的应用 | 第45页 |
| 3.5 荧光探针TPE-GK(Ac)YDD在筛选中药SIRT1调节剂中的应用 | 第45-47页 |
| 3.5.1 中药化合物库中SIRT1调节剂的筛选 | 第45-46页 |
| 3.5.2 中药中SIRT1激动剂的量效验证 | 第46-47页 |
| 3.6 统计学分析 | 第47页 |
| 3.7 实验结果 | 第47-52页 |
| 3.7.1 荧光探针TPE-GK(Ac)YDD对细胞增殖的影响 | 第47-48页 |
| 3.7.2 荧光探针TPE-GK(Ac)YDD在活细胞成像中的应用 | 第48-50页 |
| 3.7.3 荧光探针TPE-GK(Ac)YDD在活细胞筛选中的应用 | 第50-51页 |
| 3.7.4 荧光探针在筛选SIRT1激动剂和抑制剂中的应用 | 第51页 |
| 3.7.5 中药化合物库中SIRT1激动剂筛选结果及量效验证结果 | 第51-52页 |
| 3.8 讨论与小结 | 第52-54页 |
| 第四章 SIRT1激动剂的活性验证及心肌保护机制初探 | 第54-68页 |
| 4.1 研究背景 | 第54页 |
| 4.2 材料与仪器 | 第54-55页 |
| 4.2.1 细胞株来源 | 第54页 |
| 4.2.2 实验试剂 | 第54页 |
| 4.2.3 实验仪器 | 第54-55页 |
| 4.3 验证中药SIRT1激动剂对于S1RT1的激动作用 | 第55-57页 |
| 4.3.1 考察SIRT1激动剂对NAD~+/NADH比例的影响 | 第55页 |
| 4.3.2 考察SIRT1激动剂对细胞内S1RT1活性的影响 | 第55-56页 |
| 4.3.3 表面等离子共振 | 第56-57页 |
| 4.4 SIRT1激动剂心肌细胞氧化损伤的保护作用 | 第57-61页 |
| 4.4.1 SIRT1激动剂对心肌细胞内ATP含量和活性氧含量的影响 | 第57-58页 |
| 4.4.2 SIRT1激动剂对心肌细胞抗氧化酶的影响 | 第58页 |
| 4.4.3 SIRT1激动剂对心肌细胞基础氧呼吸的影响 | 第58-59页 |
| 4.4.4 RT-PCR法检测SIRT1激动剂对心肌细胞mtDNA含量的影响 | 第59-60页 |
| 4.4.5 免疫共沉淀法测定SIRT1激动剂对细胞内相关蛋白表达量的影响 | 第60-61页 |
| 4.6 统计学分析 | 第61页 |
| 4.7 实验结果 | 第61-66页 |
| 4.7.1 SIRT1激动剂对细胞内SIRT1活性的影响 | 第61-62页 |
| 4.7.2 表面等离子共振结果 | 第62-63页 |
| 4.7.3 SIRT1激动剂对于细胞内ATP含量和自由氧水平的影响 | 第63-64页 |
| 4.7.4 SIRT1激动剂对线粒体内抗氧化酶活性的影响 | 第64页 |
| 4.7.5 SIRT1激动剂对氧呼吸的影响 | 第64-65页 |
| 4.7.6 SIRT1激动剂对mtDNA含量的影响 | 第65页 |
| 4.7.7 SIRT1激动剂对细胞内相关蛋白表达量的影响 | 第65-66页 |
| 4.8 总结与讨论 | 第66-68页 |
| 第五章 总结和展望 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-74页 |
| 作者简历 | 第74页 |
