| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 巴西橡胶树钙依赖蛋白激酶基因HbCDPK的克隆及其在抗病中的初步功能鉴定 | 第12-54页 |
| 1 前言 | 第12-23页 |
| 1.1 巴西橡胶树主要病害及危害 | 第12-13页 |
| 1.2 植物抗病性 | 第13-16页 |
| 1.2.1 植物抗病机制 | 第13-14页 |
| 1.2.2 植物抗病信号转导途径 | 第14-16页 |
| 1.3 活性氧(ROS)与植物抗病性 | 第16-18页 |
| 1.3.1 植物ROS的产生和消除 | 第16-17页 |
| 1.3.2 ROS在植物抗病中的作用 | 第17-18页 |
| 1.4 钙信号与植物抗病性 | 第18页 |
| 1.5 钙依赖蛋白激酶(CDPK)研究进展 | 第18-21页 |
| 1.5.1 CDPK的结构特点及其生化性质 | 第19-20页 |
| 1.5.2 CDPK在植物钙信号转导中的作用 | 第20页 |
| 1.5.3 CDPK在植物先天免疫反应中的作用 | 第20-21页 |
| 1.6 本研究的目的和意义 | 第21-22页 |
| 1.7 技术路线 | 第22-23页 |
| 2 实验材料与方法 | 第23-33页 |
| 2.1 实验材料 | 第23页 |
| 2.1.1 植物材料和菌株 | 第23页 |
| 2.1.2 实验药品和试剂 | 第23页 |
| 2.1.3 质粒载体 | 第23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-33页 |
| 2.2.1 橡胶树不同组织总RNA提取 | 第23-24页 |
| 2.2.2 RT-PCR扩增HbCDPK基因 | 第24-25页 |
| 2.2.3 HbCDPK基因的生物信息学分析 | 第25页 |
| 2.2.4 炭疽病菌接种橡胶树叶片 | 第25页 |
| 2.2.5 白粉病菌接种橡胶树叶片 | 第25页 |
| 2.2.6 不同信号分子对橡胶树的处理 | 第25-26页 |
| 2.2.7 RT-PCR半定量分析 | 第26页 |
| 2.2.8 载体的构建 | 第26-27页 |
| 2.2.9 氯化铯密度梯度离心大量提取质粒 | 第27页 |
| 2.2.10 橡胶树叶肉原生质体的制备 | 第27-28页 |
| 2.2.11 flg22和chitin处理橡胶树叶肉原生质体 | 第28页 |
| 2.2.12 橡胶树叶肉原生质体的转化 | 第28页 |
| 2.2.13 原生质体蛋白质提取 | 第28-29页 |
| 2.2.14 western blot检测 | 第29页 |
| 2.2.15 HbCDPK的活性氧检测 | 第29-30页 |
| 2.2.16 HbCDPK的亚细胞定位 | 第30页 |
| 2.2.17 农杆菌法转化拟南芥 | 第30-33页 |
| 2.2.17.1 拟南芥植物的培养 | 第30页 |
| 2.2.17.2 电转化农杆菌感受态细胞的制备 | 第30页 |
| 2.2.17.3 植物表达载体转化农杆菌感受态细胞 | 第30-31页 |
| 2.2.17.4 农杆菌转化子的鉴定 | 第31页 |
| 2.2.17.5 浸泡注柱头法转化拟南芥 | 第31页 |
| 2.2.17.6 抗性植物的筛选 | 第31-32页 |
| 2.2.17.7 再生植株的Western Blotting检测 | 第32-33页 |
| 3 结果与分析 | 第33-44页 |
| 3.1 巴西橡胶树钙依赖蛋白激酶基因(HbCDPK)的克隆及生物信息学分析 | 第33-37页 |
| 3.1.1 橡胶树叶片总RNA提取结果 | 第33页 |
| 3.1.2 HbCDPK基因片段全长的克隆 | 第33-34页 |
| 3.1.3 HbCDPK基因的生物信息学分析 | 第34-37页 |
| 3.2 HbCDPK在橡胶树不同组织中的表达分析 | 第37页 |
| 3.3 HbCDPK基因对橡胶树胶胞炭疽病菌侵染的应答 | 第37页 |
| 3.4 HbCDPK基因对橡胶树白粉病菌的应答 | 第37-38页 |
| 3.5 HbCDPK基因对不同抗病信号分子的应答 | 第38-39页 |
| 3.6 HbCDPK基因对不同PAMPs的应答 | 第39-40页 |
| 3.7 HbCDPK对橡胶树细胞活性氧积累的影响 | 第40-41页 |
| 3.7.1 HbCDPK的原生质体瞬时表达载体构建 | 第40页 |
| 3.7.2 HbCDPK-Flag融合蛋白在原生质体细胞中的表达 | 第40页 |
| 3.7.3 HbCDPK对橡胶树细胞内活性氧水平的影响 | 第40-41页 |
| 3.8 HbCDPK在橡胶树中的亚细胞定位 | 第41-42页 |
| 3.8.1 亚细胞定位载体pUC19-35s-HbCDPK-GFP的构建 | 第41页 |
| 3.8.2 HbCDPK蛋白的亚细胞定位 | 第41-42页 |
| 3.9 转HbCDPK基因拟南芥株系的获得和抗病性分析 | 第42-44页 |
| 3.9.1 HbCDPK植物表达载体的构建及鉴定 | 第42-43页 |
| 3.9.2 植物表达载体pCAMBIA-99-1-HbCDPK-3HA农杆菌转化子的鉴定 | 第43页 |
| 3.9.3 转HbCDPK基因拟南芥株系的鉴定 | 第43-44页 |
| 4 结论 | 第44-45页 |
| 5 讨论 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-54页 |
| 第二章 巴西橡胶树铁螯合物还原酶基因HbFRO的克隆及其在抗病中的初步功能分析 | 第54-73页 |
| 1 前言 | 第54-57页 |
| 1.1 铁在植物生长发育中的作用 | 第54页 |
| 1.2 植物的铁吸收机制 | 第54-55页 |
| 1.3 铁螯合物还原酶基因(FRO)在植物铁吸收过程中的作用 | 第55页 |
| 1.4 铁与植物的抗病性 | 第55-56页 |
| 1.5 本研究的目的和意义 | 第56-57页 |
| 2 实验材料与方法 | 第57-59页 |
| 2.1 实验材料 | 第57页 |
| 2.2 实验方法 | 第57-59页 |
| 2.2.1 橡胶树叶片总RNA提取 | 第57页 |
| 2.2.2 RT-PCR扩增FRO基因 | 第57页 |
| 2.2.3 HbFRO基因的生物信息学分析 | 第57页 |
| 2.2.4 炭疽病菌和白粉病菌接种橡胶树叶片 | 第57页 |
| 2.2.5 植物外源激素处理橡胶树叶片 | 第57页 |
| 2.2.6 RT-PCR半定量分析 | 第57-58页 |
| 2.2.7 载体的构建 | 第58页 |
| 2.2.8 氯化铯密度梯度离心大量提取质粒 | 第58页 |
| 2.2.9 橡胶树叶肉原生质体的制备以及转化 | 第58页 |
| 2.2.10 flg22和chitin处理橡胶树叶肉原生质体 | 第58页 |
| 2.2.11 橡胶树叶肉原生质体蛋白的提取和western blot检测 | 第58页 |
| 2.2.12 HbFRO的活性氧检测以及亚细胞定位 | 第58页 |
| 2.2.17 农杆菌法转化拟南芥 | 第58-59页 |
| 3 结果与分析 | 第59-69页 |
| 3.1 巴西橡胶树铁螯合物还原酶基因(HbFRO)的克隆及生物信息学分析 | 第59-62页 |
| 3.1.1 HbFRO基因片段全长的克隆 | 第59页 |
| 3.1.2 HbFRO基因的生物信息学分析 | 第59-62页 |
| 3.2 HbFRO在橡胶树不同组织中的表达分析 | 第62页 |
| 3.3 HbFRO基因对橡胶树胶胞炭疽病菌侵染的应答 | 第62-63页 |
| 3.4 HbFRO基因对橡胶树白粉病菌的应答 | 第63页 |
| 3.5 HbFRO基因对不同抗病信号分子的应答 | 第63-64页 |
| 3.6 HbFRO基因对不同PAMPs的应答 | 第64-65页 |
| 3.7 HbFRO对橡胶树细胞活性氧积累的影响 | 第65-66页 |
| 3.7.1 HbFRO的原生质体瞬时表达载体构建 | 第65-66页 |
| 3.7.2 HbFRO对橡胶树细胞内活性氧水平的影响 | 第66页 |
| 3.8 HbFRO在橡胶树中的亚细胞定位 | 第66-67页 |
| 3.8.1 亚细胞定位载体pUC19-35s-HbFRO-GFP的构建 | 第66-67页 |
| 3.8.2 HbFRO蛋白的亚细胞定位 | 第67页 |
| 3.9 转HbFRO基因拟南芥株系的获得和抗病性分析 | 第67-69页 |
| 3.9.1 HbFRO植物表达载体的构建及鉴定 | 第67-68页 |
| 3.9.2 植物表达载体pCAMBIA-99-1-HbFRO-3HA农杆菌转化子的鉴定 | 第68页 |
| 3.9.3 转HbFRO基因拟南芥株系的鉴定 | 第68-69页 |
| 4 结论 | 第69-70页 |
| 5 讨论 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-73页 |
| 附录 | 第73-79页 |
| 附录一 论文中所用引物序列 | 第73页 |
| 附录二 cDNA第一链的合成 | 第73-74页 |
| 附录三 分离胶及浓缩胶的制备 | 第74页 |
| 附录四 原生质体制备过程中各种试剂 | 第74-76页 |
| 附录五 本实验所用仪器及器材 | 第76-77页 |
| 附录六 凝胶片段回收 | 第77页 |
| 附录七 转化反应 | 第77-78页 |
| 附录八 碱裂解法提取质粒 | 第78-79页 |
| 致谢 | 第79页 |
