CPV VP2截短基因的克隆表达及双抗体夹心ELISA检测方法的建立与应用
| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-16页 |
| 第一章 绪论 | 第16-23页 |
| ·研究目的和意义 | 第16页 |
| ·国内外研究现状 | 第16-21页 |
| ·犬细小病毒的分子结构 | 第16-17页 |
| ·犬细小病毒病的流行病学 | 第17-18页 |
| ·犬细小病毒病的临床症状及剖检病理变化 | 第18-19页 |
| ·犬细小病毒病的诊断 | 第19-21页 |
| ·犬细小病毒病的预防 | 第21页 |
| ·研究内容与方法 | 第21-23页 |
| ·VP2截短基因蛋白表达 | 第21-22页 |
| ·双抗体夹心ELISA抗原检测方法的建立和应用 | 第22-23页 |
| 第二章 VP2蛋白具有免疫原性片段的表达及鉴定 | 第23-37页 |
| ·材料和方法 | 第23-29页 |
| ·毒株、载体和血清 | 第23页 |
| ·主要试剂 | 第23页 |
| ·主要溶液配制 | 第23-25页 |
| ·主要仪器设备 | 第25-26页 |
| ·引物设计 | 第26页 |
| ·基因扩增 | 第26-27页 |
| ·基因克隆 | 第27页 |
| ·重组表达质粒的构建及鉴定 | 第27页 |
| ·重组菌诱导表达及SDS-PAGE鉴定 | 第27-28页 |
| ·重组蛋白的纯化及SDS-PAGE鉴定 | 第28页 |
| ·Western blotting鉴定 | 第28-29页 |
| ·蛋白定量 | 第29页 |
| ·间接ELISA检测两种蛋白的抗原性 | 第29页 |
| ·间接ELISA检测两种蛋白特异性 | 第29页 |
| ·结果 | 第29-36页 |
| ·PCR扩增 | 第29-30页 |
| ·基因克隆及鉴定 | 第30-31页 |
| ·重组表达质粒的构建及鉴定 | 第31页 |
| ·重组菌诱导表达及SDS-PAGE鉴定 | 第31-32页 |
| ·重组菌可溶性分析 | 第32页 |
| ·重组蛋白的纯化及SDS-PAGE电泳 | 第32-33页 |
| ·Western blotting鉴定 | 第33-34页 |
| ·蛋白定量 | 第34页 |
| ·间接ELISA检测两种蛋白抗原性 | 第34-35页 |
| ·间接ELISA检测两种蛋白特异性 | 第35-36页 |
| ·讨论 | 第36-37页 |
| 第三章 双抗体夹心ELISA检测方法的建立与应用 | 第37-53页 |
| ·材料与方法 | 第37-43页 |
| ·病毒、试验动物、细胞株 | 第37页 |
| ·主要试剂和器材 | 第37-38页 |
| ·溶液配制 | 第38-39页 |
| ·病毒培养及纯化 | 第39-40页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第40页 |
| ·CPV单抗细胞培养、小鼠腹水制备 | 第40页 |
| ·抗体的纯化 | 第40-41页 |
| ·双抗体夹心ELISA方法的建立 | 第41-43页 |
| ·结果 | 第43-51页 |
| ·病毒增殖 | 第43页 |
| ·兔抗CPV多抗抗体效价的测定 | 第43-44页 |
| ·小鼠腹水抗体效价的测定 | 第44页 |
| ·兔抗CPV多抗和抗CPV单抗纯化效果 | 第44-46页 |
| ·双抗体夹心ELISA方法的建立 | 第46-49页 |
| ·判定标准的确定 | 第49-50页 |
| ·重复性试验 | 第50页 |
| ·特异性试验 | 第50-51页 |
| ·灵敏性试验 | 第51页 |
| ·样本检测 | 第51页 |
| ·讨论 | 第51-53页 |
| 第四章 总结 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 作者简历 | 第59页 |
