| 目录 | 第1-6页 |
| 摘要 | 第6-9页 |
| Abstract | 第9-12页 |
| 缩略语表 | 第12-13页 |
| 前言 | 第13-20页 |
| 第一部分 包被抗原和夹心抗原在原核系统中的表达纯化 | 第20-46页 |
| 一、前言 | 第20页 |
| 二、材料与方法 | 第20-43页 |
| 1. 材料 | 第20-22页 |
| ·菌株与质粒载体 | 第20-21页 |
| ·主要试剂 | 第21页 |
| ·工具酶及抗体 | 第21页 |
| ·主要仪器设备 | 第21-22页 |
| 2. 实验方法 | 第22-34页 |
| ·丙肝抗原编码序列的扩增 | 第22-23页 |
| ·丙肝抗原编码序列PCR产物的T-A克隆重组质粒的构建 | 第23-25页 |
| ·夹心抗原编码质粒pET43.1a-TRX-C44P质粒的构建 | 第25-26页 |
| ·包被抗原C44P的表达纯化及抗原性鉴定 | 第26-28页 |
| ·丙肝抗原蛋白C44P的表达纯化 | 第28-31页 |
| ·夹心抗原TRX-C44P的表达纯化与抗原性鉴定 | 第31-34页 |
| 3. 结果 | 第34-43页 |
| ·对pET11d-C44P中丙肝抗原编码序列的PCR扩增 | 第34页 |
| ·丙肝抗原编码序列PCR产物T-A克隆重组质粒的构建 | 第34-35页 |
| ·重组质粒pET43.1a-TRX-C44P的构建 | 第35-38页 |
| ·Western blotting对丙肝抗原蛋白的抗原性鉴定 | 第38页 |
| ·阳离子交换色谱对C44P初步纯化的SDS-PAGE鉴定 | 第38-39页 |
| ·凝胶过滤色谱对C44P进一步提纯的SDS-PAGE鉴定 | 第39-40页 |
| ·小量表达的TRX-C44P蛋白SDS-PAGE鉴定 | 第40页 |
| ·Western blotting对融合蛋白TRX-HCV的抗原性进行鉴定 | 第40-41页 |
| ·SDS-PAGE鉴定TRX-C44P表达形式 | 第41-42页 |
| ·TRX-C44P的纯化条件的优化 | 第42-43页 |
| ·阳离子交换色谱纯化TRX-C44P的SDS-PAGE鉴定 | 第43页 |
| 讨论 | 第43-46页 |
| 第二部分 双抗原接心法和间接法检测丙肝病毒抗体的建立和方法学评价 | 第46-79页 |
| 一、前言 | 第46页 |
| 二、材料与方法 | 第46-56页 |
| 1. 材料 | 第46-47页 |
| ·血清学标本 | 第46-47页 |
| ·试剂与工具酶 | 第47页 |
| ·实验仪器 | 第47页 |
| 2. 实验方法 | 第47-50页 |
| ·间接法的建立 | 第47-48页 |
| ·双抗原夹心法的建立 | 第48-50页 |
| 3. 间接法和双抗原夹心ELISA检测效果评价 | 第50-56页 |
| ·160献血筛查不合格样品的检测 | 第50-52页 |
| ·对600份遂宁市病毒性肝炎血清流行病学样品检测 | 第52页 |
| ·HCV RNA定量检测(PCR-荧光探针法)补充确证试验 | 第52-56页 |
| 三、实验结果 | 第56-73页 |
| 1. 间接法的建立 | 第56-61页 |
| ·包被抗原和酶标记二抗的大致工作浓度的确定 | 第56页 |
| ·不同封闭液和样品稀释液对检测的影响 | 第56-57页 |
| ·不同样品孵育时间和酶标二抗孵育时间的影响 | 第57-60页 |
| ·棋盘滴定确定包被抗原和酶标二抗最适工作浓度 | 第60-61页 |
| 2. 双抗原夹心法的建立 | 第61-70页 |
| ·初步确定包被抗原、夹心抗原和抗-TRX的工作浓度 | 第61-63页 |
| ·最佳血清用量的影响 | 第63-64页 |
| ·两步法和三步法对试验的影响 | 第64-66页 |
| ·最优孵育条件的选择 | 第66-68页 |
| ·不同包被浓度的检测结果 | 第68-69页 |
| ·棋盘滴定确定夹心抗原和抗-TRX稀释度的最优工作浓度 | 第69-70页 |
| 3. 间接法和双抗原夹心ELISA检测效果评价 | 第70-73页 |
| ·160份献血筛查不合格样品的检测结果 | 第70页 |
| ·遂宁市病毒性肝炎流调样品的检测结果 | 第70-71页 |
| ·HCV RNA定量检测(PCR-荧光探针法)补充确证试验结果 | 第71-72页 |
| ·建立的夹心法和间接法的统计学指标比较 | 第72-73页 |
| 讨论 | 第73-79页 |
| 小结 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-84页 |
| 综述 | 第84-94页 |
| 参考文献 | 第91-94页 |
| 致谢 | 第94页 |
