| 中文摘要 | 第6-8页 |
| 英文摘要 | 第8页 |
| 第一章 前言 | 第10-25页 |
| 1 微生物来源的植酸酶的酶学性质 | 第10-12页 |
| 1.1 酸性植酸酶的酶学性质 | 第11页 |
| 1.2 中性植酸酶的酶学性质 | 第11-12页 |
| 2 微生物植酸酶的分子结构与空间构象 | 第12-14页 |
| 3 植酸酶的催化机制 | 第14-15页 |
| 4 植酸酶基因的克隆与表达 | 第15-19页 |
| 4.1 植酸酶基因的克隆 | 第15-16页 |
| 4.2 植酸酶基因的表达 | 第16-19页 |
| 5 植酸酶热稳定性研究进展 | 第19-21页 |
| 5.1 酶分子的生物修饰 | 第19页 |
| 5.2 运用蛋白质工程方法改造酶分子的结构和性质 | 第19-21页 |
| 5.3 改变酶的环境条件提高植酸酶的热稳定性 | 第21页 |
| 5.4 改进生产操作方法间接提高酶的热稳定性 | 第21页 |
| 6 植酸酶的应用研究进展 | 第21-24页 |
| 6.1 植酸酶在饲料工业中的应用 | 第21-23页 |
| 6.2 植酸酶在食品工业中的应用 | 第23页 |
| 6.3 植酸酶在医学中的应用 | 第23-24页 |
| 7 研究目的 | 第24-25页 |
| 第二章 出发菌株的酶学特性分析 | 第25-29页 |
| 1 试验材料与方法 | 第25-26页 |
| 2 结果与分析 | 第26-29页 |
| 2.1 标准磷溶液曲线 | 第26-27页 |
| 2.2 淀粉液化芽孢杆菌产植酸酶的活性 | 第27页 |
| 2.3 温度对淀粉液化芽孢杆菌植酸酶活性的影响 | 第27页 |
| 2.4 pH对淀粉液化芽孢杆菌植酸酶活性的影响 | 第27-29页 |
| 第三章 淀粉液化芽孢杆菌植酸酶基因克隆及序列分析 | 第29-47页 |
| 1 基因克隆策略 | 第29-30页 |
| 2 试验材料 | 第30-31页 |
| 3 试验方法 | 第31-37页 |
| 4 试验结果 | 第37-47页 |
| 4.1 基因组DNA提取 | 第37页 |
| 4.2 TD-PCR结果 | 第37页 |
| 4.3 阳性克隆子的筛选与鉴定 | 第37-38页 |
| 4.4 核苷酸序列分析及其与其它植酸酶基因的同源性 | 第38-47页 |
| 第四章 淀粉液化芽孢杆菌植酸酶基因在大肠杆菌中的表达 | 第47-51页 |
| 1 表达策略 | 第47-48页 |
| 2 试验材料 | 第48页 |
| 3 试验方法 | 第48-49页 |
| 4 试验结果 | 第49-51页 |
| 4.1 含植酸酶基因重组克隆载体双酶切 | 第49页 |
| 4.2 pET-30a(+)表达载体的双酶切 | 第49-50页 |
| 4.3 植酸酶基因与pET-30a(+)表达载体的连接和阳性重组子的筛选 | 第50页 |
| 4.4 植酸酶阳性表达子的酶活测定 | 第50-51页 |
| 第五章 淀粉液化芽孢杆菌植酸酶基因在毕赤酵母中的表达 | 第51-63页 |
| 1 表达策略 | 第51-52页 |
| 2 试验材料 | 第52-54页 |
| 3 试验方法 | 第54-59页 |
| 3.1 用于表达的淀粉液化芽孢杆菌植酸酶基因的PCR扩增 | 第54页 |
| 3.2 割胶回收 | 第54页 |
| 3.3 重组质粒的酶切 | 第54-55页 |
| 3.4 表达载体的酶切 | 第55页 |
| 3.5 连接 | 第55页 |
| 3.6 感受态细胞的制备和转化 | 第55页 |
| 3.7 阳性质粒的筛选 | 第55页 |
| 3.8 重组质粒的大量提取 | 第55-56页 |
| 3.9 重组质粒的线性化 | 第56页 |
| 3.10 酶切后的质粒浓缩 | 第56-57页 |
| 3.11 酵母菌株GS115感受态细胞的制备 | 第57页 |
| 3.12 电击转化 | 第57页 |
| 3.13 酵母重组子的筛选 | 第57-59页 |
| 4 结果与分析 | 第59-63页 |
| 4.1 含SnaBI和NotI限制性内切酶位点的植酸酶全长基因的TD-PCR扩增 | 第59页 |
| 4.2 阳性克隆的筛选与鉴定 | 第59-60页 |
| 4.3 表达载体pPIC9K的SnaBI和NotI双酶切 | 第60页 |
| 4.4 含中性植酸酶基因重组克隆载体的SnaBI和NotI双酶切 | 第60页 |
| 4.5 植酸酶基因与pPIC9K表达载体连接和大肠杆菌阳性重组子的筛选 | 第60-61页 |
| 4.6 质粒pPIC9K BAPK Vector的大量提取 | 第61页 |
| 4.7 重组质粒的线性化 | 第61页 |
| 4.8 酵母的电击转化及重组子筛选 | 第61-63页 |
| 第六章 不同表达系统植酸酶产酶量和酶学特性研究 | 第63-73页 |
| 1 试验材料 | 第63-64页 |
| 2 试验方法 | 第64-67页 |
| 2.1 基因工程菌的培养 | 第64-65页 |
| 2.2 植酸酶的分离纯化 | 第65页 |
| 2.3 植酸酶的活性测定 | 第65页 |
| 2.4 植酸酶的特性分析 | 第65-66页 |
| 2.5 SDS-PAGE凝胶电泳 | 第66-67页 |
| 3 试验结果 | 第67-73页 |
| 3.1 不同表达系统植酸酶的活性 | 第67-68页 |
| 3.2 两种不同表达系统植酸酶BAPE与BAPK的SDS-PAGE电泳 | 第68-69页 |
| 3.3 重组酵母植酸酶表达量与诱导培养时间的关系 | 第69页 |
| 3.4 温度对植酸酶活性的影响 | 第69-70页 |
| 3.5 pH对植酸酶活性的影响 | 第70-71页 |
| 3.6 植酸酶的热稳定性 | 第71页 |
| 3.7 植酸酶的pH稳定性 | 第71-73页 |
| 第七章 分析讨论 | 第73-79页 |
| 1 淀粉液化芽孢杆菌植酸酶基因的克隆与序列分析 | 第73页 |
| 2 淀粉液化芽孢杆菌植酸酶基因的异源表达 | 第73-75页 |
| 2.1 大肠杆菌pET-30a(+)表达系统 | 第73-74页 |
| 2.2 毕赤酵母pPIC9K表达系统 | 第74-75页 |
| 3 中性植酸酶的性质 | 第75-77页 |
| 3.1 酶活性的测定 | 第75-76页 |
| 3.2 植酸酶的酶学特性 | 第76-77页 |
| 4 进一步值得研究的问题 | 第77-79页 |
| 4.1 植酸酶基因在毕赤酵母中的优化表达 | 第77-78页 |
| 4.2 植酸酶的分子结构与功能之间的关系 | 第78-79页 |
| 第八章 小结 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-86页 |
| 附录一 pGEM-T easy Vector | 第86-87页 |
| 附录二 pET-30a(+)Vevtor | 第87-88页 |
| 附录三 pPIC9K Vector | 第88-89页 |
| 附录四 本研究所用缩写词 | 第89-90页 |
| 致谢 | 第90页 |
