| 摘要 | 第12-14页 |
| Abstract | 第14-16页 |
| 论文创新点 | 第17-18页 |
| 研究意义 | 第18-19页 |
| 技术路线 | 第19-20页 |
| 第一部分 文献综述 | 第20-76页 |
| 第一章 猪圆环病毒2型研究进展 | 第20-40页 |
| 1 PCV的发现与分类学地位 | 第20-22页 |
| 2 PCV的生物学特性 | 第22-23页 |
| 3 PCV2的基因组结构与编码蛋白 | 第23-32页 |
| 3.1 PCV2的基因组结构 | 第23-25页 |
| 3.2 ORF1基因与Rep、Rep'蛋白 | 第25-27页 |
| 3.3 ORF2基因与Cap蛋白 | 第27-29页 |
| 3.4 ORF3基因与ORF3蛋白 | 第29-31页 |
| 3.5 ORF4基因与ORF4蛋白 | 第31页 |
| 3.6 ORF5基因与ORF5蛋白 | 第31-32页 |
| 4 PCV2生命周期 | 第32-40页 |
| 4.1 PCV2感染宿主 | 第32-33页 |
| 4.2 PCV2的吸附与入侵 | 第33-36页 |
| 4.3 PCV2的运输 | 第36页 |
| 4.4 PCV2 DNA复制和转录 | 第36-40页 |
| 第二章 猪瘟病毒研究进展 | 第40-55页 |
| 1 CSFV的发现与分类学地位 | 第40-41页 |
| 2 CSFV的生物学特性 | 第41-42页 |
| 3 CSFV基因组结构与编码蛋白 | 第42-49页 |
| 3.1 CSFV基因组结构 | 第42-43页 |
| 3.2 CSFV的结构蛋白和非结构蛋白 | 第43-49页 |
| 4 CSFV的生命周期 | 第49-53页 |
| 4.1 CSFV感染宿主 | 第49-50页 |
| 4.2 CSFV的吸附与入侵 | 第50页 |
| 4.3 CSFV基因组复制 | 第50-51页 |
| 4.4 CSFV蛋白翻译 | 第51-52页 |
| 4.5 病毒粒子组装和释放 | 第52-53页 |
| 5 CSFV毒力因子 | 第53-55页 |
| 第三章 猪重要病毒共感染的研究进展 | 第55-59页 |
| 1 猪病毒共感染现状 | 第56页 |
| 2 猪病毒共感染的机制研究 | 第56-59页 |
| 第四章 高通量蛋白质组学研究进展 | 第59-76页 |
| 1 蛋白质组学概述 | 第59页 |
| 2 高通量蛋白质组学研究技术 | 第59-68页 |
| 2.1 Bottom-up蛋白质组学 | 第61-65页 |
| 2.2 Top-down蛋白质组学 | 第65-67页 |
| 2.3 其他新兴的技术 | 第67-68页 |
| 3 蛋白质组学在生命科学研究中的应用 | 第68-76页 |
| 3.1 蛋白质组学在细胞生物学的应用 | 第68-69页 |
| 3.2 蛋白质组学在细胞信号通路的应用 | 第69-70页 |
| 3.3 蛋白质组学在临床诊断的应用 | 第70-71页 |
| 3.4 蛋白质组学在病毒感染研究中的应用 | 第71-76页 |
| 第二部分 研究内容 | 第76-168页 |
| 第一章 猪瘟病毒纯化与多抗制备 | 第76-93页 |
| 1 材料 | 第77-78页 |
| 1.1 细胞与实验动物 | 第77页 |
| 1.2 毒株与菌株 | 第77页 |
| 1.3 试剂与抗体 | 第77-78页 |
| 1.4 器材与软件 | 第78页 |
| 2 实验方法 | 第78-85页 |
| 2.1 病毒浓缩 | 第78-79页 |
| 2.2 病毒纯化 | 第79页 |
| 2.3 BCA测定病毒蛋白浓度 | 第79-80页 |
| 2.4 透射电镜观察 | 第80页 |
| 2.5 CSFV绝对定量PCR的建立 | 第80-83页 |
| 2.6 CSFV感染细胞 | 第83页 |
| 2.7 间接免疫荧光检测(IFA)检测病毒TCID_(50) | 第83-84页 |
| 2.8 抗CSFV兔多抗的制备 | 第84页 |
| 2.9 IFA检测血清效价 | 第84页 |
| 2.10 ELISA检测血清 | 第84-85页 |
| 2.11 数据分析及作图 | 第85页 |
| 3 结果 | 第85-91页 |
| 3.1 CSFV绝对定量PCR的建立 | 第85-86页 |
| 3.2 病毒浓缩和纯化 | 第86-89页 |
| 3.3 抗CSFV兔多抗的IFA效价检测 | 第89-90页 |
| 3.4 抗CSFV兔多抗的ELISA检测 | 第90-91页 |
| 4 讨论 | 第91-93页 |
| 第二章 猪圆环病毒2型与猪瘟病毒共感染模型的建立 | 第93-120页 |
| 1 材料 | 第95-96页 |
| 1.1 细胞 | 第95页 |
| 1.2 毒株与菌株 | 第95页 |
| 1.3 试剂与抗体 | 第95-96页 |
| 1.4 器材与软件 | 第96页 |
| 2 实验方法 | 第96-103页 |
| 2.1 PCV2感染细胞 | 第96-97页 |
| 2.2 CSFV感染细胞 | 第97页 |
| 2.3 IFA测定病毒感染情况及子代病毒TCID_(50) | 第97页 |
| 2.4 带毒细胞的建立 | 第97页 |
| 2.5 流式细胞术检测细胞感染率 | 第97-98页 |
| 2.6 PCV2绝对定量PCR的建立 | 第98-99页 |
| 2.7 普通激光共聚焦显微镜(CLSM)和超高分辨显微镜(SIM和STORM) | 第99页 |
| 2.8 CCK-8法检测细胞活性 | 第99-100页 |
| 2.9 相对定量PCR检测CSFV的复制水平 | 第100页 |
| 2.10 TUNEL法检测细胞凋亡 | 第100-101页 |
| 2.11 化学发光法检测Caspase 3/7活性 | 第101页 |
| 2.12 PCV2灭活方法比较 | 第101-102页 |
| 2.13 酚氯仿法抽提病毒DNA | 第102-103页 |
| 2.14 数据分析及作图 | 第103页 |
| 3 结果 | 第103-117页 |
| 3.1 细胞对病毒的允许性 | 第103-104页 |
| 3.2 恒定感染CSFV的细胞系的建立 | 第104-107页 |
| 3.3 共感染情况下PCV2和CSFV的定位情况 | 第107-110页 |
| 3.4 PCV2和CSFV在PK15和ST中的共感染比例 | 第110-111页 |
| 3.5 PCV2绝对定量PCR的建立 | 第111-112页 |
| 3.6 共感染对病毒复制的影响 | 第112-113页 |
| 3.7 PCV2在PK15-CSFV中介导的凋亡 | 第113-115页 |
| 3.8 PCV2对PK15-CSFV的影响依赖于PCV2的复制 | 第115-117页 |
| 4 讨论 | 第117-120页 |
| 第三章 基于iTRAQ技术的猪圆环病毒2型-猪瘟病毒共感染PK15的蛋白质组分析 | 第120-168页 |
| 1 材料 | 第122-124页 |
| 1.1 细胞 | 第122页 |
| 1.2 毒株与菌株 | 第122-123页 |
| 1.3 试剂与抗体 | 第123页 |
| 1.4 器材与软件 | 第123-124页 |
| 2 实验方法 | 第124-132页 |
| 2.1 样品制备 | 第124页 |
| 2.2 细胞样品的裂解 | 第124页 |
| 2.3 蛋白样品浓度测定 | 第124页 |
| 2.4 SDS-PAGE电泳 | 第124-125页 |
| 2.5 考马斯亮蓝染色 | 第125页 |
| 2.6 Western blotting分析 | 第125-126页 |
| 2.7 酶解和肽段定量 | 第126页 |
| 2.8 肽段标记 | 第126页 |
| 2.9 肽段的SCX分级 | 第126-127页 |
| 2.10 LC-MS/MS分析 | 第127页 |
| 2.11 质谱数据分析 | 第127-129页 |
| 2.12 生物信息学分析 | 第129-130页 |
| 2.13 SYBR green法荧光定量PCR验证差异表达蛋白 | 第130-132页 |
| 2.14 CLSM观察 | 第132页 |
| 2.15 数据分析及作图 | 第132页 |
| 3 实验结果 | 第132-161页 |
| 3.1 样品制备及检测 | 第132-134页 |
| 3.2 肽段标记及SCX分级 | 第134页 |
| 3.3 质谱鉴定结果 | 第134-136页 |
| 3.4 蛋白质的差异表达分析 | 第136-138页 |
| 3.5 差异表达蛋白验证 | 第138-142页 |
| 3.6 蛋白质组的层次聚类分析 | 第142-143页 |
| 3.7 差异表达蛋白的GO分析 | 第143-145页 |
| 3.8 差异表达蛋白的KEGG分析 | 第145-151页 |
| 3.9 PC/SC差异表达蛋白的IPA分析 | 第151-155页 |
| 3.10 PCV2-CSFV共感染下特异性差异表达的蛋白 | 第155-161页 |
| 4 讨论 | 第161-168页 |
| 4.1 PCV2在PCV2-CSFV共感染过程中的主导地位 | 第161-164页 |
| 4.2 PCV2-CSFV共感染特异性差异表达蛋白的分析 | 第164-168页 |
| 全文总结 | 第168-170页 |
| 展望 | 第170-171页 |
| 参考文献 | 第171-200页 |
| 第三部分 附录 | 第200-225页 |
| 附录A iTRAQ结合LC-MS/MS鉴定的不同组之间的差异蛋白信息 | 第200-219页 |
| 附录B 全文缩略语 | 第219-221页 |
| 附录C 常用缓冲液及配方 | 第221-225页 |
| 致谢 | 第225-227页 |
| 作者简历 | 第227页 |
