| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 文献综述 | 第10-19页 |
| 1 亚致死效应 | 第10页 |
| 2 昆虫生长调节剂虫酰肼和烯虫酯(methoprene)的结构特点和功能 | 第10-11页 |
| 3 多巴脱羧酶的功能 | 第11-16页 |
| 3.1 多巴脱羧酶参与昆虫的免疫反应 | 第11-14页 |
| 3.1.1 昆虫的天然免疫系统 | 第11-14页 |
| 3.1.2 多巴脱羧酶在无脊椎动物的免疫调节作用 | 第14页 |
| 3.2 多巴脱羧酶在昆虫发育过程中作用 | 第14-16页 |
| 3.2.1 昆虫蜕皮激素 | 第15-16页 |
| 3.2.2 保幼激素类似物 | 第16页 |
| 4 研究的目的意义 | 第16-17页 |
| 参考文献 | 第17-19页 |
| 1 前言 | 第19-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-38页 |
| 2.1 供试昆虫 | 第20页 |
| 2.2 主要试剂 | 第20页 |
| 2.3 主要仪器 | 第20页 |
| 2.4 亚洲玉米螟Of-DDC总RNA的提取及cDNA的合成 | 第20-22页 |
| 2.4.1 总RNA提取 | 第20-21页 |
| 2.4.2 总RNA的质量检测 | 第21页 |
| 2.4.3 cDNA第一链的合成 | 第21-22页 |
| 2.5 Of-DDC基因的3'-RACE | 第22-24页 |
| 2.5.1 引物设计 | 第22页 |
| 2.5.2 操作步骤 | 第22-23页 |
| 2.5.3 目的基因片段的回收纯化 | 第23页 |
| 2.5.4 目的片段与克隆载体连接 | 第23-24页 |
| 2.5.5 连接载体转化 | 第24页 |
| 2.5.6 单菌落PCR检测 | 第24页 |
| 2.5.7 测序 | 第24页 |
| 2.6 Of-DDC基因部分序列的扩增 | 第24-28页 |
| 2.6.1 部分序列RACE产物的克隆测序 | 第28页 |
| 2.7 Of-DDC基因的5'-RACE | 第28-30页 |
| 2.7.1 Takara 5'-RACE反应原理和引物设计 | 第28-29页 |
| 2.7.2 操作步骤 | 第29-30页 |
| 2.7.3 5'-RACE产物的克隆测序 | 第30页 |
| 2.8 序列的生物信息学分析 | 第30-32页 |
| 2.8.1 据库搜索及亚洲玉米螟DDC基因编码蛋白的理化性质分析 | 第31页 |
| 2.8.2 亚洲玉米螟DDC基因编码蛋白的结构和功能分析 | 第31-32页 |
| 2.8.3 基于Of-DDC核苷酸序列推导的氨基酸序列系统进化树构建 | 第32页 |
| 2.9 Of-DDC重组蛋白原核表达 | 第32-35页 |
| 2.9.1 重组表达质粒pET-28a(+)-Of-DDC的构建 | 第32-34页 |
| 2.9.2 重组表达 | 第34-35页 |
| 2.9.3 表达蛋白的Western blotting鉴定 | 第35页 |
| 2.10 亚洲玉米螟Of-DDC基因表达的Real time PCR检测 | 第35-37页 |
| 2.10.1 亚洲玉米螟5龄幼虫的亚致死浓度虫酰肼处理 | 第35-36页 |
| 2.10.2 亚洲玉米螟5龄幼虫的亚致死浓度Methoprene点滴处理 | 第36-37页 |
| 2.11 数据分析 | 第37-38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-58页 |
| 3.1 Of-DDC基因全长cDNA序列 | 第38-41页 |
| 3.1.1 Of-DDC基因全长cDNA序列的3'RACE | 第38-39页 |
| 3.1.2 Of-DDC基因部分cDNA序列的克隆及序列验证 | 第39页 |
| 3.1.3 Of-DDC基因全长cDNA序列的5'RACE | 第39-40页 |
| 3.1.4 Of-DDC基因全长cDNA序列的克隆 | 第40-41页 |
| 3.2 Of-DDC基因的生物信息学分析 | 第41-50页 |
| 3.2.1 Of-DDC基因全长cDNA核苷酸序列及推导的氨基酸序列 | 第41-43页 |
| 3.2.2 Of-DDC基因核苷酸序列和氨基酸序列的BlastP分析 | 第43-45页 |
| 3.2.3 Of-DDC基因的系统进化树 | 第45-46页 |
| 3.2.4 信号肽、跨膜结构域及翻译后修饰分析 | 第46-48页 |
| 3.2.5 亚洲玉米螟DDC基因编码蛋白的生物信息学分析 | 第48-49页 |
| 3.2.6 三维结构模型构建与功能结构域分析 | 第49-50页 |
| 3.3 Of-DDC基因的原核表达 | 第50-55页 |
| 3.3.1 Of-DDC基因表达载体的构建 | 第50-52页 |
| 3.3.2 pET-28a-Of-DDC原核表达条件的筛选 | 第52-54页 |
| 3.3.3 Of-DDC重组蛋白的纯化与Western blotting鉴定 | 第54-55页 |
| 3.4 虫酰肼对亚洲玉米螟5龄幼虫的亚致死浓度 | 第55页 |
| 3.5 Methoprene对亚洲玉米螟5龄幼虫的亚致死浓度 | 第55-56页 |
| 3.6 亚洲玉米螟幼虫Of-DDC基因mRNA表达水平分析 | 第56-58页 |
| 3.6.1 虫酰肼LC_(30)处理对Of-DDC基因转录水平表达的影响 | 第56-57页 |
| 3.6.2 Methoprene LC_(30)处理对Of-DDC基因转录水平表达的影响 | 第57-58页 |
| 4 讨论 | 第58-63页 |
| 4.1 Of-DDC基因的结构分析 | 第58-59页 |
| 4.2 Of-DDC基因的表达特性分析 | 第59-60页 |
| 4.3 虫酰肼及Methoprene对昆虫的调控作用 | 第60-61页 |
| 4.4 展望 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第66-67页 |
