| 论文创新点 | 第5-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-13页 |
| 一 绪论 | 第14-33页 |
| 1.1 可再生能源 | 第14-17页 |
| 1.1.1 定义与分类 | 第14-15页 |
| 1.1.2 可再生能源发展趋势 | 第15-16页 |
| 1.1.3 生物质能源 | 第16-17页 |
| 1.2 生物柴油 | 第17-21页 |
| 1.2.1 概述 | 第17-18页 |
| 1.2.2 转酯化法体外合成生物柴油 | 第18页 |
| 1.2.3 微生物发酵直接合成生物柴油 | 第18-21页 |
| 1.3 脂肪酸合成 | 第21-26页 |
| 1.3.1 大肠杆菌脂肪酸合成 | 第21-26页 |
| 1.3.2 酿酒酵母脂肪酸合成 | 第26页 |
| 1.4 短链醇生物合成 | 第26-31页 |
| 1.4.1 氨基酸途径合成异丁醇 | 第27-29页 |
| 1.4.2 梭菌途径合成丁醇和异丙醇 | 第29-31页 |
| 1.5 本研究的目的与意义 | 第31-33页 |
| 二、实验材料和方法 | 第33-46页 |
| 2.1 实验材料 | 第33-36页 |
| 2.1.1 实验菌株、质粒 | 第33-34页 |
| 2.1.2 酶试剂和生化试剂 | 第34页 |
| 2.1.3 溶液和培养基配制 | 第34-36页 |
| 2.2 实验方法 | 第36-46页 |
| 2.2.1 保藏菌活化 | 第36-37页 |
| 2.2.2 质粒DNA提取 | 第37页 |
| 2.2.3 质粒DNA检测 | 第37页 |
| 2.2.4 目的基因片段PCR扩增 | 第37-38页 |
| 2.2.5 PCR产物的切胶回收 | 第38页 |
| 2.2.6 DNA酶切 | 第38-39页 |
| 2.2.7 PCR产物试剂盒纯化 | 第39页 |
| 2.2.8 酶连 | 第39页 |
| 2.2.9 CaCl_2法制备大肠杆菌感受态细胞 | 第39-40页 |
| 2.2.10 质粒DNA对大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第40页 |
| 2.2.11 大肠杆菌质粒DNA快速检测 | 第40页 |
| 2.2.12 菌种保藏 | 第40-41页 |
| 2.2.13 酵母基因组DNA提取 | 第41页 |
| 2.2.14 酵母细胞感受态细胞制备 | 第41页 |
| 2.2.15 酿酒酵母细胞质粒转化 | 第41-42页 |
| 2.2.16 酿酒酵母基因敲除 | 第42页 |
| 2.2.17 大肠杆菌合成各种脂肪酸酯发酵 | 第42-43页 |
| 2.2.18 酿酒酵母合成脂肪酸乙酯或脂肪酸甲酯发酵 | 第43页 |
| 2.2.19 毕赤酵母合成脂肪酸短链酯发酵 | 第43-44页 |
| 2.2.20 产物提取 | 第44页 |
| 2.2.21 脂肪酸酯标准品合成 | 第44页 |
| 2.2.22 各种脂肪酸酯产物的检测 | 第44-45页 |
| 2.2.23 短链醇的检测 | 第45-46页 |
| 三、遗传改造大肠杆菌合成脂肪酸短链酯 | 第46-56页 |
| 3.1 引言 | 第46-47页 |
| 3.2 质粒构建 | 第47-49页 |
| 3.2.1 大肠杆菌合成脂肪酸短链酯相关质粒构建 | 第47-49页 |
| 3.3 结果与分析 | 第49-54页 |
| 3.3.1 构建大肠杆菌合成脂肪酸短链酯基本代谢途径 | 第49-50页 |
| 3.3.2 敲除fadE基因促进重组大肠杆菌脂肪酸短链酯合成 | 第50页 |
| 3.3.3 高表达tesA'基因促进大肠杆菌脂肪酸短链酯合成 | 第50-52页 |
| 3.3.4 高表达fadD基因促进大肠杆菌脂肪酸短链酯合成 | 第52-53页 |
| 3.3.5 补料发酵 | 第53-54页 |
| 3.4 讨论与总结 | 第54-56页 |
| 四、遗传改造大肠杆菌合成脂肪酸支链酯 | 第56-73页 |
| 4.1 引言 | 第56-59页 |
| 4.2 质粒构建 | 第59-62页 |
| 4.2.1 大肠杆菌合成脂肪酸异丁酯和异戊酯质粒构建 | 第59-60页 |
| 4.2.2 大肠杆菌合成脂肪酸异丙酯质粒构建 | 第60-61页 |
| 4.2.3 大肠杆菌合成支链脂肪酸短链酯质粒构建 | 第61-62页 |
| 4.3 结果与分析 | 第62-71页 |
| 4.3.1 构建合成脂肪酸异丁酯及异戊酯的基本代谢途径 | 第62-64页 |
| 4.3.2 增加胞内脂酰辅酶A的积累加强脂肪酸支链酯合成 | 第64-65页 |
| 4.3.3 构建合成脂肪酸异丙酯基本代谢途径 | 第65-66页 |
| 4.3.4 增加胞内脂酰辅酶A的积累加强脂肪酸异丙酯合成 | 第66-68页 |
| 4.3.5 构建合成支链脂肪酸短链酯的代谢途径 | 第68-71页 |
| 4.4 讨论与总结 | 第71-73页 |
| 五. 遗传改造酿酒酵母合成脂肪酸乙酯 | 第73-80页 |
| 5.1 引言 | 第73-74页 |
| 5.2 质粒构建及基因敲除 | 第74-76页 |
| 5.2.1 酿酒酵母合成脂肪酸乙酯相关质粒的构建 | 第74-75页 |
| 5.2.2 poxl基因敲除 | 第75-76页 |
| 5.3 结果与分析 | 第76-78页 |
| 5.3.1 酿酒酵母中表达ws/dgat基因合成脂肪酸乙酯 | 第76页 |
| 5.3.2 表达accl基因提升脂肪酸乙酯的合成能力 | 第76-77页 |
| 5.3.3 敲除poxl基因对脂肪酸乙酯合成的影响 | 第77-78页 |
| 5.4 讨论与总结 | 第78-80页 |
| 六、遗传改造毕赤酵母合成脂肪酸短链酯 | 第80-84页 |
| 6.1 引言 | 第80页 |
| 6.2 毕赤酵母合成脂肪酸短链酯相关质粒的构建 | 第80-82页 |
| 6.3 结果与分析 | 第82-83页 |
| 6.4 讨论与总结 | 第83-84页 |
| 七、研究总结与展望 | 第84-87页 |
| 7.1 总结 | 第84-85页 |
| 7.2 展望 | 第85-87页 |
| 参考文献 | 第87-95页 |
| 攻读博士期间发表的与学位论文相关的科研成果目录 | 第95-96页 |
| 致谢 | 第96-97页 |
| 附录 | 第97-138页 |
