| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 前言 | 第12页 |
| 1 文献综述 | 第12-22页 |
| 1.1 林木土传病害及其生物防治研究进展 | 第12-14页 |
| 1.1.1 林木土传病害的危害和特点 | 第12-13页 |
| 1.1.2 杨树紫纹羽病 | 第13页 |
| 1.1.3 放线菌对土传病害的防治 | 第13-14页 |
| 1.2 微生物几丁质酶的研究 | 第14-17页 |
| 1.2.1 产几丁质酶的微生物 | 第15页 |
| 1.2.2 微生物几丁质酶的性质 | 第15-16页 |
| 1.2.3 几丁质酶的分类 | 第16-17页 |
| 1.3 几丁质酶的分子生物学研究 | 第17-19页 |
| 1.3.1 几丁质酶的结构组成 | 第17-18页 |
| 1.3.2 微生物几丁质酶基因调控 | 第18-19页 |
| 1.4 几丁质酶及基因在植物病虫害防治中的应用 | 第19-20页 |
| 1.4.1 直接利用不同来源的几丁质酶或其产生菌防治植物虫病害 | 第19页 |
| 1.4.2 几丁质酶与其它防卫蛋白的协同作用 | 第19-20页 |
| 1.4.3 几丁质酶在植物抗病中的作用 | 第20页 |
| 1.5 微生物几丁质酶的克隆表达 | 第20-22页 |
| 1.5.1 目标基因的获得 | 第20-21页 |
| 1.5.2 微生物几丁质酶基因的表达 | 第21-22页 |
| 2 选题意义 | 第22-24页 |
| 2.1 研究的目的与意义 | 第22-23页 |
| 2.2 研究的总体思路及其主要内容 | 第23-24页 |
| 3 材料与方法 | 第24-39页 |
| 3.1 主要试剂与溶液 | 第24-26页 |
| 3.1.1 主要试剂 | 第24-25页 |
| 3.1.2 主要溶液 | 第25-26页 |
| 3.2 主要仪器 | 第26页 |
| 3.3 主要培养基 | 第26-28页 |
| 3.3.1 基本培养基 | 第26-27页 |
| 3.3.2 生理生化测定培养基 | 第27页 |
| 3.3.3 其它培养基 | 第27-28页 |
| 3.4 采样点概况 | 第28页 |
| 3.5 实验材料 | 第28-29页 |
| 3.5.1 实验菌株 | 第28页 |
| 3.5.2 载体与质粒 | 第28-29页 |
| 3.6 杨树根际紫纹羽病拮抗菌的筛选 | 第29-32页 |
| 3.6.1 样品的采集与处理 | 第29-30页 |
| 3.6.2 菌株的分离 | 第30页 |
| 3.6.3 拮抗菌的筛选 | 第30页 |
| 3.6.4 代谢产物对病原菌的抑制作用 | 第30-31页 |
| 3.6.5 酶活性测定 | 第31-32页 |
| 3.7 拮抗菌的鉴定 | 第32-35页 |
| 3.7.1 形态学特征 | 第32页 |
| 3.7.2 生理生化特性分析 | 第32-34页 |
| 3.7.3 16SrDNA序列分析研究 | 第34-35页 |
| 3.8 链霉菌KJ42产几丁质酶的条件研究 | 第35-37页 |
| 3.8.1 培养条件 | 第35页 |
| 3.8.2 测定方法 | 第35页 |
| 3.8.3 培养时间与产雜的关系 | 第35页 |
| 3.8.4 C源对KJ42菌株产酶的影响 | 第35页 |
| 3.8.5 N源对KJ42菌株产酶的影响 | 第35-36页 |
| 3.8.6 产酶培养基配方的优化 | 第36页 |
| 3.8.7 培养基的初始PH值对KJ42菌株产酶的影响 | 第36页 |
| 3.8.8 培养温度对KJ42菌株产酶的影响 | 第36-37页 |
| 3.9 链霉菌几丁质酶的克隆 | 第37-39页 |
| 3.9.1 基因组DNA的提取 | 第37页 |
| 3.9.2 几丁质酶基因保守引物设计、合成和扩增 | 第37-38页 |
| 3.9.3 PCR扩增片段的BLAST分析 | 第38页 |
| 3.9.4 几丁质酶催化域的克隆 | 第38页 |
| 3.9.6 重组质粒的筛选与鉴定 | 第38-39页 |
| 3.9.7 序列测定 | 第39页 |
| 3.10 几丁质酶基因的生物信息学分析 | 第39页 |
| 4 结果与分析 | 第39-58页 |
| 4.1 菌株筛选结果 | 第39-41页 |
| 4.1.1 拮抗菌的筛选结果 | 第39-40页 |
| 4.1.2 代谢产物对病原菌的抑制作用 | 第40页 |
| 4.1.3 N-乙酰-D-氨基葡萄糖标准曲线 | 第40-41页 |
| 4.2 菌株KJ42的分类地位 | 第41-45页 |
| 4.2.1 形态特征 | 第41-42页 |
| 4.2.2 培养特性及生理生化特性 | 第42-43页 |
| 4.2.3 16SRDNA分析与系统发育树 | 第43-45页 |
| 4.3 菌株KJ42产几丁质酶条件优化 | 第45-49页 |
| 4.3.1 培养时间对菌株KJ42产酶的影响 | 第45页 |
| 4.3.2 碳源对菌株KJ42产酶的影响 | 第45-46页 |
| 4.3.3 氮源对KJ42菌株产酶的影响 | 第46页 |
| 4.3.4 碳源、氮源和无机盐对菌株KJ42产酶影响的正交实验 | 第46-47页 |
| 4.3.5 培养温度对KJ42菌株产酶的影响 | 第47-48页 |
| 4.3.6 培养基初始PH值对KJ42菌株产酶的影响 | 第48-49页 |
| 4.4 菌株KJ42几丁质酶基因的克隆 | 第49-52页 |
| 4.4.1 几丁质酶基因的PCR扩增 | 第49页 |
| 4.4.2 PCR产物的克隆与测序分析 | 第49-52页 |
| 4.5 几丁质酶的分子生物学软件分析 | 第52-58页 |
| 4.5.1 几丁质酶chiLA/chiLB氨基酸组成分析 | 第52-53页 |
| 4.5.2 几丁质酶chiLA/chiLB的疏水性和跨膜结构分析 | 第53-55页 |
| 4.5.3 CHILA/CHILB蛋白的保守结构域分析 | 第55-56页 |
| 4.5.4 CHILA/CHILB信号肽和糖基化位点分析 | 第56页 |
| 4.5.5 几丁质酶高级结构预测分析 | 第56-58页 |
| 5 讨论与结论 | 第58-64页 |
| 5.1 生防微生物的分离 | 第58-59页 |
| 5.2 菌株的鉴定 | 第59-60页 |
| 5.3 菌株的研究前景 | 第60页 |
| 5.4 不同种类的几丁质酶在植物保护中的作用 | 第60-61页 |
| 5.5 菌株发酵条件优化 | 第61-62页 |
| 5.6 几丁质酶的克隆与序列分析 | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
