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Streptomyces sampsonii KJ42几丁质酶特性及其基因克隆

摘要第4-6页
Abstract第6-7页
前言第12页
1 文献综述第12-22页
    1.1 林木土传病害及其生物防治研究进展第12-14页
        1.1.1 林木土传病害的危害和特点第12-13页
        1.1.2 杨树紫纹羽病第13页
        1.1.3 放线菌对土传病害的防治第13-14页
    1.2 微生物几丁质酶的研究第14-17页
        1.2.1 产几丁质酶的微生物第15页
        1.2.2 微生物几丁质酶的性质第15-16页
        1.2.3 几丁质酶的分类第16-17页
    1.3 几丁质酶的分子生物学研究第17-19页
        1.3.1 几丁质酶的结构组成第17-18页
        1.3.2 微生物几丁质酶基因调控第18-19页
    1.4 几丁质酶及基因在植物病虫害防治中的应用第19-20页
        1.4.1 直接利用不同来源的几丁质酶或其产生菌防治植物虫病害第19页
        1.4.2 几丁质酶与其它防卫蛋白的协同作用第19-20页
        1.4.3 几丁质酶在植物抗病中的作用第20页
    1.5 微生物几丁质酶的克隆表达第20-22页
        1.5.1 目标基因的获得第20-21页
        1.5.2 微生物几丁质酶基因的表达第21-22页
2 选题意义第22-24页
    2.1 研究的目的与意义第22-23页
    2.2 研究的总体思路及其主要内容第23-24页
3 材料与方法第24-39页
    3.1 主要试剂与溶液第24-26页
        3.1.1 主要试剂第24-25页
        3.1.2 主要溶液第25-26页
    3.2 主要仪器第26页
    3.3 主要培养基第26-28页
        3.3.1 基本培养基第26-27页
        3.3.2 生理生化测定培养基第27页
        3.3.3 其它培养基第27-28页
    3.4 采样点概况第28页
    3.5 实验材料第28-29页
        3.5.1 实验菌株第28页
        3.5.2 载体与质粒第28-29页
    3.6 杨树根际紫纹羽病拮抗菌的筛选第29-32页
        3.6.1 样品的采集与处理第29-30页
        3.6.2 菌株的分离第30页
        3.6.3 拮抗菌的筛选第30页
        3.6.4 代谢产物对病原菌的抑制作用第30-31页
        3.6.5 酶活性测定第31-32页
    3.7 拮抗菌的鉴定第32-35页
        3.7.1 形态学特征第32页
        3.7.2 生理生化特性分析第32-34页
        3.7.3 16SrDNA序列分析研究第34-35页
    3.8 链霉菌KJ42产几丁质酶的条件研究第35-37页
        3.8.1 培养条件第35页
        3.8.2 测定方法第35页
        3.8.3 培养时间与产雜的关系第35页
        3.8.4 C源对KJ42菌株产酶的影响第35页
        3.8.5 N源对KJ42菌株产酶的影响第35-36页
        3.8.6 产酶培养基配方的优化第36页
        3.8.7 培养基的初始PH值对KJ42菌株产酶的影响第36页
        3.8.8 培养温度对KJ42菌株产酶的影响第36-37页
    3.9 链霉菌几丁质酶的克隆第37-39页
        3.9.1 基因组DNA的提取第37页
        3.9.2 几丁质酶基因保守引物设计、合成和扩增第37-38页
        3.9.3 PCR扩增片段的BLAST分析第38页
        3.9.4 几丁质酶催化域的克隆第38页
        3.9.6 重组质粒的筛选与鉴定第38-39页
        3.9.7 序列测定第39页
    3.10 几丁质酶基因的生物信息学分析第39页
4 结果与分析第39-58页
    4.1 菌株筛选结果第39-41页
        4.1.1 拮抗菌的筛选结果第39-40页
        4.1.2 代谢产物对病原菌的抑制作用第40页
        4.1.3 N-乙酰-D-氨基葡萄糖标准曲线第40-41页
    4.2 菌株KJ42的分类地位第41-45页
        4.2.1 形态特征第41-42页
        4.2.2 培养特性及生理生化特性第42-43页
        4.2.3 16SRDNA分析与系统发育树第43-45页
    4.3 菌株KJ42产几丁质酶条件优化第45-49页
        4.3.1 培养时间对菌株KJ42产酶的影响第45页
        4.3.2 碳源对菌株KJ42产酶的影响第45-46页
        4.3.3 氮源对KJ42菌株产酶的影响第46页
        4.3.4 碳源、氮源和无机盐对菌株KJ42产酶影响的正交实验第46-47页
        4.3.5 培养温度对KJ42菌株产酶的影响第47-48页
        4.3.6 培养基初始PH值对KJ42菌株产酶的影响第48-49页
    4.4 菌株KJ42几丁质酶基因的克隆第49-52页
        4.4.1 几丁质酶基因的PCR扩增第49页
        4.4.2 PCR产物的克隆与测序分析第49-52页
    4.5 几丁质酶的分子生物学软件分析第52-58页
        4.5.1 几丁质酶chiLA/chiLB氨基酸组成分析第52-53页
        4.5.2 几丁质酶chiLA/chiLB的疏水性和跨膜结构分析第53-55页
        4.5.3 CHILA/CHILB蛋白的保守结构域分析第55-56页
        4.5.4 CHILA/CHILB信号肽和糖基化位点分析第56页
        4.5.5 几丁质酶高级结构预测分析第56-58页
5 讨论与结论第58-64页
    5.1 生防微生物的分离第58-59页
    5.2 菌株的鉴定第59-60页
    5.3 菌株的研究前景第60页
    5.4 不同种类的几丁质酶在植物保护中的作用第60-61页
    5.5 菌株发酵条件优化第61-62页
    5.6 几丁质酶的克隆与序列分析第62-64页
参考文献第64-71页
致谢第71页

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