松墨天牛磷酸丙糖异构酶基因的克隆及表达分析
| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 前言 | 第10-18页 |
| 1.1 松墨天牛 | 第10-13页 |
| 1.1.1 世代及生活史 | 第10-11页 |
| 1.1.2 防治措施 | 第11-12页 |
| 1.1.3 松墨天牛分子生物学研究进展 | 第12-13页 |
| 1.2 磷酸丙糖异构酶 | 第13-16页 |
| 1.3 研究内容和技术路线 | 第16-17页 |
| 1.4 研究意义 | 第17-18页 |
| 2 材料和方法 | 第18-31页 |
| 2.1 供试昆虫 | 第18页 |
| 2.2 材料预处理 | 第18页 |
| 2.3 农药处理 | 第18-19页 |
| 2.4 RNA的提取 | 第19-20页 |
| 2.4.1 试剂和仪器 | 第19-20页 |
| 2.4.2 步骤 | 第20页 |
| 2.5 3'RACE扩增 | 第20-23页 |
| 2.5.1 试剂和仪器 | 第20页 |
| 2.5.2 引物 | 第20-21页 |
| 2.5.3 反转录反应 | 第21页 |
| 2.5.4 套式PCR反应 | 第21-23页 |
| 2.6 扩增片段的回收 | 第23-24页 |
| 2.6.1 试剂和仪器 | 第23页 |
| 2.6.2 步骤 | 第23-24页 |
| 2.7 T-A克隆 | 第24-26页 |
| 2.7.1 pMD20-T载体 | 第24-25页 |
| 2.7.2 试剂和仪器 | 第25页 |
| 2.7.3 转化平板的制备 | 第25-26页 |
| 2.7.4 pMD20-T载体连接反应 | 第26页 |
| 2.7.5 连接产物转化感受态细胞 | 第26页 |
| 2.8 重组子的筛选与鉴定 | 第26-27页 |
| 2.8.1 试剂和仪器 | 第26页 |
| 2.8.2 蓝白斑筛选 | 第26-27页 |
| 2.8.3 菌落PCR鉴定 | 第27页 |
| 2.8.4 摇菌和测序 | 第27页 |
| 2.9 生物信息学分析 | 第27-28页 |
| 2.9.1 松墨天牛TPI核苷酸序列分析 | 第27页 |
| 2.9.2 松墨天牛TPI基因编码蛋白质序列分析 | 第27-28页 |
| 2.9.3 同源序列比对 | 第28页 |
| 2.9.4 系统发育树构建 | 第28页 |
| 2.10 实时荧光定量PCR（RT-qPCR） | 第28-31页 |
| 2.10.1 引物设计 | 第28-29页 |
| 2.10.2 RNA制备 | 第29页 |
| 2.10.3 试剂及仪器 | 第29页 |
| 2.10.4 反转录反应 | 第29-30页 |
| 2.10.5 实时荧光定量PCR | 第30页 |
| 2.10.6 数据分析 | 第30-31页 |
| 3 结果与分析 | 第31-49页 |
| 3.1 总RNA的提取 | 第31页 |
| 3.2 3'RACE扩增 | 第31-32页 |
| 3.2.1 Outer PCR | 第32页 |
| 3.2.2 Inner PCR | 第32页 |
| 3.3 PCR产物纯化 | 第32-33页 |
| 3.4 菌落PCR鉴定 | 第33-34页 |
| 3.5 核酸序列分析 | 第34-36页 |
| 3.6 MaTPI基因编码蛋白质序列分析 | 第36-42页 |
| 3.6.1 氨基酸序列组成分析 | 第36-37页 |
| 3.6.2 疏水性分析 | 第37-38页 |
| 3.6.3 跨膜区分析 | 第38页 |
| 3.6.4 信号肽分析 | 第38-39页 |
| 3.6.5 螺旋卷曲分析 | 第39页 |
| 3.6.6 磷酸化修饰位点预测 | 第39-40页 |
| 3.6.7 二级结构和三级结构 | 第40-41页 |
| 3.6.8 蛋白结构域预测 | 第41-42页 |
| 3.7 同源序列比对 | 第42-43页 |
| 3.8 系统发育树 | 第43页 |
| 3.9 MaTPI的表达 | 第43-49页 |
| 3.9.1 RNA的提取 | 第43-45页 |
| 3.9.2 MaTPI组织表达 | 第45-47页 |
| 3.9.3 农药胁迫后MaTPI的表达 | 第47-49页 |
| 4 讨论与结论 | 第49-53页 |
| 4.1 讨论 | 第49-52页 |
| 4.2 结论 | 第52-53页 |
| 4.2.1 MaTPI基因克隆 | 第52页 |
| 4.2.2 基因序列分析 | 第52页 |
| 4.2.3 基因表达 | 第52-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-60页 |
| 附录 | 第60-61页 |
