| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 1 前言 | 第11-21页 |
| 1.1 流感病毒概述 | 第11页 |
| 1.2 马流感 | 第11-14页 |
| 1.2.1 马流感概述 | 第11-12页 |
| 1.2.2 结构蛋白及其作用 | 第12-13页 |
| 1.2.3 流行病学 | 第13-14页 |
| 1.3 Tetherin | 第14-16页 |
| 1.3.1 Tetherin蛋白的概述 | 第14页 |
| 1.3.2 Tetherin多样性 | 第14-15页 |
| 1.3.3 本研究的目的和意义 | 第15-16页 |
| 1.4 病毒样颗粒 | 第16-21页 |
| 1.4.1 病毒样颗粒简介 | 第16-18页 |
| 1.4.2 病毒样颗粒常用构建方法 | 第18-19页 |
| 1.4.4 本研究的目的和意义 | 第19-21页 |
| 第一部分 马源Tetherin多样性研究 | 第21-40页 |
| 1 材料和方法 | 第21-31页 |
| 1.1 材料 | 第21-23页 |
| 1.1.1 样品来源 | 第21页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第21页 |
| 1.1.3 主要溶液配制 | 第21-22页 |
| 1.1.4 主要仪器及设备 | 第22-23页 |
| 1.1.5 分子生物学软件 | 第23页 |
| 1.2 方法 | 第23-31页 |
| 1.2.1 引物的设计与合成 | 第23页 |
| 1.2.2 血液RNA的提取 | 第23-24页 |
| 1.2.3 目的基因cDNA第一链合成 | 第24页 |
| 1.2.4 目的基因的PCR扩增 | 第24-25页 |
| 1.2.5 PCR产物的回收与纯化 | 第25-26页 |
| 1.2.6 回收纯化DNA的连接 | 第26页 |
| 1.2.7 转化 | 第26-27页 |
| 1.2.8 重组真核表达质粒的构建及鉴定 | 第27-28页 |
| 1.2.9 回收产物的连接 | 第28页 |
| 1.2.10 连接产物转化感受态细胞及重组质粒的菌液PCR鉴定 | 第28-29页 |
| 1.2.11 重组质粒的酶切鉴定 | 第29页 |
| 1.2.12 重组表达质粒的抽提 | 第29-31页 |
| 2 结果 | 第31-36页 |
| 2.1 目的基因Tetherin的PCR扩增结果 | 第31页 |
| 2.2 含有目的片段的pLB载体菌液PCR检测结果 | 第31-32页 |
| 2.3 重组质粒的菌液PCR检测结果 | 第32-33页 |
| 2.4 重组质粒的酶切鉴定 | 第33-34页 |
| 2.5 Tetherin序列分析结果 | 第34-36页 |
| 3 讨论 | 第36-39页 |
| 4 结论 | 第39-40页 |
| 第二部分 马流感病毒样颗粒的构建 | 第40-57页 |
| 1 材料和方法 | 第40-49页 |
| 1.1 材料 | 第40-41页 |
| 1.1.1 毒株、质粒、细胞与实验动物 | 第40页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第40页 |
| 1.1.3 主要溶液配制 | 第40-41页 |
| 1.2 方法 | 第41-49页 |
| 1.2.1 PCR引物设计与合成 | 第41-42页 |
| 1.2.2 HA、NA、M1、M2基因的扩增 | 第42-43页 |
| 1.2.3 目的片段及载体酶切处理 | 第43-44页 |
| 1.2.4 载体与目的片段的连接 | 第44页 |
| 1.2.5 转化以及重组质粒的菌液PCR鉴定 | 第44页 |
| 1.2.6 重组质粒的酶切鉴定 | 第44页 |
| 1.2.7 重组质粒的制备 | 第44页 |
| 1.2.8 哺乳动物细胞复苏、传代、冻存 | 第44-45页 |
| 1.2.9 H3N8 EIV真核表达质粒的转染 | 第45页 |
| 1.2.10 马流感H3N8兔源抗体的制备 | 第45-47页 |
| 1.2.11 马流感H3N8兔源抗体的Western-blot鉴定 | 第47页 |
| 1.2.12 使用哺乳动物表达系统制备H3N8 EIV病毒样颗粒 | 第47-48页 |
| 1.2.13 马流感VLPs的血凝活性测定 | 第48页 |
| 1.2.14 VLPs的超速离心纯化 | 第48页 |
| 1.2.15 Western-blot检测VLPs的表达 | 第48-49页 |
| 2 结果 | 第49-54页 |
| 2.1 HA、NA、M1、M2基因的PCR扩增结果 | 第49页 |
| 2.2 重组质粒的双酶切鉴定结果 | 第49-50页 |
| 2.3 自制兔源马流感抗体Western-blot鉴定 | 第50-51页 |
| 2.4 马流感VLPs的血凝效价结果 | 第51-52页 |
| 2.5 马流感VLPs超速离心纯化 | 第52页 |
| 2.6 马流感VLPs的Western-blot鉴定 | 第52-54页 |
| 3 讨论 | 第54-56页 |
| 4 结论 | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-61页 |
