| 缩略语表 | 第6-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| Summary | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-21页 |
| 1.1 microRNA概述 | 第11-15页 |
| 1.1.1 microRNA的发现 | 第11-12页 |
| 1.1.2 miRNA的研究进展 | 第12-13页 |
| 1.1.3 植物miRNA的特点 | 第13页 |
| 1.1.4 植物miRNA的作用机制 | 第13-14页 |
| 1.1.5 植物miRNA的功能 | 第14-15页 |
| 1.1.5.1 miRNA与植物的生长发育 | 第14-15页 |
| 1.1.5.2 miRNA与植物抗逆境胁迫 | 第15页 |
| 1.2 转录因子 | 第15-18页 |
| 1.2.1 转录因子的基本特征 | 第15-16页 |
| 1.2.2 NAC转录因子的基本特点 | 第16-18页 |
| 1.2.3 NAC转录因子的研究进展 | 第18页 |
| 1.3 本研究的目的和意义 | 第18-20页 |
| 1.4 技术路线 | 第20-21页 |
| 第二章 材料与方法 | 第21-42页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-23页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第21页 |
| 2.1.2 菌株和载体 | 第21页 |
| 2.1.3 数据库与分析软件 | 第21-22页 |
| 2.1.4 试剂及仪器 | 第22页 |
| 2.1.5 培养基的配制 | 第22-23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-42页 |
| 2.2.1 miRNA164靶基因的预测 | 第23-24页 |
| 2.2.2 靶基因生物信息学分析 | 第24页 |
| 2.2.3 引物的设计与合成 | 第24页 |
| 2.2.4 马铃薯NAC262基因的克隆 | 第24-28页 |
| 2.2.4.1 马铃薯试管薯总RNA的提取 | 第24-25页 |
| 2.2.4.2 cDNA第一链的合成 | 第25-26页 |
| 2.2.4.3 马铃薯NAC262基因的PCR扩增 | 第26页 |
| 2.2.4.4 PCR产物纯化回收 | 第26-27页 |
| 2.2.4.5 目的片段与克隆载体的连接 | 第27页 |
| 2.2.4.6 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第27页 |
| 2.2.4.7 连接产物的转化 | 第27-28页 |
| 2.2.5 miR164克隆载体的构建 | 第28-31页 |
| 2.2.5.1 miR164前体片段的PCR扩增 | 第28-30页 |
| 2.2.5.2 d片段与克隆载体pMD& | 第30-31页 |
| 2.2.6 马铃薯NAC262基因和miR164植物表达载体的构建 | 第31-36页 |
| 2.2.6.1 马铃薯NAC262基因表达载体的构建原理 | 第31-32页 |
| 2.2.6.2 表达载体pCPB121的构建 | 第32-33页 |
| 2.2.6.3 马铃薯表达载体pCPB121-miR164的构建 | 第33-34页 |
| 2.2.6.4 质粒DNA的提取 | 第34页 |
| 2.2.6.5 表达载体pCPB和克隆载体pMD-NAC262双酶切 | 第34页 |
| 2.2.6.6 表达载体pCPB121和克隆载体pMD-miR164双酶切 | 第34页 |
| 2.2.6.7 酶切产物的回收 | 第34-35页 |
| 2.2.6.8 NAC262目的片段与pCPB表达载体的连接 | 第35页 |
| 2.2.6.9 miR164目的片段与pCPB121表达载体片段的连接 | 第35-36页 |
| 2.2.7 马铃薯的遗传转化 | 第36-38页 |
| 2.2.7.1 农杆菌感受态细胞的制备 | 第36页 |
| 2.2.7.2 表达载体pCPB-NAC262和pCPB121-miR164农杆菌感受态细胞的转化 | 第36-37页 |
| 2.2.7.3 农杆菌介导的马铃薯遗传转化 | 第37-38页 |
| 2.2.8 转基因植株的检测 | 第38-40页 |
| 2.2.8.1 马铃薯基因组DNA的提取 | 第38-40页 |
| 2.2.8.2 转化植株NPTⅡ基因的PCR检测 | 第40页 |
| 2.2.9 转基因马铃薯植株的抗旱性检测 | 第40-41页 |
| 2.2.9.1 PEG胁迫浓度的选择 | 第40页 |
| 2.2.9.2 转基因植株的PEG胁迫处理 | 第40页 |
| 2.2.9.3 qRT-PCR检测 | 第40-41页 |
| 2.2.10 转基因植株生理指标测定 | 第41-42页 |
| 第三章 结果与分析 | 第42-57页 |
| 3.1 马铃薯miRNA164靶基因预测 | 第42-43页 |
| 3.2 靶基因生物信息学分析 | 第43-45页 |
| 3.2.1 靶基因进化分析 | 第43-44页 |
| 3.2.2 靶基因结构分析 | 第44-45页 |
| 3.3 马铃薯NAC262基因的克隆 | 第45-47页 |
| 3.3.1 马铃薯试管薯总RNA的提取 | 第45页 |
| 3.3.2 NAC262基因的克隆 | 第45-46页 |
| 3.3.3 克隆载体pMD-NAC262双酶切验证 | 第46-47页 |
| 3.4 ami R164克隆载体的构建 | 第47-49页 |
| 3.4.1 amiR164前体片段的PCR扩增 | 第47页 |
| 3.4.2 d片段测序分析 | 第47-48页 |
| 3.4.3 克隆载体pMD-miR164双酶切验证 | 第48-49页 |
| 3.5 马铃薯NAC262基因和miR164植物表达载体的构建 | 第49-50页 |
| 3.5.1 表达载体pCPB-NAC262双酶切验证 | 第49页 |
| 3.5.2 表达载体pCPB121-miR164双酶切验证 | 第49-50页 |
| 3.6 马铃薯遗传转化 | 第50-51页 |
| 3.6.1 马铃薯试管薯的诱导 | 第50-51页 |
| 3.6.2 农杆菌介导的马铃薯遗传转化 | 第51页 |
| 3.7 转化植株NPTⅡ基因的PCR检测 | 第51-52页 |
| 3.8 qRT-PCR分析 | 第52-55页 |
| 3.8.1 NAC262基因组织特异性表达分析 | 第52-53页 |
| 3.8.2 PEG胁迫下转基因马铃薯植株NAC262基因表达量分析 | 第53-55页 |
| 3.9 转基因植株生理指标测定 | 第55-57页 |
| 第四章 讨论与展望 | 第57-60页 |
| 4.1 讨论 | 第57-58页 |
| 4.2 结论 | 第58-59页 |
| 4.3 展望 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 作者简介 | 第66-67页 |
| 导师简介 | 第67-68页 |
