| 摘要 | 第8-11页 |
| Abstract | 第11-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-30页 |
| 1. 猪链球菌2型研究进展 | 第15-16页 |
| 2. 猪链球菌中的信号转导系统 | 第16-19页 |
| 2.1 密度感应系统（Quorum Sensing，QS） | 第16-17页 |
| 2.2. 二元信号转导系统（two-component signal transduction system, TCSTS） | 第17-19页 |
| 3. c-di-AMP的研究进展 | 第19-29页 |
| 3.1. c-di-AMP的合成 | 第20-23页 |
| 3.2 c-di-AMP的分解代谢 | 第23-24页 |
| 3.3 c-di-AMP受体的研究 | 第24-27页 |
| 3.4 c-di-AMP参与的其它细胞进程 | 第27-29页 |
| 4. 本研究的目的及意义 | 第29-30页 |
| 第二章 猪链球菌2型c-di-AMP代谢相关基因的预测以及生物信息学分析 | 第30-51页 |
| 第一节 链球菌2型c-di-AMP分子的检测 | 第30-37页 |
| 1 试剂与材料 | 第31-32页 |
| 1.1 菌株与载体 | 第31页 |
| 1.2 主要试剂与培养基 | 第31页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第31-32页 |
| 2 试验方法 | 第32-33页 |
| 2.1 SS2 HA9801的培养 | 第32页 |
| 2.2 SS2 HA9801细胞内核酸类分子的抽提 | 第32页 |
| 2.3 SS2 HA9801上清培养物中核酸类分子的抽提 | 第32页 |
| 2.4 高效液相色谱（HPLC）检测 | 第32-33页 |
| 2.5 c-di-AMP疑似物的纯化以及质谱检测 | 第33页 |
| 2.6 SS2在不同生长阶段c-di-AMP含量的检测 | 第33页 |
| 3 结果 | 第33-36页 |
| 3.1 SS2细胞能合成c-di-AMP信号分子且不分泌于细胞外 | 第33-35页 |
| 3.2 SS2在不同生长阶段c-di-AMP含量的检测 | 第35-36页 |
| 4 讨论 | 第36-37页 |
| 第二节 猪链球菌2型c-di-AMP代谢相关基因的生物信息学分析 | 第37-51页 |
| 1 试剂与材料 | 第37-38页 |
| 2 试验方法 | 第38-43页 |
| 2.1 高致病力菌株SS2 HA9801基因组DNA的制备 | 第38页 |
| 2.2 SS2 c-di-AMP代谢相关基因的预测及克隆 | 第38-40页 |
| 2.3 SS2 c-di-AMP代谢相关基因的一般特性分析 | 第40页 |
| 2.4 c-di-AMP代谢相关基因的同源性检索、多重序列比对分析以及系统发生树的绘制 | 第40页 |
| 2.5 HA9801总RNA的提取以及RNA的逆转录 | 第40-42页 |
| 2.6 SS2 c-di-AMP代谢相关基因及其比邻基因的共转录分析 | 第42-43页 |
| 3 结果 | 第43-48页 |
| 3.1 HA9801 c-di-AMP代谢相关蛋白基因的预测、克隆以及生物信息学分析 | 第43-47页 |
| 3.2 HA9801 c-di-AMP代谢相关蛋白的进化树分析 | 第47页 |
| 3.3 c-di-AMP代谢相关蛋白编码基因及其比邻基因的共转录分析 | 第47-48页 |
| 4 讨论 | 第48-51页 |
| 第三章 c-di-AMP代谢相关基因的原核表达、纯化以及活性分析 | 第51-70页 |
| 1 试剂与材料 | 第51-53页 |
| 2 试验方法 | 第53-60页 |
| 2.1 重组蛋白的表达 | 第53-57页 |
| 2.2 重组蛋白的纯化 | 第57-58页 |
| 2.3 重组蛋白的浓度测定 | 第58页 |
| 2.4 重组蛋白体外活性检测 | 第58页 |
| 2.5 pH值对重组蛋白体外活性的影响 | 第58-59页 |
| 2.6 金属离子对重组蛋白体外活性的影响 | 第59页 |
| 2.7 重要氨基酸序列对重组蛋白发挥体外活性的作用 | 第59-60页 |
| 3 结果 | 第60-68页 |
| 3.1 融合表达载体的构建和鉴定 | 第60-61页 |
| 3.2 重组蛋白的表达与纯化 | 第61-62页 |
| 3.3 重组蛋白体外活性检测 | 第62-64页 |
| 3.4 pH值对重组蛋白体外活性的影响 | 第64页 |
| 3.5 金属离子对重组蛋白体外活性的影响 | 第64-65页 |
| 3.6 DGA与RHR基序是合成蛋白发挥作用的关键基序 | 第65-68页 |
| 4 讨论 | 第68-70页 |
| 第四章 c-di-AMP代谢相关基因敲除突变株与功能互补株的构建与鉴定 | 第70-87页 |
| 1 试剂与材料 | 第70-72页 |
| 2 试验方法 | 第72-78页 |
| 2.1 基因敲除载体的构建 | 第72-74页 |
| 2.2 基因敲除突变株的筛选和鉴定 | 第74-77页 |
| 2.3 gdpP基因功能互补株的构建 | 第77-78页 |
| 3 结果 | 第78-84页 |
| 3.1 基因敲除载体的构建 | 第78-80页 |
| 3.2 基因缺失突变株的筛选 | 第80-81页 |
| 3.3 基因缺失突变株的鉴定 | 第81-82页 |
| 3.4 gdpP基因功能互补株的构建 | 第82-84页 |
| 4 讨论 | 第84-87页 |
| 第五章 c-di-AMP分解蛋白基因gdpP的缺失对SS2 HA9801生物学特性的影响 | 第87-108页 |
| 第一节 gdpP的缺失对细菌基本生物学性状的影响 | 第87-102页 |
| 1 试剂与材料 | 第87-88页 |
| 2 试验方法 | 第88-93页 |
| 2.1 胞内c-di-AMP含量的检测 | 第88页 |
| 2.2 生长曲线的绘制 | 第88-89页 |
| 2.3 显微镜观察细菌形态 | 第89-90页 |
| 2.4 24孔板测定生物被膜形成能力 | 第90页 |
| 2.5 溶血活性测定 | 第90页 |
| 2.6 药物敏感性试验 | 第90-91页 |
| 2.7 耐酸实验 | 第91页 |
| 2.8 Triton X-100诱导的自溶实验 | 第91页 |
| 2.9 细胞感染实验 | 第91-93页 |
| 3 结果 | 第93-99页 |
| 3.1 胞内c-di-AMP含量检测 | 第93页 |
| 3.2 gdpP的缺失对生长的影响 | 第93-94页 |
| 3.3 细菌的形态观察 | 第94-95页 |
| 3.4 生物被膜的测定 | 第95-96页 |
| 3.5 溶血活性比较 | 第96-97页 |
| 3.6 抗生素敏感性试验 | 第97页 |
| 3.7 耐酸实验 | 第97页 |
| 3.8 Triton X-100诱导的自溶实验 | 第97-98页 |
| 3.9 细胞黏附实验 | 第98页 |
| 3.10 细胞侵袭实验 | 第98-99页 |
| 3.11 细胞毒性实验 | 第99页 |
| 4 讨论 | 第99-102页 |
| 第二节 gdpP的缺失对细菌毒力的影响 | 第102-108页 |
| 1 试剂与材料 | 第102页 |
| 2 试验方法 | 第102-103页 |
| 2.1 半数致死量（LD50）的测定 | 第102页 |
| 2.2 感染实验动物临床症状及存活时间的比较 | 第102-103页 |
| 2.3 感染组织活菌测定 | 第103页 |
| 2.4 组织病理变化观察 | 第103页 |
| 3 试验结果 | 第103-106页 |
| 3.1 小鼠LD50的测定 | 第103-104页 |
| 3.2 存活率实验 | 第104-105页 |
| 3.3 细菌在小鼠的体内的分布 | 第105页 |
| 3.4 病理学观察 | 第105-106页 |
| 4 讨论 | 第106-108页 |
| 第六章 利用转录组测序分析SS2中gdpP的功能 | 第108-128页 |
| 1 试剂与材料 | 第109页 |
| 2 试验方法 | 第109-114页 |
| 2.1 RNA-Seq样品制备及测序 | 第109-112页 |
| 2.2 荧光定量PCR验证部分基因转录组测序结果 | 第112-114页 |
| 3 结果 | 第114-123页 |
| 3.1 RNA的提取与质量检测 | 第114-115页 |
| 3.2 SS2 HA9801野生株和gdpP缺失突变株的基因转录差异 | 第115-122页 |
| 3.3 RNA-seq结果的定量PCR验证 | 第122-123页 |
| 4 讨论 | 第123-128页 |
| 第七章 SS2中c-di-AMP结合蛋白的初步研究 | 第128-144页 |
| 1 试剂与材料 | 第129页 |
| 2 试验方法 | 第129-132页 |
| 2.1 枯草芽孢杆菌DisA蛋白BsuDisA的表达与纯化 | 第129-130页 |
| 2.2 亲和层析法筛选SS2 c-di-AMP结合蛋白可行性分析 | 第130页 |
| 2.3 SS2中c-di-AMP结合蛋白的分离 | 第130-131页 |
| 2.4 分离蛋白的质谱分析 | 第131-132页 |
| 3 结果 | 第132-141页 |
| 3.1 BsuDisA重组蛋白的表达纯化 | 第132-133页 |
| 3.2 亲和层析法筛选SS2 c-di-AMP结合蛋白可行性分析 | 第133-134页 |
| 3.3 SS2中c-di-AMP结合蛋白的分离 | 第134-135页 |
| 3.4 SS2中c-di-AMP结合蛋白的质谱分析 | 第135-141页 |
| 3.5 SS2中c-di-AMP结合蛋白的功能分析 | 第141页 |
| 4 讨论 | 第141-144页 |
| 全文总结 | 第144-145页 |
| 参考文献 | 第145-158页 |
| 攻读博士期间发表的文章 | 第158-159页 |
| 致谢 | 第159-162页 |
| 附件 | 第162页 |
