| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 缩略词表（Abbreviation） | 第11-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-28页 |
| 1 研究背景 | 第12-13页 |
| 2 柑橘低温胁迫应答机制研究进展 | 第13-14页 |
| 2.1 柑橘对低温胁迫的应答 | 第13页 |
| 2.2 柑橘低温胁迫相关转录因子研究 | 第13-14页 |
| 2.3 柑橘低温胁迫相关基因研究 | 第14页 |
| 3 miRNA研究进展 | 第14-26页 |
| 3.1 mi RNA的发现 | 第14-15页 |
| 3.2 mi RNA的生物合成及作用模式 | 第15-16页 |
| 3.3 mi RNA与植物环境胁迫应答 | 第16-23页 |
| 3.4 mi RNA与植物生物胁迫 | 第23-24页 |
| 3.5 mi RNA参与自身代谢 | 第24页 |
| 3.6 mi RNA*的功能 | 第24-25页 |
| 3.7 mi RNA与siRNA的异同 | 第25-26页 |
| 4 本研究的目的与意义 | 第26-28页 |
| 第二章 高通量测序鉴定枳低温相关miRNAs | 第28-50页 |
| 1 引言 | 第28页 |
| 2 材料与方法 | 第28-36页 |
| 2.1 材料与处理 | 第28-29页 |
| 2.2 测序基本原理及工作流程 | 第29-30页 |
| 2.3 数据分析方法 | 第30-33页 |
| 2.4 RNA提取 | 第33-34页 |
| 2.5 反转录实验 | 第34页 |
| 2.6 QRT-PCR | 第34-36页 |
| 3 测序数据信息学分析 | 第36-46页 |
| 3.1 高通量测序数据基础分析 | 第36-37页 |
| 3.2 高通量测序数据高级分析 | 第37-46页 |
| 4 讨论 | 第46-49页 |
| 4.1 高通量测序技术为miRNA的研究提供强力支持 | 第46页 |
| 4.2 枳丰富的小RNA | 第46-47页 |
| 4.3 枳低温相关miRNA | 第47-48页 |
| 4.4 枳新miRNAs及其靶基因预测 | 第48页 |
| 4.5 低温相关mi RNA与其靶基因 | 第48-49页 |
| 5 小结 | 第49-50页 |
| 第三章ptf-miR396b在枳低温应答中的作用研究 | 第50-88页 |
| 1 前言 | 第50页 |
| 2 材料方法 | 第50-64页 |
| 2.1 植物中miR396 家族序列比对及保守性分析 | 第50-51页 |
| 2.2 枳成熟ptf-miR396b及其前体在低温响应过程中表达分析 | 第51-53页 |
| 2.3 转基因材料获得 | 第53-55页 |
| 2.4 转基因植株表型分析 | 第55-56页 |
| 2.5 转基因植株抗性鉴定及生理指标测定 | 第56页 |
| 2.6 靶基因 5’-RACE验证 | 第56-61页 |
| 2.8 烟草瞬时转化 | 第61-63页 |
| 2.9 农杆菌介导的烟草稳定遗传转化 | 第63页 |
| 2.10 多胺含量测定 | 第63-64页 |
| 2.11 乙烯释放量测定 | 第64页 |
| 3 结果分析 | 第64-83页 |
| 3.1 植物中miR396 家族序列比对及保守性分析 | 第64-66页 |
| 3.2 枳ptf-miR396b前体二级结构与表达模式分析 | 第66页 |
| 3.3 超表达载体构建与柠檬转化 | 第66-68页 |
| 3.4 超表达载体转化烟草阳性鉴定 | 第68-69页 |
| 3.5 转基因柠檬表型分析 | 第69-70页 |
| 3.6 转基因植株抗寒性鉴定 | 第70-72页 |
| 3.7 ptf-miR396b靶基因预测 | 第72-73页 |
| 3.8 靶基因RLM-5’-RACE验证及其表达 | 第73-75页 |
| 3.9 瞬时转化验证靶基因与ptf-miR396b关系 | 第75-77页 |
| 3.10 转基因植株多胺含量测定与相关基因表达分析 | 第77-81页 |
| 3.11 低温处理过程中乙烯释放量测定分析 | 第81页 |
| 3.12 ptf-miR396b抗寒性应答模式分析 | 第81-83页 |
| 4 讨论 | 第83-86页 |
| 4.1 mi R396 家族在植物中高度保守 | 第83页 |
| 4.2 mi RNA在植物抵御非生物逆境胁迫中的作用 | 第83-84页 |
| 4.3 mi R396 在植物生长发育和逆境胁迫应答中的作用 | 第84-86页 |
| 5 小结 | 第86-88页 |
| 第四章 枳一个新miRNA的克隆鉴定及功能初步分析 | 第88-97页 |
| 1 引言 | 第88-89页 |
| 2 材料与方法 | 第89-91页 |
| 2.1 材料 | 第89页 |
| 2.2 实验方法 | 第89-91页 |
| 3 结果分析 | 第91-95页 |
| 3.1 ptf-miRn02 和ptf-miRn04 成熟序列及茎环结构 | 第91-92页 |
| 3.2 ptf-miRn04 在枳响应低温胁迫中的表达模式 | 第92页 |
| 3.3 MIRN04 转烟草阳性鉴定 | 第92-93页 |
| 3.3 转基因烟草抗寒性分析 | 第93页 |
| 3.4 靶基因预测及表达验证 | 第93-95页 |
| 4 讨论 | 第95-96页 |
| 5 小结 | 第96-97页 |
| 参考文献 | 第97-111页 |
| 附表 1 | 第111-114页 |
| 附表 2 | 第114-116页 |
| 附表 3 | 第116-117页 |
| 致谢 | 第117-118页 |
