| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-32页 |
| 1.1 昆虫黑化现象研究概况 | 第12-21页 |
| 1.1.1 昆虫黑化突变的生物学意义 | 第12-15页 |
| 1.1.2 黑色素生物合成基因在昆虫黑化中的作用 | 第15-19页 |
| 1.1.3 昆虫黑色素合成基因的转录调控方式 | 第19-21页 |
| 1.2 酪氨酸羟化酶基因的研究进展 | 第21-26页 |
| 1.2.1 哺乳动物和昆虫中酪氨酸羟化酶的异同点 | 第21-24页 |
| 1.2.2 酪氨酸羟化酶基因的调控机制 | 第24-26页 |
| 1.3 FTZ-f1转录因子研究进展 | 第26-29页 |
| 1.3.1 FTZ-f1转录因子的功能 | 第26-28页 |
| 1.3.2 FTZ-f1对靶基因的调控方式 | 第28-29页 |
| 1.4 甜菜夜蛾蛹黑突变的研究现状 | 第29-31页 |
| 1.5 本研究的意义和主要内容 | 第31-32页 |
| 1.5.1 研究意义 | 第31页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第31-32页 |
| 第二章 甜菜夜蛾蛹黑突变体形态观察及适合度变化研究 | 第32-45页 |
| 2.1 材料与方法 | 第32-35页 |
| 2.1.1 供试昆虫 | 第32-33页 |
| 2.1.2 甜菜夜蛾人工饲料的配制及饲养条件 | 第33页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第33页 |
| 2.1.4 甜菜夜蛾化蛹图像采集 | 第33页 |
| 2.1.5 甜菜夜蛾蛹黑突变体实验种群生命表建立 | 第33-34页 |
| 2.1.6 甜菜夜蛾蛹黑突变体交配能力研究 | 第34页 |
| 2.1.7 黑化昆虫适合度变化相关因子分析 | 第34-35页 |
| 2.1.8 数据统计方法 | 第35页 |
| 2.2 结果与分析 | 第35-43页 |
| 2.2.1 甜菜夜蛾正常型及蛹黑型蛹色渐变图 | 第35-36页 |
| 2.2.2 甜菜夜蛾蛹黑突变体适合度变化 | 第36-40页 |
| 2.2.3 黑化昆虫适合度变化的决定性因子 | 第40-43页 |
| 2.3 讨论 | 第43-45页 |
| 第三章 甜菜夜蛾蛹黑型突变体形成的关键基因的克隆及功能鉴定 | 第45-82页 |
| 3.1 材料与方法 | 第46-62页 |
| 3.1.1 供试虫源 | 第46页 |
| 3.1.2 菌株和载体 | 第46页 |
| 3.1.3 主要仪器设备及耗材 | 第46页 |
| 3.1.4 实验试剂 | 第46-47页 |
| 3.1.5 常用试剂及培养基的配制 | 第47-48页 |
| 3.1.6 Trizol抽提甜菜夜蛾表皮组织总RNA | 第48页 |
| 3.1.7 c DNA第一链合成 | 第48-50页 |
| 3.1.8 引物设计 | 第50页 |
| 3.1.9 RT-PCR | 第50页 |
| 3.1.10 目的片段克隆 | 第50-51页 |
| 3.1.11 5’RACE和 3’RACE | 第51-56页 |
| 3.1.12 半定量RT-PCR | 第56-57页 |
| 3.1.13 实时荧光定量PCR | 第57-58页 |
| 3.1.14 序列分析及进化树构建 | 第58-59页 |
| 3.1.15 ds RNA合成及注射 | 第59-62页 |
| 3.1.16 酶抑制剂饲喂 | 第62页 |
| 3.1.17 数据统计方法 | 第62页 |
| 3.2 结果与分析 | 第62-79页 |
| 3.2.1 酪氨酸羟化酶基因片段克隆及表达量比较分析 | 第62-64页 |
| 3.2.2 多巴脱羧酶基因片段克隆及表达量比较分析 | 第64-65页 |
| 3.2.3 漆酶基因片段克隆及表达量比较分析 | 第65-66页 |
| 3.2.4 两品系酪氨酸羟化酶基因c DNA序列分析 | 第66-69页 |
| 3.2.5 昆虫酪氨酸羟化酶序列比对及进化树构建 | 第69页 |
| 3.2.6 酪氨酸羟化酶基因在化蛹前后的表达谱 | 第69-71页 |
| 3.2.7 酪氨酸羟化酶基因RNAi对蛹色的影响 | 第71-73页 |
| 3.2.8 酪氨酸羟化酶抑制剂 3-IT饲喂对蛹色的影响 | 第73-75页 |
| 3.2.9 两品系多巴脱羧酶基因c DNA序列分析 | 第75-77页 |
| 3.2.10 昆虫多巴脱羧酶序列比对及进化树构建 | 第77页 |
| 3.2.11 多巴脱羧酶基因在化蛹前后的表达谱 | 第77-79页 |
| 3.2.12 多巴脱羧酶抑制剂饲喂效果 | 第79页 |
| 3.3 讨论 | 第79-82页 |
| 第四章 酪氨酸羟化酶基因启动子克隆及分析 | 第82-101页 |
| 4.1 材料与方法 | 第82-92页 |
| 4.1.1 供试虫源 | 第82-83页 |
| 4.1.2 菌株和载体 | 第83页 |
| 4.1.3 主要仪器设备及耗材 | 第83页 |
| 4.1.4 实验试剂和试剂盒 | 第83页 |
| 4.1.5 常用试剂及培养基的配制 | 第83-84页 |
| 4.1.6 甜菜夜蛾基因组DNA提取 | 第84-85页 |
| 4.1.7 Genome Walking | 第85-86页 |
| 4.1.8 引物设计 | 第86页 |
| 4.1.9 巢式PCR | 第86-87页 |
| 4.1.10 启动子序列分析 | 第87页 |
| 4.1.11 萤光素酶报告基因载体构建 | 第87-89页 |
| 4.1.12 酪氨酸羟化酶基因启动子 5’progressive deletion载体构建 | 第89-90页 |
| 4.1.13 细胞培养与转染步骤 | 第90-91页 |
| 4.1.14 细胞裂解与萤光素酶活性测定 | 第91-92页 |
| 4.1.15 数据处理和分析方法 | 第92页 |
| 4.2 结果与分析 | 第92-99页 |
| 4.2.1 酪氨酸羟化酶基因启动子调控元件预测 | 第92-96页 |
| 4.2.2 甜菜夜蛾酪氨酸羟化酶基因启动子活性元件定位 | 第96-99页 |
| 4.3 讨论 | 第99-101页 |
| 第五章 转录因子 βFTZ-f1和FTZ对甜菜夜蛾酪氨酸羟化酶基因的调控 | 第101-147页 |
| 5.1 材料与方法 | 第101-121页 |
| 5.1.1 供试虫源 | 第101页 |
| 5.1.2 菌株和载体 | 第101-102页 |
| 5.1.3 主要仪器设备及耗材 | 第102页 |
| 5.1.4 实验试剂及试剂盒 | 第102-103页 |
| 5.1.5 常用试剂及培养基的配制 | 第103-104页 |
| 5.1.6 Trizol抽提甜菜夜蛾表皮组织总RNA | 第104页 |
| 5.1.7 基因组DNA去除及c DNA第一链合成 | 第104-106页 |
| 5.1.8 引物设计 | 第106页 |
| 5.1.9 RT-PCR | 第106页 |
| 5.1.10 Genome Walking | 第106-108页 |
| 5.1.11 3’RACE | 第108-109页 |
| 5.1.12 目的片段克隆 | 第109页 |
| 5.1.13 序列分析及进化树构建 | 第109-110页 |
| 5.1.14 半定量RT-PCR | 第110页 |
| 5.1.15 实时荧光定量PCR | 第110-111页 |
| 5.1.16 ds RNA合成 | 第111页 |
| 5.1.17 β-FTZ-f1和FTZ真核表达载体构建 | 第111-112页 |
| 5.1.18 定点突变和定点缺失载体构建 | 第112-116页 |
| 5.1.19 细胞培养与转染 | 第116-118页 |
| 5.1.20 细胞裂解与萤光素酶活性测定 | 第118页 |
| 5.1.21 核蛋白的抽提 | 第118-119页 |
| 5.1.22 凝胶阻滞实验 | 第119-121页 |
| 5.1.23 数据处理和分析方法 | 第121页 |
| 5.2 结果与分析 | 第121-144页 |
| 5.2.1 甜菜夜蛾转录因子 βFTZ-f1 c DNA序列分析 | 第121-124页 |
| 5.2.2 昆虫 βFTZ-f1序列比对及进化树构建 | 第124-125页 |
| 5.2.3 βFTZ-f1在化蛹前后的表达谱 | 第125-128页 |
| 5.2.4 βFTZ-f1对酪氨酸羟化酶基因启动子活性调节 | 第128-130页 |
| 5.2.5 ds RNA干扰 βFTZ-f1对酪氨酸羟化酶基因启动子活性的影响 | 第130-131页 |
| 5.2.6 酪氨酸羟化酶基因启动子与βFTZ-f1的EMSA分析 | 第131-132页 |
| 5.2.7 βFTZ-f1与FTZ对酪氨酸羟化酶的共同调节 | 第132-134页 |
| 5.2.8 酪氨酸羟化酶基因启动子FTZ的EMSA分析 | 第134-136页 |
| 5.2.9 酪氨酸羟化酶基因启动子FTZ位点缺失与突变分析 | 第136-138页 |
| 5.2.10 酪氨酸羟化酶基因启动子区 βFTZ-f1结合位点定位 | 第138-144页 |
| 5.3 讨论 | 第144-147页 |
| 第六章 结论和展望 | 第147-149页 |
| 6.1 主要结论 | 第147页 |
| 6.2 展望 | 第147-148页 |
| 6.3 论文创新点 | 第148-149页 |
| 参考文献 | 第149-161页 |
| 附录1 本实验所涉及到的引物序列 | 第161-165页 |
| 附录2 本实验使用的载体和试剂盒 | 第165-167页 |
| 附录3 本实验克隆得到的序列 | 第167-174页 |
| 附录4 攻读博士学位期间发表的论文 | 第174-175页 |
| 致谢 | 第175-177页 |
