| 摘要 | 第5-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 主要符号表 | 第17-19页 |
| 第一章 绪论 | 第19-41页 |
| 1.1 温室效应及温室气体 | 第19-20页 |
| 1.2 CO_2排放现状与危害 | 第20-21页 |
| 1.3 碳减排与微藻生物固碳技术 | 第21-23页 |
| 1.3.1 碳减排技术与生物固碳 | 第21-22页 |
| 1.3.2 微藻固定CO_2的研究 | 第22-23页 |
| 1.4 微藻通过光合作用固定CO_2的机理 | 第23-26页 |
| 1.4.1 光合作用 | 第23-24页 |
| 1.4.2 光合作用的调控 | 第24-26页 |
| 1.5 果糖-1,6-二磷酸醛缩酶（FBA）研究进展 | 第26-27页 |
| 1.5.1 FBA酶的性质 | 第26-27页 |
| 1.5.2 FBA酶基因工程研究 | 第27页 |
| 1.6 微藻基因工程简介 | 第27-29页 |
| 1.7 小球藻基因工程研究进展 | 第29-37页 |
| 1.7.1 小球藻的遗传转化方法 | 第31-33页 |
| 1.7.2 载体构建策略 | 第33-34页 |
| 1.7.3 报告基因与筛选标记基因 | 第34-37页 |
| 1.8 本课题的立题依据、研究目的和意义及技术路线 | 第37-41页 |
| 1.8.1 立题依据 | 第37-38页 |
| 1.8.2 研究目的和意义 | 第38-39页 |
| 1.8.3 技术路线 | 第39-41页 |
| 第二章 普通小球藻遗传筛选标记的确定 | 第41-56页 |
| 2.1 引言 | 第41-42页 |
| 2.2 实验材料与仪器 | 第42-44页 |
| 2.2.1 藻种 | 第42页 |
| 2.2.2 培养基 | 第42页 |
| 2.2.3 仪器与设备 | 第42-43页 |
| 2.2.4 主要试剂 | 第43页 |
| 2.2.5 主要试剂的配制 | 第43-44页 |
| 2.3 实验方法 | 第44-48页 |
| 2.3.1 藻种的培养及保存条件 | 第44页 |
| 2.3.2 藻种的ITS法分子鉴定 | 第44-46页 |
| 2.3.3 藻细胞对4种抗生素敏感性的测定 | 第46页 |
| 2.3.4 藻细胞在液体培养基中对不同浓度的G418的敏感性测定 | 第46-47页 |
| 2.3.5 分析方法 | 第47-48页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第48-55页 |
| 2.4.1 普通小球藻的生长曲线 | 第48页 |
| 2.4.2 藻种的ITS分子鉴定 | 第48-49页 |
| 2.4.3 藻细胞对4种抗生素的敏感性 | 第49-52页 |
| 2.4.4 藻细胞在液体培养基中对G418的敏感性 | 第52-55页 |
| 2.5 小结 | 第55-56页 |
| 第三章 普通小球藻稳定遗传转化体系的建立 | 第56-81页 |
| 3.1 引言 | 第56-57页 |
| 3.2 实验材料与仪器 | 第57-61页 |
| 3.2.1 藻种 | 第57页 |
| 3.2.2 菌种及质粒 | 第57页 |
| 3.2.3 培养基 | 第57页 |
| 3.2.4 引物 | 第57-58页 |
| 3.2.5 仪器与设备 | 第58页 |
| 3.2.6 主要试剂 | 第58-59页 |
| 3.2.7 主要试剂的配制 | 第59-61页 |
| 3.3 实验方法 | 第61-70页 |
| 3.3.1 EGFP基因的克隆与鉴定 | 第61-65页 |
| 3.3.2 p BI-EGFP表达载体的构建 | 第65-66页 |
| 3.3.3 藻种的培养及保存条件 | 第66页 |
| 3.3.4 EGFP基因的PEG法转化 | 第66-67页 |
| 3.3.5 荧光显微观察EGFP基因的表达 | 第67页 |
| 3.3.6 转化藻细胞的基因组DNA提取及PCR鉴定 | 第67页 |
| 3.3.7 藻细胞总RNA的提取 | 第67页 |
| 3.3.8 反转录（RT）-PCR鉴定 | 第67-68页 |
| 3.3.9 Southern杂交鉴定 | 第68-70页 |
| 3.3.10 转EGFP藻细胞遗传稳定性的考察 | 第70页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第70-80页 |
| 3.4.1 EGFP基因表达载体的构建 | 第70-73页 |
| 3.4.2 PEG介导法转化EGFP基因到普通小球藻 | 第73-76页 |
| 3.4.3 转EGFP藻细胞的分子鉴定 | 第76-78页 |
| 3.4.4 荧光显微观察EGFP在转化藻细胞中的表达 | 第78页 |
| 3.4.5 转EGFP藻细胞的遗传稳定性 | 第78-80页 |
| 3.5 小结 | 第80-81页 |
| 第四章 普通小球藻RBCS基因叶绿体导肽序列的亚细胞定位功能分析 | 第81-98页 |
| 4.1 引言 | 第81-82页 |
| 4.2 实验材料与仪器 | 第82-83页 |
| 4.2.1 藻种 | 第82页 |
| 4.2.2 菌种及质粒 | 第82页 |
| 4.2.3 培养基 | 第82页 |
| 4.2.4 引物 | 第82页 |
| 4.2.5 仪器与设备 | 第82页 |
| 4.2.6 主要试剂 | 第82-83页 |
| 4.2.7 主要试剂的配制 | 第83页 |
| 4.3 实验方法 | 第83-86页 |
| 4.3.1 rbc S基因cTP序列的预测及克隆 | 第83页 |
| 4.3.2 中间载体p GM-CTP的构建 | 第83-84页 |
| 4.3.3 中间载体p GM-tp EGFP的构建 | 第84-85页 |
| 4.3.4 表达载体p BI-tp EGFP的构建 | 第85-86页 |
| 4.3.5 cTP::EGFP融合基因的PEG法转化 | 第86页 |
| 4.3.6 转化藻细胞的基因组DNA提取及PCR检测 | 第86页 |
| 4.3.7 荧光显微观察cTP::EGFP基因的表达 | 第86页 |
| 4.3.8 cTP序列的亚细胞定位功能分析 | 第86页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第86-96页 |
| 4.4.1 cTP::EGFP融合基因表达载体的构建 | 第86-92页 |
| 4.4.2 cTP::EGFP融合基因在藻细胞中的转化 | 第92-93页 |
| 4.4.3 转cTP::EGFP藻细胞的鉴定及荧光显微观察 | 第93-95页 |
| 4.4.4 cTP序列的亚细胞定位功能分析 | 第95-96页 |
| 4.5 小结 | 第96-98页 |
| 第五章 集胞藻FBA基因在普通小球藻中的过表达及其对光合固碳的影响 | 第98-121页 |
| 5.1 引言 | 第98页 |
| 5.2 实验材料与仪器 | 第98-103页 |
| 5.2.1 藻种及实验动物 | 第98页 |
| 5.2.2 菌种及质粒 | 第98-99页 |
| 5.2.3 培养基 | 第99页 |
| 5.2.4 引物 | 第99页 |
| 5.2.5 仪器与设备 | 第99-100页 |
| 5.2.6 主要试剂 | 第100页 |
| 5.2.7 主要试剂的配制 | 第100-103页 |
| 5.3 实验方法 | 第103-109页 |
| 5.3.1 藻种的培养及保存条件 | 第103页 |
| 5.3.2 集胞藻的FBA基因的克隆及表达载体的构建 | 第103-105页 |
| 5.3.3 集胞藻FBA基因的PEG法转化 | 第105页 |
| 5.3.4 转FBA藻细胞的分子鉴定 | 第105-107页 |
| 5.3.5 FBA酶活的测定 | 第107-108页 |
| 5.3.6 分析方法 | 第108-109页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第109-120页 |
| 5.4.1 集胞藻FBA基因过表达载体的构建 | 第109-112页 |
| 5.4.2 融合cTP序列的集胞藻FBA基因在藻细胞中的转化 | 第112-113页 |
| 5.4.3 转FBA普通小球藻的分子鉴定 | 第113-116页 |
| 5.4.4 转化藻细胞中FBA酶活性的检测 | 第116-117页 |
| 5.4.5 转FBA藻细胞的生长曲线 | 第117-118页 |
| 5.4.6 集胞藻FBA对普通小球藻光合速率的影响 | 第118-120页 |
| 5.5 小结 | 第120-121页 |
| 第六章 集胞藻FBA酶对普通小球藻光合活性的调控机理探究 | 第121-136页 |
| 6.1 引言 | 第121页 |
| 6.2 实验材料与仪器 | 第121-126页 |
| 6.2.1 藻种 | 第121页 |
| 6.2.2 菌种及质粒 | 第121页 |
| 6.2.3 培养基 | 第121-122页 |
| 6.2.4 引物 | 第122页 |
| 6.2.5 仪器与设备 | 第122页 |
| 6.2.6 主要试剂 | 第122页 |
| 6.2.7 主要试剂的配制 | 第122-126页 |
| 6.3 实验方法 | 第126-129页 |
| 6.3.1 藻种的培养及保存条件 | 第126页 |
| 6.3.2 卡尔文循环关键酶酶活的测定 | 第126-128页 |
| 6.3.3 卡尔文循环关键酶基因表达水平的测定 | 第128-129页 |
| 6.3.4 分析方法 | 第129页 |
| 6.4 结果与讨论 | 第129-135页 |
| 6.4.1 转FBA藻的叶绿素a浓度 | 第129-130页 |
| 6.4.2 转FBA藻细胞吸收光谱的测定 | 第130-131页 |
| 6.4.3 转FBA藻的叶绿素荧光参数 | 第131-132页 |
| 6.4.4 卡尔文循环关键酶基因表达水平与酶活的测定 | 第132-135页 |
| 6.5 小结 | 第135-136页 |
| 结论与展望 | 第136-140页 |
| 参考文献 | 第140-152页 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 | 第152-153页 |
| 致谢 | 第153-154页 |
| 附表 | 第154页 |
