| 中英文对照表 | 第6-8页 |
| 摘要 | 第8-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 1 引言 | 第15-18页 |
| 2 实验材料 | 第18-22页 |
| 2.1 细胞株和主要质粒 | 第18-19页 |
| 2.2 主要试剂 | 第19-20页 |
| 2.3 主要仪器和设备 | 第20-21页 |
| 2.4 常规试剂及配制 | 第21-22页 |
| 3 方法 | 第22-33页 |
| 3.1 SARS-CoV／NL63-CoV 3CLpro及其突变体的构建 | 第22-25页 |
| 3.1.1 设计引物 | 第22-23页 |
| 3.1.2 定点突变PCR | 第23-24页 |
| 3.1.3 PCR产物回收后消化酶切 | 第24页 |
| 3.1.4 转化 | 第24页 |
| 3.1.5 测序鉴定 | 第24-25页 |
| 3.2 报告基因双荧光素酶活性检测法 | 第25页 |
| 3.3 实时定量PCR实验 | 第25-28页 |
| 3.3.1 细胞总RNA的提取 | 第25-26页 |
| 3.3.2 RNA逆转录实验 | 第26-27页 |
| 3.3.3 Real-time PCR | 第27-28页 |
| 3.4 酶联免疫吸附实验 | 第28页 |
| 3.5 RIG-I通路信号蛋白激活的干扰素分析 | 第28-29页 |
| 3.6 Western blotting分析蛋白表达量 | 第29-30页 |
| 3.7 去泛素化活性检测 | 第30-31页 |
| 3.7.1 MERS 3CLproDUB活性检测 | 第30页 |
| 3.7.2 MERS 3CLpro体外DUB活性检测 | 第30-31页 |
| 3.7.3 MERS 3CLpro对Ub-K48和Ub-K63 DUB活性检测 | 第31页 |
| 3.7.4 去ISG和去SUMO活性检测 | 第31页 |
| 3.8 免疫共沉淀技术检测蛋白泛素化水平 | 第31页 |
| 3.9 检测自噬体形成 | 第31-32页 |
| 3.9.1 激光共聚焦检测自噬体形成 | 第31-32页 |
| 3.9.2 电子投射电镜检测自噬体形成 | 第32页 |
| 3.10 自噬标志蛋白LC3-II表达分析 | 第32页 |
| 3.11 检测自噬底物蛋白p62稳定性 | 第32页 |
| 3.12 免疫荧光技术检测自噬膜流（autophgic flux） | 第32-33页 |
| 3.13 统计学分析 | 第33页 |
| 4 结果 | 第33-47页 |
| 4.1 MERS-CoV基因组结构和 3C样蛋白酶 | 第33-34页 |
| 4.2 3CLpro是一种新IFN拮抗剂 | 第34-37页 |
| 4.2.1 不同种人类冠状病毒 3CLpro均明显抑制干扰素表达 | 第34-35页 |
| 4.2.2 3CLpro的干扰素拮抗活性依赖于蛋白酶催化活性 | 第35-36页 |
| 4.2.3 MERS 3CLpro通过RIG-I通路抑制干扰素表达 | 第36-37页 |
| 4.3 MERS冠状病毒 3C样蛋白酶是一种新去泛素化酶 | 第37-40页 |
| 4.3.1 MERS 3CLpro具有去泛素化酶（DUB）活性 | 第37-38页 |
| 4.3.2 MERS 3CLpro对不同连接形式泛素具有去泛素化活性 | 第38-39页 |
| 4.3.3 MERS 3CLpro具有去ISG活性和去SUMO活性 | 第39-40页 |
| 4.4 3CLpro对调节蛋白（RIG-I／TBK1／IRF3）的去泛素化作用 | 第40-42页 |
| 4.5 3C样蛋白酶是一种新的自噬诱导蛋白 | 第42-47页 |
| 4.5.1 MERS 3CLpro引起细胞eGFP-LC3B点状聚集 | 第42页 |
| 4.5.2 3CLpro诱导细胞自噬标志蛋白LC3-II表达 | 第42-43页 |
| 4.5.3 电镜下观察自噬体膜结构 | 第43-44页 |
| 4.5.4 MERS 3CLpro诱导自噬具有时间依赖性 | 第44-45页 |
| 4.5.5 MERS 3CLpro诱导不完全细胞自噬效应 | 第45-46页 |
| 4.5.6 NL63-CoV，SARS-CoV3CLpro可诱导细胞自噬并且不依赖酶催化活性位点 | 第46-47页 |
| 5 讨论 | 第47-50页 |
| 6 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-54页 |
| 附录 个人简历 | 第54-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 综述 | 第57-66页 |
| 综述参考文献 | 第65-66页 |
