| 中文摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5页 |
| 缩写对比表 | 第6-11页 |
| 第一章 综述 | 第11-23页 |
| 1.1 铜绿假单胞菌及其致病性 | 第11-12页 |
| 1.2 铜绿假单胞菌Ⅲ型分泌系统 | 第12-15页 |
| 1.2.1 铜绿假单胞菌Ⅲ型分泌系统的结构模型 | 第12-14页 |
| 1.2.2 铜绿假单胞菌Ⅲ型分泌系统的效应蛋白 | 第14-15页 |
| 1.3 铜绿假单胞菌Ⅲ型分泌系统的调控 | 第15-20页 |
| 1.3.1 ExsA对T3SS的调控 | 第16-17页 |
| 1.3.2 双组分系统以及小RNA调控铜绿假单胞菌的T3SS | 第17-19页 |
| 1.3.3 Vfr对T3SS及毒性因子的调控 | 第19-20页 |
| 1.3.4 其他调节子对T3SS的调控 | 第20页 |
| 1.4 生物被膜 | 第20-21页 |
| 1.5 铜绿假单胞菌Ⅲ型分泌系统的研究进展及意义 | 第21-23页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第23-41页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-29页 |
| 2.1.1 菌株,质粒与引物 | 第23-27页 |
| 2.1.2 试剂 | 第27-28页 |
| 2.1.3 仪器 | 第28页 |
| 2.1.4 培养基和部分试剂溶液的配制方法 | 第28-29页 |
| 2.2 基本实验方法 | 第29-32页 |
| 2.2.1 质粒的小量提取 | 第29-30页 |
| 2.2.2 感受态细胞的制备 | 第30页 |
| 2.2.3 化学转化 | 第30页 |
| 2.2.4 电转化 | 第30页 |
| 2.2.5 聚合酶链式反应(PCR) | 第30-31页 |
| 2.2.6 质粒以及DNA片段的酶切和连接 | 第31-32页 |
| 2.3 基因转录水平的研究方法 | 第32-33页 |
| 2.3.1 基因表达载体的构建 | 第32页 |
| 2.3.2 双亲株杂交 | 第32-33页 |
| 2.3.3 基因转录水平的检测 | 第33页 |
| 2.4 对铜绿假单胞菌中影响T3SS的基因的筛选 | 第33-36页 |
| 2.4.1 转座突变库的构建 | 第33-34页 |
| 2.4.2 随机PCR和基因测序确定转座子插入位点 | 第34-36页 |
| 2.4.3 序列比对确定突变基因 | 第36页 |
| 2.5 突变体的构建 | 第36-37页 |
| 2.5.1 构建敲除质粒 | 第36-37页 |
| 2.5.2 三亲株杂交试验 | 第37页 |
| 2.6 基因翻译水平的检测(western-blotting) | 第37-38页 |
| 2.7 突变体表型的研究方法 | 第38-39页 |
| 2.7.1 丛动实验(swarming) | 第38页 |
| 2.7.2 生物被膜检测 | 第38-39页 |
| 2.8 突变体毒性检测 | 第39-41页 |
| 2.8.1 细胞毒性检测 | 第39页 |
| 2.8.2 小鼠实验 | 第39-41页 |
| 第三章 实验结果 | 第41-56页 |
| 3.1 转座突变库的筛选结果 | 第41-42页 |
| 3.2 对PA4857功能的研究 | 第42-48页 |
| 3.2.1 TspR(PA4857)在PAO1基因组中的位置 | 第42-43页 |
| 3.2.2 TspR对T3SS在转录水平上起正调节 | 第43-44页 |
| 3.2.3 TspR对T3SS在蛋白水平上起正调节 | 第44页 |
| 3.2.4 TspR与生物被膜的形成有关 | 第44-45页 |
| 3.2.5 TspR调控生物运动 | 第45-46页 |
| 3.2.6 tspR突变体降低PAO1的细胞毒性及其致病性 | 第46-48页 |
| 3.3 TspR与其他T3SS调节子的关系 | 第48-56页 |
| 3.3.1 TspR在转录水平和转录后水平调控ExsA的表达 | 第48-50页 |
| 3.3.2 TspR的表达受RetS的调控 | 第50-52页 |
| 3.3.3 TspR通过RsmY和RsmZ起作用 | 第52-54页 |
| 3.3.4 TspR通过RetS-RsmY/Z通路对生物被膜的形成进行调控 | 第54-56页 |
| 讨论 | 第56-59页 |
| 参考文献 | 第59-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 攻读硕士学位期间取得的科研成果 | 第67页 |
