| 中文摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 1 前言 | 第14-27页 |
| 1.1 兔病毒性出血症的概述 | 第14-16页 |
| 1.2 RHDV基因组结构及功能 | 第16-17页 |
| 1.3 RHDV病原学特点 | 第17-18页 |
| 1.3.1 RHDV形态学 | 第17页 |
| 1.3.2 RHDV对理化因素的抵抗力 | 第17-18页 |
| 1.3.3 RHDV的血凝特性 | 第18页 |
| 1.4 RHD的流行病学研究 | 第18-19页 |
| 1.4.1 流行特点 | 第18页 |
| 1.4.2 传染源与传播途径 | 第18-19页 |
| 1.4.3 易感动物 | 第19页 |
| 1.5 RHD诊断方法的研究进展 | 第19-25页 |
| 1.5.1 根据临床症状进行初步诊断 | 第19页 |
| 1.5.2 病理剖检及病理组织学诊断 | 第19-21页 |
| 1.5.3 实验室检测 | 第21-25页 |
| 1.6 本研究的目的及意义 | 第25-27页 |
| 2 材料与方法 | 第27-46页 |
| 2.1 材料 | 第27-30页 |
| 2.1.1 主要试剂和材料 | 第27页 |
| 2.1.2 主要试剂的配制 | 第27-30页 |
| 2.1.2.1 琼脂糖凝胶电泳试剂 | 第27-28页 |
| 2.1.2.2 诱导表达试剂 | 第28页 |
| 2.1.2.3 SDS-PAGE试剂的配制 | 第28-29页 |
| 2.1.2.4 Western blot试剂的配制 | 第29页 |
| 2.1.2.5 ELISA试剂的配制 | 第29-30页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第30页 |
| 2.2 方法 | 第30-46页 |
| 2.2.1 RHDV的分离与分子遗传变异特性分析 | 第30-37页 |
| 2.2.1.1 兔出血症病毒VP60基因的克隆 | 第30-35页 |
| 2.2.1.2 VP60基因的核酸序列分析 | 第35-37页 |
| 2.2.2 兔出血症病毒RPA检测方法的建立 | 第37-39页 |
| 2.2.2.1 兔出血症病毒VP60基因引物的设计 | 第37页 |
| 2.2.2.2 兔出血症病毒RNA的提取 | 第37页 |
| 2.2.2.3 兔出血症病毒RPA检测方法的建立 | 第37-38页 |
| 2.2.2.4 特异性试验 | 第38页 |
| 2.2.2.5 敏感性试验 | 第38-39页 |
| 2.2.2.6 人工感染的样本检测 | 第39页 |
| 2.2.2.7 临床应用 | 第39页 |
| 2.2.3 间接ELISA检测抗体的研究 | 第39-46页 |
| 2.2.3.1 VP60基因序列比对 | 第39页 |
| 2.2.3.2 VP60基因的分段扩增及原核表达载体构建 | 第39-41页 |
| 2.2.3.3 VP60-1、VP60-2、VP60-3 基因的原核表达及纯化 | 第41-43页 |
| 2.2.3.4 Western blot分析 | 第43页 |
| 2.2.3.5 间接ELISA方法的建立 | 第43-45页 |
| 2.2.3.6 RHD免疫抗体检测 | 第45-46页 |
| 3 结果与分析 | 第46-64页 |
| 3.1 RHDV毒株的分离与分子遗传变异特性分析 | 第46-49页 |
| 3.1.1 VP60基因的克隆 | 第46页 |
| 3.1.2 VP60基因的核酸序列系统进化树分析 | 第46-49页 |
| 3.2 兔出血症病毒RPA检测方法的建立 | 第49-52页 |
| 3.2.1 重组酶聚合酶等温扩增反应 | 第49页 |
| 3.2.2 RPA反应条件的优化 | 第49-50页 |
| 3.2.3 特异性试验 | 第50页 |
| 3.2.4 敏感性试验 | 第50-51页 |
| 3.2.5 人工感染的样本检测 | 第51页 |
| 3.2.6 临床应用 | 第51-52页 |
| 3.3 间接ELISA检测抗体的研究 | 第52-64页 |
| 3.3.1 VP60基因序列比对 | 第52-56页 |
| 3.3.2 VP60基因的分段扩增及原核表达载体构建 | 第56-57页 |
| 3.3.3 VP60-1、VP60-2、VP60-3 基因的原核表达及纯化 | 第57-59页 |
| 3.3.4 Western blot分析 | 第59页 |
| 3.3.5 间接ELISA方法的建立 | 第59-62页 |
| 3.3.5.1 抗原最适包被浓度与血清最佳稀释度的确定 | 第59-60页 |
| 3.3.5.2 抗原最佳包被时间的确定 | 第60-61页 |
| 3.3.5.3 最佳封闭液的确定 | 第61页 |
| 3.3.5.4 最佳封闭时间的确定 | 第61页 |
| 3.3.5.5 二抗工作浓度的确定 | 第61-62页 |
| 3.3.5.6 ELISA阴阳性临界值的确定 | 第62页 |
| 3.3.6 RHD免疫抗体检测 | 第62-64页 |
| 4 讨论 | 第64-67页 |
| 4.1 RHDV毒株的分离与分子遗传变异特性分析 | 第64页 |
| 4.2 兔病毒性出血症RPA检测方法的建立 | 第64-65页 |
| 4.3 间接ELISA检测抗体的研究 | 第65-67页 |
| 5 结论 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第79-80页 |
| 个人简介 | 第80页 |
