摘要 | 第6-7页 |
abstract | 第7-8页 |
英文缩略表 | 第11-12页 |
第一章 引言 | 第12-22页 |
1.1 兔出血症概述 | 第12-17页 |
1.1.1 病毒学分类与形态结构 | 第12-13页 |
1.1.2 RHDV结构蛋白VP60的概述 | 第13-14页 |
1.1.3 RHDV病毒粒子的理化性质 | 第14页 |
1.1.4 流行病学 | 第14页 |
1.1.5 RHD的临床症状和病理学变化 | 第14-15页 |
1.1.6 RHDV的生活周期 | 第15页 |
1.1.7 RHD的诊断与检测 | 第15-17页 |
1.2 适配体及SELEX技术 | 第17-20页 |
1.2.1 SELEX技术原理 | 第17页 |
1.2.2 SELEX筛选流程 | 第17-18页 |
1.2.3 适配体的优势 | 第18-19页 |
1.2.4 适配体在检测中的应用 | 第19页 |
1.2.5 适配体在治疗中的应用 | 第19-20页 |
1.2.6 适配体应用前景 | 第20页 |
1.3 本研究的目的及意义 | 第20-22页 |
第二章 RHDV衣壳蛋白VP60特异性适配体的筛选 | 第22-42页 |
2.1 材料 | 第22-23页 |
2.1.1 病毒、菌种及质粒 | 第22页 |
2.1.2 抗体和试剂 | 第22页 |
2.1.3 主要仪器 | 第22页 |
2.1.4 试剂及缓冲液的配制 | 第22-23页 |
2.2 方法 | 第23-31页 |
2.2.1 文库及引物 | 第23页 |
2.2.2 RHDV病毒粒子的纯化 | 第23页 |
2.2.3 病毒的RT-PCR鉴定 | 第23-25页 |
2.2.4 RHDV的血凝实验(HA) | 第25页 |
2.2.5 靶蛋白VP60和消减蛋白的固定 | 第25-26页 |
2.2.6 SELEX筛选流程 | 第26-27页 |
2.2.7 次级文库的获得 | 第27-28页 |
2.2.8 适配体第二轮筛选 | 第28页 |
2.2.9 适配体第四轮筛选 | 第28-29页 |
2.2.10 第20轮次级文库的鉴定 | 第29-30页 |
2.2.11 适配体的克隆分析和测序 | 第30页 |
2.2.12 适配体的鉴定 | 第30-31页 |
2.3 结果 | 第31-40页 |
2.3.1 RHDV病毒粒子的RT-PCR鉴定 | 第31页 |
2.3.2 RHDV病毒粒子的HA检测 | 第31-32页 |
2.3.3 初始寡核苷酸文库的鉴定 | 第32页 |
2.3.4 靶蛋白VP60的固定 | 第32-33页 |
2.3.5 消减蛋白的固定 | 第33页 |
2.3.6 对称PCR生成dsDNA条件的优化 | 第33-35页 |
2.3.7 不对称引物PCR优化 | 第35-36页 |
2.3.8 生物素及链霉素功能活性的测定 | 第36页 |
2.3.9 亚型文库的鉴定 | 第36-37页 |
2.3.10 适配体的克隆、测序 | 第37-38页 |
2.3.11 适配体鉴定和二级结构的预测、分析 | 第38-40页 |
2.4 讨论 | 第40-42页 |
第三章 结论 | 第42-43页 |
参考文献 | 第43-49页 |
致谢 | 第49-50页 |
作者简介 | 第50页 |