| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6页 |
| 中英文缩略表 | 第12-13页 |
| 第一章 引言 | 第13-22页 |
| 1.1 病原学 | 第13-14页 |
| 1.2 流行病学 | 第14-15页 |
| 1.3 临床症状 | 第15页 |
| 1.4 病理变化 | 第15-16页 |
| 1.5 基因组学研究进展 | 第16-18页 |
| 1.6 轮状病毒检测方法的研究进展 | 第18-20页 |
| 1.6.1 免疫学方法 | 第18-19页 |
| 1.6.2 分子生物学技术 | 第19-20页 |
| 1.7 轮状病毒的疫苗研究进展 | 第20-22页 |
| 1.7.1 灭活苗 | 第20页 |
| 1.7.2 弱毒活疫苗 | 第20页 |
| 1.7.3 多价重配疫苗 | 第20-21页 |
| 1.7.4 基因工程疫苗 | 第21页 |
| 1.7.5 植物基因工程技术 | 第21-22页 |
| 第二章 猪腹泻病毒的流行病学调查 | 第22-30页 |
| 摘要 | 第22页 |
| 2.1 实验材料 | 第22页 |
| 2.2 物品准备 | 第22-23页 |
| 2.3 实验仪器及试剂 | 第23页 |
| 2.4 实验方法 | 第23-28页 |
| 2.4.1 样品采集 | 第23-24页 |
| 2.4.2 无害化处理 | 第24页 |
| 2.4.3 样品保存 | 第24页 |
| 2.4.4 样品编号、采样单填写 | 第24页 |
| 2.4.5 样品处理 | 第24-25页 |
| 2.4.6 腹泻四联引物设计 | 第25页 |
| 2.4.7 RT-PCR检测 | 第25-26页 |
| 2.4.8 PCR的扩增 | 第26-27页 |
| 2.4.9 琼脂糖凝胶电泳 | 第27-28页 |
| 2.5 结果与分析 | 第28-30页 |
| 2.5.1 PCR检测结果 | 第28页 |
| 2.5.2 讨论 | 第28-30页 |
| 第三章 猪轮状病毒的分离与鉴定 | 第30-47页 |
| 摘要 | 第30页 |
| 3.1 实验材料 | 第30页 |
| 3.2 实验仪器及试剂 | 第30-31页 |
| 3.3 病料的接种 | 第31页 |
| 3.4 引物设计 | 第31页 |
| 3.5 病毒RNA提取、反转录、PCR | 第31-32页 |
| 3.6 感受态的制备 | 第32页 |
| 3.7 PMD-18T-VP4、PMD-18T-VP7阳性质粒的构建与鉴定 | 第32页 |
| 3.8 猪轮状病毒蚀斑克隆纯化 | 第32-33页 |
| 3.9 猪轮状病毒TCID50的测定 | 第33-34页 |
| 3.9.1 细胞制备 | 第33页 |
| 3.9.2 滴定 | 第33-34页 |
| 3.9.3 接种 | 第34页 |
| 3.9.4 计算感染量 | 第34页 |
| 3.10 猪轮状病毒抗体检测方法的建立 | 第34-35页 |
| 3.10.1 猪轮状病毒中和试验用病毒的制备 | 第34-35页 |
| 3.10.2 猪轮状病毒抗体检测（中和试验） | 第35页 |
| 3.11 结果 | 第35-46页 |
| 3.11.1 猪轮状病毒分离与鉴定 | 第35-37页 |
| 3.11.2 PMD-18T-VP4、PMD-18T-VP7重组质粒的PCR鉴定结果 | 第37-38页 |
| 3.11.3 JS分离株VP4基因型别分析 | 第38页 |
| 3.11.4 JS分离株VP7基因型别分析 | 第38-41页 |
| 3.11.5 猪轮状病毒的噬斑克隆纯化 | 第41-42页 |
| 3.11.6 TCID50测定 | 第42-43页 |
| 3.11.7 猪轮状病毒抗体检测方法的建立 | 第43-46页 |
| 3.12 讨论 | 第46-47页 |
| 第四章 猪轮状病毒LAMP检测方法的建立 | 第47-54页 |
| 摘要 | 第47-48页 |
| 4.1 材料 | 第48页 |
| 4.1.1 试验用毒株 | 第48页 |
| 4.1.2 主要仪器 | 第48页 |
| 4.1.3 主要试剂 | 第48页 |
| 4.2 试验方法 | 第48-50页 |
| 4.2.1 猪轮状病毒JS分离株RNA的提取 | 第48页 |
| 4.2.2 病毒cDNA的制备 | 第48页 |
| 4.2.3 LAMP引物的设计 | 第48-49页 |
| 4.2.4 LAMP反应体系的建立 | 第49-50页 |
| 4.3 结果 | 第50-53页 |
| 4.3.1 最佳甜菜碱浓度的摸索 | 第50页 |
| 4.3.2 最佳Mg2+浓度的摸索 | 第50-51页 |
| 4.3.3 最佳反应温度的摸索 | 第51页 |
| 4.3.4 LAMP扩增产物的序列测定 | 第51页 |
| 4.3.5 LAMP引物特异性检测 | 第51-52页 |
| 4.3.6 LAMP引物灵敏性检测 | 第52页 |
| 4.3.7 临床样本检测 | 第52-53页 |
| 4.4 讨论 | 第53-54页 |
| 第五章 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-61页 |
| 附录 | 第61-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 作者简介 | 第66页 |