| 中文摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-29页 |
| 1. 流感病毒及流行现状 | 第11-14页 |
| 1.1 概述 | 第11页 |
| 1.2 流感病毒的变异 | 第11-13页 |
| 1.3 流感病毒的流行现状 | 第13-14页 |
| 2. 流感疫苗研究进展 | 第14-19页 |
| 2.1 流感灭活疫苗 | 第14-15页 |
| 2.2 流感减毒活疫苗 | 第15-16页 |
| 2.3 细胞培养的流感疫苗 | 第16页 |
| 2.4 DNA疫苗 | 第16-17页 |
| 2.5 重组病毒载体疫苗 | 第17页 |
| 2.6 研究中的通用流感疫苗 | 第17-19页 |
| 2.7 疫苗佐剂的使用 | 第19页 |
| 3. 病毒样颗粒研究进展 | 第19-29页 |
| 3.1 病毒样颗粒概述 | 第19-20页 |
| 3.2 病毒样颗粒的表达体系 | 第20-25页 |
| 3.3 流感病毒样颗粒疫苗研究进展 | 第25-26页 |
| 3.4 通用流感病毒样颗粒疫苗研究进展 | 第26-29页 |
| 第二章 表达H5N1 HA、NA及M1的流感病毒样颗粒制备与鉴定 | 第29-42页 |
| 1. 材料 | 第29-30页 |
| 1.1 病毒和细胞 | 第29页 |
| 1.2 菌种和质粒 | 第29-30页 |
| 1.3 常用试剂 | 第30页 |
| 1.4 昆虫细胞培养基 | 第30页 |
| 1.5 仪器与设备 | 第30页 |
| 2. 实验方法 | 第30-36页 |
| 2.1 重组杆状病毒质粒的构建 | 第31-32页 |
| 2.2 重组杆状病毒的构建与鉴定 | 第32-33页 |
| 2.3 转染Sf9细胞与重组杆状病毒的鉴定 | 第33-34页 |
| 2.4 重组杆状病毒滴度的测定 | 第34页 |
| 2.5 H5N1流感病毒样颗粒大量表达与纯化 | 第34-35页 |
| 2.6 间接免疫荧光法鉴定H5N1蛋白的表达 | 第35页 |
| 2.7 红细胞凝集试验测定H5N1病毒样颗粒血凝滴度 | 第35页 |
| 2.8 H5N1流感病毒样颗粒的电镜观察 | 第35页 |
| 2.9 SDS-PAGE和Western blot鉴定H5N1病毒样颗粒 | 第35-36页 |
| 3. 实验结果 | 第36-40页 |
| 3.1 H5N1 NA-HA-M1重组质粒的鉴定 | 第36-37页 |
| 3.2 重组杆状病毒rBV-NHM基因组鉴定结果 | 第37页 |
| 3.3 重组杆状病毒rBV-NHM滴度的测定 | 第37-38页 |
| 3.4 红细胞凝集试验测定H5N1病毒样颗粒血凝滴度 | 第38页 |
| 3.5 间接免疫荧光法鉴定H5N1蛋白的表达与病毒样颗粒的电镜观察 | 第38-39页 |
| 3.6 H5N1病毒样颗粒的SDS-PAGE和Western blot鉴定 | 第39-40页 |
| 4. 讨论 | 第40-41页 |
| 5. 小结 | 第41-42页 |
| 第三章 H5N1流感病毒样颗粒的小鼠实验免疫研究 | 第42-54页 |
| 1. 材料 | 第42-43页 |
| 1.1 病毒和细胞 | 第42页 |
| 1.2 实验动物 | 第42页 |
| 1.3 常用试剂 | 第42-43页 |
| 1.4 常用仪器 | 第43页 |
| 2. 实验方法 | 第43-47页 |
| 2.1 病毒样颗粒疫苗与H5N1全病毒灭活疫苗的制备 | 第43-45页 |
| 2.2 免疫和攻毒 | 第45页 |
| 2.3 IgG特异性抗体的检测 | 第45-46页 |
| 2.4 血凝抑制抗体效价检测 | 第46页 |
| 2.5 血清微量中和试验 | 第46页 |
| 2.6 小鼠肺的病毒EID_(50)滴定 | 第46页 |
| 2.7 小鼠脾淋巴细胞的分离 | 第46-47页 |
| 2.8 ELISpot检测细胞因子 | 第47页 |
| 2.9 统计学分析 | 第47页 |
| 3. 结果 | 第47-52页 |
| 3.1 H5N1病毒样颗粒和灭活全病毒中HA含量测定 | 第47-48页 |
| 3.2 体液免疫与微量中和抗体检测结果 | 第48-49页 |
| 3.3 小鼠攻毒试验结果 | 第49-50页 |
| 3.4 脾淋巴细胞ELISpot细胞因子检测结果 | 第50-51页 |
| 3.5 小鼠肺脏病毒滴度检测 | 第51-52页 |
| 4. 讨论 | 第52-53页 |
| 5. 小结 | 第53-54页 |
| 第四章 表达LTB、Flic及GM-CSF的嵌合H5N1流感病毒样颗粒的制备与鉴定 | 第54-73页 |
| 1. 材料 | 第54-56页 |
| 1.1 病毒和细胞 | 第54-55页 |
| 1.2 菌种和质粒 | 第55页 |
| 1.3 常用试剂 | 第55页 |
| 1.4 昆虫细胞培养基 | 第55-56页 |
| 1.5 仪器与设备 | 第56页 |
| 2 实验方法 | 第56-64页 |
| 2.1 重组杆状病毒质粒的构建 | 第56-59页 |
| 2.2 重组杆状病毒的构建与鉴定 | 第59-60页 |
| 2.3 转染Sf9细胞与重组杆状病毒的鉴定 | 第60页 |
| 2.4 重组杆状病毒滴度的测定 | 第60-61页 |
| 2.5 LTB、Flic与GM-CSF嵌合流感病毒样颗粒大量表达与纯化 | 第61页 |
| 2.6 间接免疫荧光法鉴定LTB、Flic与GM-CSF蛋白的表达 | 第61-62页 |
| 2.7 红细胞凝集试验测定LTB、Flic与GM-CSF嵌合流感颗粒的血凝滴度 | 第62页 |
| 2.8 LTB、Flic与GM-CSF嵌合流感颗粒的免疫电镜观察 | 第62页 |
| 2.9 Western blot鉴定LTB、Flic与GM-CSF嵌合流感颗粒的蛋白表达 | 第62-63页 |
| 2.10 嵌合颗粒中LTB、Flic或GM-CSF的表达量的定量ELISA检测 | 第63页 |
| 2.11 单唾液酸神经节甙酯(GM1)结合活性分析 | 第63-64页 |
| 3. 实验结果 | 第64-71页 |
| 3.1 重组质粒的鉴定 | 第64-66页 |
| 3.2 重组杆状病毒基因组鉴定结果 | 第66页 |
| 3.3 重组杆状病毒滴度的测定 | 第66-67页 |
| 3.4 红细胞凝集试验测定嵌合颗粒的血凝滴度 | 第67页 |
| 3.5 间接免疫荧光法鉴定嵌合颗粒蛋白的表达 | 第67-68页 |
| 3.6 嵌合病毒颗粒的免疫电镜观察 | 第68-69页 |
| 3.7 嵌合病毒样颗粒的Western blot鉴定 | 第69-70页 |
| 3.8 嵌合颗粒中LTB、Flic或GM-CSF的含量检测 | 第70-71页 |
| 3.9 单唾液酸神经节甙酯(GM1)结合活性分析 | 第71页 |
| 4. 讨论 | 第71-72页 |
| 5. 小结 | 第72-73页 |
| 第五章 LTB、Flic和GM-CSF嵌合H5N1流感病毒样颗粒的小鼠实验免疫研究 | 第73-91页 |
| 1. 材料 | 第73-74页 |
| 1.1 病毒和细胞 | 第73页 |
| 1.2 实验动物 | 第73-74页 |
| 1.3 常用试剂 | 第74页 |
| 1.4 常用仪器 | 第74页 |
| 2. 实验方法 | 第74-77页 |
| 2.1 免疫和攻毒 | 第74-75页 |
| 2.2 IgG特异性抗体的检测 | 第75-76页 |
| 2.3 LTB、Flic和GM-CSF特异性抗体的检测 | 第76页 |
| 2.4 血凝抑制抗体效价检测 | 第76页 |
| 2.5 血清微量中和试验 | 第76页 |
| 2.6 小鼠肺脏的病毒EID_(50)滴定 | 第76-77页 |
| 2.7 小鼠脾淋巴细胞的分离 | 第77页 |
| 2.8 ELISpot检测细胞因子 | 第77页 |
| 2.9 统计学分析 | 第77页 |
| 3 结果 | 第77-88页 |
| 3.1 血凝抑制抗体和IgG特异性免疫应答反应 | 第78-81页 |
| 3.2 LTB、Flic和GM-CSF特异性IgG抗体的检测 | 第81-82页 |
| 3.3 微量中和抗体检测 | 第82-83页 |
| 3.4 小鼠攻毒试验结果 | 第83-86页 |
| 3.5 脾淋巴细胞ELISpot细胞因子检测结果 | 第86-88页 |
| 3.6 小鼠肺脏病毒滴度检测 | 第88页 |
| 4 讨论 | 第88-90页 |
| 5. 小结 | 第90-91页 |
| 结论 | 第91-92页 |
| 缩略词 | 第92-93页 |
| 参考文献 | 第93-111页 |
| 致谢 | 第111-112页 |
| 博士期间发表的学术论文 | 第112-113页 |
