| 摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 第1章 综述 | 第13-21页 |
| 1.1 cAMP的合成 | 第13-14页 |
| 1.2 腺苷酸环化酶 | 第14页 |
| 1.3 磷酸二酯酶 | 第14-15页 |
| 1.4 cAMP效应蛋白 | 第15页 |
| 1.5 cAMP应答转录因子 | 第15-16页 |
| 1.6 细菌致病菌中cAMP的作用 | 第16-21页 |
| 1.6.1 致病细菌的cAMP信号 | 第17-19页 |
| 1.6.2 致病真菌中cAMP信号 | 第19页 |
| 1.6.3 寄生原虫中cAMP信号 | 第19-21页 |
| 第2章 前言 | 第21-23页 |
| 第3章 实验材料和方法 | 第23-39页 |
| 3.1 实验材料 | 第23-25页 |
| 3.1.1 实验菌株,载体和细胞 | 第23页 |
| 3.1.2 所用培养基及培养条件 | 第23-24页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第24-25页 |
| 3.1.4 主要仪器 | 第25页 |
| 3.2 实验方法 | 第25-39页 |
| 3.2.1 结核分枝杆菌Rv1265基因的扩增 | 第25-26页 |
| 3.2.2 Rv1265 PCR产物的回收 | 第26页 |
| 3.2.3 制备大肠杆菌感受态细胞 | 第26页 |
| 3.2.4 大肠杆菌的转化 | 第26页 |
| 3.2.5 Rv1265基因与T载质粒的构建 | 第26-27页 |
| 3.2.6 重组质粒的提取 | 第27页 |
| 3.2.7 Rv1265+pALACE重组质粒的构建 | 第27-28页 |
| 3.2.8 Rv1265重组蛋白在大肠杆菌中的表达和纯化 | 第28-29页 |
| 3.2.9 Rv1265重组耻垢分枝杆菌的构建 | 第29-30页 |
| 3.2.10 重组蛋白在耻垢分枝杆菌中的表达验证 | 第30-31页 |
| 3.2.11 Rv1265重组蛋白在耻垢分枝杆菌中的亚细胞定位分析 | 第31页 |
| 3.2.12 重组耻垢分枝杆菌Ms Rv1265对SDS耐受的影响 | 第31页 |
| 3.2.13 体外模拟重组耻垢分枝杆菌Ms Rv1265在不同PH条件下的存活率 | 第31-32页 |
| 3.2.14 重组耻垢分枝杆菌脂肪酸提取和测定 | 第32页 |
| 3.2.15 重组菌生长曲线的测定 | 第32-33页 |
| 3.2.16 重组菌侵染巨噬细胞存活率检测 | 第33-34页 |
| 3.2.17 定量RT-PCR检测重组菌侵染Raw264.7和THP-1巨噬细胞后相关因子转录水平 | 第34-36页 |
| 3.2.18 LDH测定 | 第36页 |
| 3.2.19 细胞信号通路抑制剂处理细胞 | 第36页 |
| 3.2.20 耻垢分枝杆菌ΔMSMEG5010基因的敲除 | 第36-38页 |
| 3.2.21 数据处理 | 第38-39页 |
| 第4章 结果与分析 | 第39-55页 |
| 4.1 成功构建重组质粒Rv1265+pALACE | 第39-40页 |
| 4.2 构建重组耻垢分枝杆菌Ms_Rv1265 | 第40页 |
| 4.3 Rv1265蛋白在大肠杆菌BL-21中成功表达 | 第40-41页 |
| 4.4 Rv1265在耻垢分枝杆菌Ms_Rv1265中成功表达 | 第41页 |
| 4.5 Rv1265定位于细胞壁和细胞质 | 第41-42页 |
| 4.6 Rv1265的过表达不影响菌株的生长 | 第42-43页 |
| 4.7 Rv1265的过表达增强了菌株在酸性条件下的存活率 | 第43页 |
| 4.8 Rv1265参与耻垢分枝杆菌脂肪酸代谢 | 第43-45页 |
| 4.9 Rv1265可以增强重组菌对于表面活性物质SDS的耐受 | 第45-46页 |
| 4.10 重组菌Ms_Rv1265在巨噬细胞存活的影响 | 第46-48页 |
| 4.10.1 Rv1265有利于重组菌在THP-1细胞的存活,并且可以促进细胞裂解 | 第46-47页 |
| 4.10.2 重组菌Ms Rv1265增强在Raw264.7巨噬细胞内的存活 | 第47-48页 |
| 4.11 Rv1265在耻垢分枝杆菌的过表达会促进THP-1细胞死亡 | 第48页 |
| 4.12 Rv1265的过表达可以特异性诱导THP-1细胞免疫调节细胞因子的表达 | 第48-49页 |
| 4.13 重组菌Ms_Rv1265特异性诱导Raw264.7的免疫调控因子IL-10,IL-12和IL-1β和IL-6上调表达 | 第49-51页 |
| 4.14 Ms_Rv1265通过NF-B和ERK1/2通路调控IL-1β,IL-10,IL-12P40,IL-6 | 第51-52页 |
| 4.15 构建耻垢分枝杆菌同源基因MSMEG5010的敲除菌株 | 第52-53页 |
| 4.16 △MS5010对诺氟沙星敏感 | 第53-55页 |
| 第5章 结论与展望 | 第55-59页 |
| 5.1 实验结论 | 第55页 |
| 5.2 讨论与分析 | 第55-57页 |
| 5.3 展望 | 第57-59页 |
| 参考文献 | 第59-65页 |
| 致谢 | 第65-67页 |
| 在学期间所发表的文章 | 第67页 |
