| 中文摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 第一章 前言 | 第10-22页 |
| 1.1 植物Na~+/H~+反向转运体NHX家族的研究进展 | 第10-16页 |
| 1.1.1 植物Na~+/H~+反向转运体NHX的亚细胞定位和分类 | 第10-12页 |
| 1.1.2 Na~+/H~+反向转运体NHX的结构特征 | 第12-13页 |
| 1.1.3 Na~+/H~+反向转运体NHX的生物学功能 | 第13-16页 |
| 1.2 ESCRT复合体在膜微囊运输中的研究进展 | 第16-19页 |
| 1.2.1 VPS的分类和生物学功能 | 第17页 |
| 1.2.2 ESCRT途径 | 第17-19页 |
| 1.3 V-ATPase的研究进展 | 第19-21页 |
| 1.3.1 V-ATPase的结构 | 第19-20页 |
| 1.3.2 V-ATPase的功能 | 第20-21页 |
| 1.4 选题的目的及意义 | 第21-22页 |
| 第二章 材料和方法 | 第22-41页 |
| 2.1 拟南芥材料 | 第22页 |
| 2.2 质粒 | 第22页 |
| 2.3 菌株 | 第22页 |
| 2.4 主要药品试剂及实验器材 | 第22-23页 |
| 2.4.1 药品试剂 | 第22页 |
| 2.4.2 主要仪器 | 第22-23页 |
| 2.5 所需配制的溶液和培养基 | 第23页 |
| 2.6 拟南芥Col-0总RNA的提取 | 第23-24页 |
| 2.7 逆转录得到拟南芥总cDNA | 第24-25页 |
| 2.8 构建载体 | 第25-33页 |
| 2.8.1 Gateway克隆技术原理 | 第25页 |
| 2.8.2 目的基因CDS序列的扩增 | 第25-28页 |
| 2.8.3 BP反应 | 第28页 |
| 2.8.4 BP反应后的重组质粒转化大肠杆菌感受态 | 第28-29页 |
| 2.8.5 菌落PCR鉴定 | 第29-30页 |
| 2.8.6 质粒的提取 | 第30页 |
| 2.8.7 测序 | 第30-31页 |
| 2.8.8 LR反应 | 第31页 |
| 2.8.9 LR反应后的重组质粒转化大肠杆菌感受态 | 第31页 |
| 2.8.10 上步骤转化后生长的菌落PCR鉴定 | 第31-32页 |
| 2.8.11 农杆菌GV3101感受态细胞的制备 | 第32页 |
| 2.8.12 农杆菌的转化 | 第32-33页 |
| 2.8.13 农杆菌菌落的PCR鉴定 | 第33页 |
| 2.8.14 农杆菌质粒回转大肠杆菌 | 第33页 |
| 2.8.15 回转大肠杆菌后的菌落PCR鉴定 | 第33页 |
| 2.9 用于转化的拟南芥材料的培养 | 第33-34页 |
| 2.9.1 移栽幼苗前的拟南芥培养 | 第33-34页 |
| 2.9.2 移栽幼苗后的拟南芥培养 | 第34页 |
| 2.10 农杆菌花序侵染法转化拟南芥 | 第34-35页 |
| 2.10.1 含有重组质粒的农杆菌侵染Col-0拟南芥 | 第34-35页 |
| 2.10.2 含有重组质粒的农杆菌侵染nhx5 nhx6拟南芥 | 第35页 |
| 2.11 T1代转基因材料的筛选 | 第35页 |
| 2.11.1 载体为pUBC-BASTA-UBQ10-GWR-GFP的材料的筛选 | 第35页 |
| 2.11.2 载体为pBIB-HYG-35S-GWR-RFP的材料的筛选 | 第35页 |
| 2.12 拟南芥叶片中DNA的快速提取 | 第35-36页 |
| 2.13 PCR鉴定拟南芥 | 第36-37页 |
| 2.14 T2代转基因材料的筛选 | 第37页 |
| 2.15 T3代转基因材料的筛选 | 第37页 |
| 2.16 Col-0背景下VPS2-DN-GF P,VPS2-GFP,VPS22-GFP,VPS28-GFP材料的制备 | 第37-39页 |
| 2.16.1 杂交实验 | 第37-38页 |
| 2.16.2 F1代材料的筛选 | 第38页 |
| 2.16.3 F2代材料的筛选 | 第38-39页 |
| 2.17 nhx5 nhx6背景下VPS2-DN-RFP,VPS2-RFP,VPS22-RFP,VPS28-RFP材料的制备 | 第39页 |
| 2.17.1 杂交实验 | 第39页 |
| 2.17.2 F2代材料的筛选 | 第39页 |
| 2.17.3 F3代材料的筛选 | 第39页 |
| 2.18 nhx5 nhx6背景下VHA-al-RFP,VHA-a2-GF只VHA-a3-GFP材料的制备 | 第39-40页 |
| 2.19 Col-0以及nhx5 nhx6背景材料下荧光表达的观察 | 第40-41页 |
| 第三章 实验结果 | 第41-59页 |
| 3.1 AtVPS2-DN,AtVPS2,AtVPS22,AtVPS28 CDS序列的扩增 | 第41-42页 |
| 3.2 pDONR-VPS2-DN,pDONR-VPS2,pDONR-VPS22,pDONR-VPS28大肠杆菌菌落PCR鉴定 | 第42-43页 |
| 3.3 pUBC-BASTA-VPS2-DN/2/22/28-GFP,pBIB-HYG-VPS2-DN/2/22/28-RFP大肠杆菌菌落PCR鉴定 | 第43-45页 |
| 3.3.1 pUBC-BASTA-VPS2-DN/2/22/28-GFP大肠杆菌菌落PCR鉴定结果 | 第43-44页 |
| 3.3.2 pBIB-HYG-VPS2-DN/2/22/28-RFP大肠杆菌菌落PCR鉴定结果 | 第44-45页 |
| 3.4 pUBC-BASTA-VPS2-DN/2/22/28-GFP,pBIB-HYG-VPS2-DN/2/22/28-RFP农杆菌菌落PCR鉴定 | 第45-47页 |
| 3.4.1 pUBC-BASTA-VPS2-DN/2/22/28-GFP农杆菌菌落PCR鉴定结果 | 第45-46页 |
| 3.4.2 pBIB-HYG-VPS2-DN/2/22/28-RFP农杆菌菌落PCR鉴定结果 | 第46-47页 |
| 3.5 pUBC-BASTA-VPS2-DN/2/22/28-GFP,pBIB-HYG-VPS2-DN/2/22/28-RFP农杆菌回转大肠杆菌菌落PCR鉴定 | 第47-49页 |
| 3.5.1 pUBC-BASTA-VPS2-DN/2/22/28-GFP农杆菌回转大肠杆菌菌落PCR鉴定结果 | 第47-48页 |
| 3.5.2 pBIB-HYG-VPS2-DN/2/22/28-RFP农杆菌回转大肠杆菌菌落PCR鉴定结果 | 第48-49页 |
| 3.6 T1代转基因材料的筛选 | 第49-51页 |
| 3.6.1 pUBC-BASTA-VPS2-DN/2/22/28-GFP T1代材料鉴定结果 | 第49-50页 |
| 3.6.2 pBIB-HYG-VPS2-DN/2/22/28-RFP T1代材料鉴定结果 | 第50-51页 |
| 3.7 T2代转基因材料的筛选 | 第51-52页 |
| 3.8 T3代转基因材料的筛选 | 第52-53页 |
| 3.8.1 pUBC-BASTA-VPS2-DN/22/28-GFP(nhx5 nhx6)的T3代转基因材料的筛选 | 第52-53页 |
| 3.8.2 pBIB-HYG-VPS2-DN/2/28-RFP的T3代转基因材料的筛选 | 第53页 |
| 3.9 Col-0背景下VPS2-DN-GFP,VPS22-GFP,VPS28-GFP材料的制备 | 第53页 |
| 3.10 nhx5 nhx6背景下VHA-a1-RFP,VHA-a2-GFP,VHA-a3-GFP材料的制备 | 第53-55页 |
| 3.10.1 nhx5 nhx6背景下VHA-a1-RFP的筛选 | 第54-55页 |
| 3.10.2 nhx5 nhx6背景下VHA-a2-GFP和VHA-a3-GFP的筛选 | 第55页 |
| 3.11 Col-0以及nhx5 nhx6背景材料下荧光表达的观察以及分析 | 第55-59页 |
| 3.11.1 VPS2-DN-GFP,VPS22-GFP,VPS28-GFP的亚细胞定位 | 第55-57页 |
| 3.11.2 VHA-al-RFP的亚细胞定位 | 第57-59页 |
| 第四章 讨论 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
