| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第1章 文献综述 | 第15-30页 |
| 1.1 水稻稻曲病概述及研究现状 | 第15-20页 |
| 1.1.1 稻曲病菌的分类学地位 | 第15-16页 |
| 1.1.2 病害特征和侵染循环 | 第16-17页 |
| 1.1.3 水稻稻曲病的流行学特征 | 第17-18页 |
| 1.1.4 稻曲病菌的分离、培养及人工接种体系 | 第18页 |
| 1.1.5 稻曲菌素的毒性及合成 | 第18页 |
| 1.1.6 稻曲病的防治 | 第18-19页 |
| 1.1.7 稻曲病的分子遗传学研究 | 第19-20页 |
| 1.2 小麦赤霉病概述及研究现状 | 第20-23页 |
| 1.2.1 小麦赤霉病病害循环 | 第21-22页 |
| 1.2.2 小麦赤霉病的防治 | 第22页 |
| 1.2.3 F. graminearum交配型 | 第22页 |
| 1.2.4 DON的合成 | 第22页 |
| 1.2.5 F. graminearum的分子生物学研究 | 第22-23页 |
| 1.3 蛋白磷酸化激酶信号通路 | 第23-24页 |
| 1.3.1 酵母中的MAPK信号通路 | 第23-24页 |
| 1.3.2 丝状真菌中的HOG1信号通路 | 第24页 |
| 1.4 丝状真菌遗传转化体系 | 第24-27页 |
| 1.4.1 Li Ac转化体系 | 第25页 |
| 1.4.2 REMI转化体系 | 第25页 |
| 1.4.3 电激转化 | 第25页 |
| 1.4.4 基因枪 | 第25-26页 |
| 1.4.5 PEG介导的原生质体转化 | 第26页 |
| 1.4.6 根癌农杆菌介导的遗传转化体系 | 第26-27页 |
| 1.4.7 稻曲病菌的遗传转化体系 | 第27页 |
| 1.5 本课题的立题依据、研究目的及内容 | 第27-30页 |
| 1.5.1 课题的立题依据、目的和创新点 | 第27-28页 |
| 1.5.2 课题内容 | 第28-29页 |
| 1.5.3 课题研究的技术路线 | 第29-30页 |
| 第2章 稻曲病菌基因敲除体系的建立 | 第30-45页 |
| 2.1 材料与方法 | 第30-39页 |
| 2.1.1 材料 | 第30-32页 |
| 2.1.1.1 质粒 | 第30页 |
| 2.1.1.2 菌株 | 第30-31页 |
| 2.1.1.3 主要培养基成分 | 第31页 |
| 2.1.1.4 主要试剂及服务 | 第31页 |
| 2.1.1.5 主要仪器 | 第31-32页 |
| 2.1.1.6 软件及数据库 | 第32页 |
| 2.1.2 方法 | 第32-39页 |
| 2.1.2.1 pCAMBIA1300质粒改造 | 第32-33页 |
| 2.1.2.2 UvHOG1敲除载体的获得 | 第33-35页 |
| 2.1.2.3 质粒pCBDW‐GEN的构建 | 第35页 |
| 2.1.2.4 UvHOG1回复突变载体及农杆菌菌株的获得 | 第35-36页 |
| 2.1.2.5 稻曲病菌UvHOG1基因敲除体系的建立 | 第36-37页 |
| 2.1.2.6 转化子DNA的小量快速提取 | 第37页 |
| 2.1.2.7 转化子DNA的PCR检测 | 第37-38页 |
| 2.1.2.8 转化子的Southern杂交验证 | 第38-39页 |
| 2.1.2.9 Uvhog1突变体的回复突变 | 第39页 |
| 2.2 结果 | 第39-43页 |
| 2.2.1 UvHOG1敲除载体及功能互补载体的获得 | 第39-40页 |
| 2.2.2 转化子的PCR检测结果 | 第40-42页 |
| 2.2.3 转化子UVHG653的southern杂交验证结果 | 第42页 |
| 2.2.4 回复突变体菌株的获得 | 第42-43页 |
| 2.3 小结 | 第43-45页 |
| 第3章 UvHOG1基因的功能鉴定 | 第45-59页 |
| 3.1 材料与方法 | 第45-48页 |
| 3.1.1 材料 | 第45-46页 |
| 3.1.1.1 水稻种子 | 第45页 |
| 3.1.1.2 主要培养基成分 | 第45页 |
| 3.1.1.3 主要试剂 | 第45页 |
| 3.1.1.4 主要仪器 | 第45-46页 |
| 3.1.2 方法 | 第46-48页 |
| 3.1.2.1 在不同培养基平板上的培养 | 第46页 |
| 3.1.2.2 菌落边缘的观察 | 第46页 |
| 3.1.2.3 分生孢子的收集和萌发 | 第46页 |
| 3.1.2.4 各种压力筛选的浓度 | 第46-47页 |
| 3.1.2.5 RNA提取、纯化、反转及实时荧光定量PCR检测 | 第47页 |
| 3.1.2.6 相容性代谢产物的检测 | 第47-48页 |
| 3.1.2.7 突变体对水稻萌发的抑制作用 | 第48页 |
| 3.2 实验结果 | 第48-57页 |
| 3.2.1 Uvhog1突变体的营养生长，分生孢子产生以及色素的形成 | 第48-52页 |
| 3.2.2 Uvhog1突变体在不同压力筛选下的表型 | 第52-53页 |
| 3.2.3 Uvhog1基因的敲除对UvATF1、UvSKN7和UvAP1基因表达水平的影响 | 第53-54页 |
| 3.2.4 Uvhog1突变体在渗透压条件下甘油和山梨醇的积累 | 第54页 |
| 3.2.5 Uvhog1突变体培养液对水稻种子萌发的影响 | 第54-56页 |
| 3.2.6 Uvhog1突变体内uv_ustA基因的表达情况 | 第56-57页 |
| 3.3 小结 | 第57-59页 |
| 第4章 小麦赤霉病菌中FgHOG1信号通路的功能鉴定 | 第59-78页 |
| 4.1 材料与方法 | 第59-63页 |
| 4.1.1 材料 | 第59-60页 |
| 4.1.1.1 菌株 | 第59页 |
| 4.1.1.2 主要培养基成分 | 第59-60页 |
| 4.1.1.3 主要试剂 | 第60页 |
| 4.1.1.4 主要仪器 | 第60页 |
| 4.1.2 方法 | 第60-63页 |
| 4.1.2.1 突变体的获得及验证 | 第60-61页 |
| 4.1.2.2 Fghog1回复突变体的获得及亚细胞定位 | 第61页 |
| 4.1.2.3 菌株在不同培养基上的培养 | 第61页 |
| 4.1.2.4 分生孢子的收集和萌发 | 第61页 |
| 4.1.2.5 菌落表面疏水性的测试 | 第61页 |
| 4.1.2.6 菌落边缘观察 | 第61-62页 |
| 4.1.2.7 各种压力筛选的浓度 | 第62页 |
| 4.1.2.8 相容性代谢产物的测定 | 第62页 |
| 4.1.2.9 有性生殖 | 第62页 |
| 4.1.2.10 致病力的检测 | 第62-63页 |
| 4.1.2.11 侵染过程的半薄切片观察 | 第63页 |
| 4.1.2.12 DAPI染色 | 第63页 |
| 4.2 结果 | 第63-76页 |
| 4.2.1 Fgssk2、Fgpbs2和Fghog1突变体的获得及Southern杂交验证 | 第63-64页 |
| 4.2.2 FgHOG1信号通路对F. graminearum营养生长的影响 | 第64-67页 |
| 4.2.3 FgHOG1信号通路在不同压力筛选下的营养生长 | 第67-70页 |
| 4.2.4 Fghog1突变体在渗透压条件下细胞内相容性物质的积累 | 第70页 |
| 4.2.5 Fghog1突变体的有性生殖能力 | 第70-72页 |
| 4.2.6 FgHOG1信号通路对于致病力的重要性 | 第72-75页 |
| 4.2.7 FgHOG1基因的亚细胞定位 | 第75-76页 |
| 4.3 小结 | 第76-78页 |
| 第5章 讨论 | 第78-88页 |
| 5.1 双元转化载体的改造过程 | 第78-79页 |
| 5.2 稻曲病菌不同转化方法之间的比较 | 第79-82页 |
| 5.2.1 通过ATMT体系对UvHOG1基因进行敲除的同源重组概率 | 第80页 |
| 5.2.2 ATMT体系在稻曲病菌基因敲除过程中的一般效率 | 第80-81页 |
| 5.2.3 PEG介导的原生质体遗传转化体系 | 第81-82页 |
| 5.2.4 电激转化 | 第82页 |
| 5.3 U. virens和F. graminearum中HOG1同源基因功能的分析与比较 | 第82-88页 |
| 5.3.1 UvHOG1的进化树分析 | 第82-84页 |
| 5.3.2 HOG1对U. virens和F. graminearum营养生长的调控 | 第84页 |
| 5.3.3 HOG1在渗透压调节过程中的作用 | 第84-85页 |
| 5.3.4 HOG1在其他压力胁迫下的表型 | 第85页 |
| 5.3.5 HOG1与压力胁迫相关转录因子间的关系 | 第85-86页 |
| 5.3.6 HOG1的缺失对突变体致病力的影响 | 第86-88页 |
| 第6章 总结与展望 | 第88-90页 |
| 参考文献 | 第90-104页 |
| 附表 本文所使用引物序列 | 第104-107页 |
| 英文缩写表 | 第107-109页 |
| 致谢 | 第109-111页 |
| 作者简介 | 第111页 |
