| 摘要 | 第7-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 英文缩略表(ABBREVIATIONS) | 第10-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-15页 |
| 1.1 犬腺病毒病的流行特点 | 第11-12页 |
| 1.2 犬腺病毒的危害及致病机理 | 第12页 |
| 1.2.1 犬腺病毒的危害 | 第12页 |
| 1.2.2 病毒感染动物机体的途径 | 第12页 |
| 1.3 犬腺病毒病的预防与临床治疗 | 第12-14页 |
| 1.3.1 犬腺病毒病的检测方法 | 第12-14页 |
| 1.3.2 犬腺病毒病的预防 | 第14页 |
| 1.4 犬腺病毒病的治疗 | 第14-15页 |
| 2 研究目的和意义 | 第15-16页 |
| 3 材料与方法 | 第16-29页 |
| 3.1 实验材料 | 第16-19页 |
| 3.1.1 细胞与菌株 | 第16页 |
| 3.1.2 载体与质粒 | 第16页 |
| 3.1.3 工具酶及主要试剂 | 第16-17页 |
| 3.1.4 本实验使用的引物 | 第17-18页 |
| 3.1.5 培养基及其配制 | 第18页 |
| 3.1.6 空斑纯化试剂 | 第18页 |
| 3.1.7 主要缓冲液与相关试剂及其配制 | 第18-19页 |
| 3.1.8 实验室常用化学物 | 第19页 |
| 3.1.9 其它试剂及其配置 | 第19页 |
| 3.2 实验仪器与实验耗材 | 第19-20页 |
| 3.2.1 实验仪器 | 第19页 |
| 3.2.2 实验耗材 | 第19-20页 |
| 3.3 实验方法 | 第20-25页 |
| 3.3.1 MDCK细胞的传代 | 第20页 |
| 3.3.2 病料样品的细胞感染 | 第20页 |
| 3.3.3 病毒基因组及RNA的提取 | 第20-21页 |
| 3.3.4 大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第21页 |
| 3.3.5 连接及连接产物的转化 | 第21页 |
| 3.3.6 重组质粒的小量制备(OMEGA小提试剂盒) | 第21-22页 |
| 3.3.7 限制性内切酶酶切反应 | 第22-23页 |
| 3.3.8 PCR或酶切产物的回收纯化 | 第23页 |
| 3.3.9 空斑挑取及纯化 | 第23页 |
| 3.3.10 病毒基因组PCR鉴定 | 第23-24页 |
| 3.3.11 TCID_(50)的测定 | 第24-25页 |
| 3.4 犬源病毒的分离与鉴定 | 第25-26页 |
| 3.4.1 病料的采集与处理 | 第25页 |
| 3.4.2 病料的检测 | 第25页 |
| 3.4.3 病毒的分离 | 第25-26页 |
| 3.4.4 细胞病变样品的检测 | 第26页 |
| 3.4.5 克隆测序及序列比对和同源性分析 | 第26页 |
| 3.4.6 病毒电镜观察 | 第26页 |
| 3.5 犬腺病毒基因组文库的构建 | 第26-29页 |
| 3.5.1 病毒DNA和pBlueScript Ⅱ SK(+)载体质粒的处理 | 第26-28页 |
| 3.5.2 犬腺病毒DNA酶切水解片段的克隆及基因文库的构建 | 第28页 |
| 3.5.3 CAV基因组文库序列拼接示意图 | 第28-29页 |
| 4 结果与分析 | 第29-41页 |
| 4.1 犬源病毒的分离鉴定 | 第29-37页 |
| 4.1.1 病料样品的检测 | 第29页 |
| 4.1.2 病料样品的分离 | 第29-30页 |
| 4.1.3 细胞病变样品核酸水平的检测 | 第30-32页 |
| 4.1.4 克隆测序及序列比对 | 第32-33页 |
| 4.1.5 同源性分析 | 第33-34页 |
| 4.1.5.1 CAV-Ⅱ E3基因的同源性分析 | 第33-34页 |
| 4.1.5.2 CPV VP2基因的同源性分析 | 第34页 |
| 4.1.6 电子显微镜观察 | 第34-36页 |
| 4.1.6.1 WH-27电子显微镜观察 | 第34-35页 |
| 4.1.6.2 WH-182电子显微镜观察 | 第35页 |
| 4.1.6.3 WH-202电子显微镜观察 | 第35-36页 |
| 4.1.7 CAV- Ⅱ WH-27病毒空斑纯化 | 第36页 |
| 4.1.8 CAV-Ⅱ WH-27分离株毒力的测定 | 第36-37页 |
| 4.2 CAV-Ⅱ WH-27毒株基因组文库的构建 | 第37-41页 |
| 4.2.1 CAV-Ⅱ WH-27毒株基因不同Hind Ⅲ酶切片段的克隆 | 第37-39页 |
| 4.2.2 CAV-Ⅱ WH-27毒株不同基因片段的PCR扩增 | 第39-41页 |
| 5 讨论与结论 | 第41-44页 |
| 5.1 讨论 | 第41-43页 |
| 5.1.1 犬源病毒的分离鉴定 | 第41-43页 |
| 5.1.2 CAV-ⅡWH-27毒株基因组文库的构建 | 第43页 |
| 5.2 结论 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
| 附录 | 第51-70页 |
| 一、病毒的分离鉴定所获得的核苷酸序列 | 第51-54页 |
| 二、CAV-Ⅱ WH-27毒株基因组文库的构建序列拼接 | 第54-70页 |
