| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 1 绪论 | 第8-15页 |
| 1.1 课题背景 | 第8页 |
| 1.2 鹌鹑养殖及常见疾病 | 第8-9页 |
| 1.2.1 鹌鹑的驯化和养殖 | 第8-9页 |
| 1.2.2 鹌鹑常见疾病 | 第9页 |
| 1.3 干扰素概述 | 第9-13页 |
| 1.3.1 干扰素研究进程 | 第9-10页 |
| 1.3.2 干扰素分类 | 第10-12页 |
| 1.3.3 干扰素的功能 | 第12-13页 |
| 1.4 禽类干扰素的相关研究 | 第13-14页 |
| 1.5 本研究的意义 | 第14-15页 |
| 2 材料与方法 | 第15-31页 |
| 2.1 实验材料 | 第15-17页 |
| 2.1.1 细胞、病毒、实验动物 | 第15页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第15-16页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第16-17页 |
| 2.2 鹌鹑IFN-α、IFN-γ基因克隆 | 第17-22页 |
| 2.2.1 鹌鹑IFN-α、IFN-γ基因的引物设计 | 第17页 |
| 2.2.2 鹌鹑IFN-α、IFN-γ基因的提取 | 第17-18页 |
| 2.2.3 鹌鹑IFN-α、IFN-γ目的基因的扩增 | 第18-20页 |
| 2.2.4 鹌鹑IFN-α、IFN-γ目的基因的纯化回收 | 第20页 |
| 2.2.5 感受态细胞的制备 | 第20页 |
| 2.2.6 克隆载体的构建和阳性克隆菌株的鉴定 | 第20-21页 |
| 2.2.7 测序 | 第21-22页 |
| 2.3 鹌鹑的IFN-α、IFN-γ基因的序列分析 | 第22页 |
| 2.3.1 鹌鹑的IFN-α、IFN-γ基因进化树分析 | 第22页 |
| 2.3.2 鹌鹑的IFN-α、IFN-γ基因同源性分析 | 第22页 |
| 2.3.3 鹌鹑的IFN-α、IFN-γ氨基酸序列比对 | 第22页 |
| 2.3.4 鹌鹑的IFN-α、IFN-γ信号肽和糖基化位点分析 | 第22页 |
| 2.3.5 鹌鹑的IFN-α、IFN-γ3D结构预测 | 第22页 |
| 2.3.6 抗原性、疏水性预测和分析 | 第22页 |
| 2.4 鹌鹑IFN-α、IFN-γ基因的原核表达 | 第22-26页 |
| 2.4.1 鹌鹑IFN-α、IFN-γ成熟肽基因的克隆及鉴定 | 第22-23页 |
| 2.4.2 鹌鹑IFN-α、IFN-γ原核表达载体的构建 | 第23-24页 |
| 2.4.3 鹌鹑IFN-α、IFN-γ的原核表达、纯化及复性 | 第24-26页 |
| 2.5 兔抗鹌鹑IFN-α、IFN-γ多克隆抗体的制备及鉴定 | 第26-27页 |
| 2.5.1 兔抗鹌鹑IFN-α、IFN-γ多克隆抗体的制备 | 第26-27页 |
| 2.5.2 兔抗鹌鹑IFN-α、IFN-γ多克隆抗体效价的测定 | 第27页 |
| 2.6 鹌鹑IFN-α、IFN-γ重组蛋白浓度的测定 | 第27-28页 |
| 2.7 鹌鹑IFN-α、IFN-γ的抗病毒活性分析 | 第28-29页 |
| 2.7.1 鸡胚成纤维细胞的制作 | 第28页 |
| 2.7.2 新城疫、禽流感、水泡性口炎病毒的扩增与保存 | 第28页 |
| 2.7.3 新城疫、禽流感、水泡性口炎病毒TCID_(50)的测定 | 第28-29页 |
| 2.7.4 鹌鹑IFN-α、IFN-γ抗病毒活性的测定 | 第29页 |
| 2.7.5 鹌鹑IFN-α、IFN-γ抗病毒活性中和试验 | 第29页 |
| 2.8 鹌鹑IFN-α、IFN-γ理化性质分析 | 第29-31页 |
| 2.8.1 鹌鹑IFN-α、IFN-γ温度敏感性分析 | 第29-30页 |
| 2.8.2 鹌鹑IFN-α、IFN-γ胰酶敏感性分析 | 第30页 |
| 2.8.3 鹌鹑IFN-α、IFN-γpH敏感性分析 | 第30-31页 |
| 3 实验结果 | 第31-54页 |
| 3.1 鹌鹑IFN-α、IFN-γ基因克隆、序列分析 | 第31-40页 |
| 3.1.1 鹌鹑外周血淋巴细胞的体外培养 | 第31页 |
| 3.1.2 鹌鹑IFN-α、IFN-γ基因的克隆 | 第31-32页 |
| 3.1.3 重组质粒的鉴定 | 第32-33页 |
| 3.1.4 鹌鹑IFN-α、IFN-γ基因的进化树分析 | 第33-35页 |
| 3.1.5 鹌鹑IFN-α、IFN-γ基因序列分析 | 第35页 |
| 3.1.6 鹌鹑的IFN-α、IFN-γ氨基酸序列比对 | 第35-37页 |
| 3.1.7 鹌鹑IFN-α、IFN-γ信号肽、糖基化位点预测分析 | 第37-39页 |
| 3.1.8 鹌鹑IFN-α、IFN-γ蛋白3D结构预测 | 第39-40页 |
| 3.1.9 鹌鹑IFN-α、IFN-γ抗原性、亲水性预测和分析 | 第40页 |
| 3.2 鹌鹑IFN-α、IFN-γ基因的原核表达 | 第40-44页 |
| 3.2.1 鹌鹑IFN-α、IFN-γ成熟肽基因的克隆 | 第40-41页 |
| 3.2.2 鹌鹑IFN-α、IFN-γ原核表达载体的鉴定 | 第41-42页 |
| 3.2.3 鹌鹑IFN-α、IFN-γ基因的原核表达 | 第42-44页 |
| 3.2.4 鹌鹑IFN-α、IFN-γ重组蛋白的Western blot鉴定 | 第44页 |
| 3.3 抗鹌鹑IFN-α、IFN-γ多克隆抗体的制备与鉴定 | 第44页 |
| 3.4 鹌鹑IFN-α、IFN-γ重组蛋白浓度的测定 | 第44页 |
| 3.5 鹌鹑IFN-α、IFN-γ的抗病毒活性分析 | 第44-53页 |
| 3.6 鹌鹑IFN-α、IFN-γ蛋白理化性质的分析 | 第53-54页 |
| 4 讨论 | 第54-56页 |
| 4.1 鹌鹑IFN-α、IFN-γ基因特征 | 第54页 |
| 4.2 鹌鹑IFN-α、IFN-γ基因的原核表达 | 第54-55页 |
| 4.3 鹌鹑IFN-α、IFN-γ蛋白抗病毒活性及理化性质 | 第55-56页 |
| 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-64页 |
| 附录 | 第64-70页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
