| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第一章 绪论 | 第8-16页 |
| 1.1 阿魏酸酯酶概述 | 第8-11页 |
| 1.1.1 阿魏酸酯酶 | 第8页 |
| 1.1.2 阿魏酸酯酶微生物来源及酶学性质 | 第8-9页 |
| 1.1.3 阿魏酸酯酶的分类 | 第9-10页 |
| 1.1.4 阿魏酸酯酶酶活检测方法 | 第10-11页 |
| 1.2 阿魏酸酯酶的应用 | 第11-12页 |
| 1.2.1 制备阿魏酸 | 第11-12页 |
| 1.2.2 生物质资源的利用 | 第12页 |
| 1.2.3 制浆与造纸行业 | 第12页 |
| 1.2.4 动物饲料 | 第12页 |
| 1.3 阿魏酸酯酶的研究进展 | 第12-14页 |
| 1.3.1 阿魏酸酯酶野生菌株发酵产酶进展 | 第12-13页 |
| 1.3.2 阿魏酸酯酶基因工程进展 | 第13-14页 |
| 1.4 酵母表达系统 | 第14-15页 |
| 1.4.1 S. cerevisiae表达系统 | 第14页 |
| 1.4.2 P. pastoris表达系统 | 第14页 |
| 1.4.3 K. lactis表达系统 | 第14-15页 |
| 1.5 本课题的立题意义及研究内容 | 第15-16页 |
| 1.5.1 立题意义 | 第15页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第15-16页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第16-27页 |
| 2.1 实验材料 | 第16-19页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第16-17页 |
| 2.1.2 引物 | 第17-18页 |
| 2.1.3 培养基 | 第18页 |
| 2.1.4 工具酶与各种试剂 | 第18页 |
| 2.1.5 主要实验仪器和设备 | 第18-19页 |
| 2.2 实验方法 | 第19-27页 |
| 2.2.1 A. niger染色体基因组的提取 | 第19页 |
| 2.2.2 提取酵母染色体基因组（玻璃珠法） | 第19-20页 |
| 2.2.3 目的片段PCR扩增 | 第20页 |
| 2.2.4 目的片段与载体的连接 | 第20-21页 |
| 2.2.5 感受态细胞的制备及转化 | 第21-22页 |
| 2.2.6 质粒小量快速提取法 | 第22页 |
| 2.2.7 其它分子生物学操作 | 第22页 |
| 2.2.8 A. niger阿魏酸酯酶基因的重组表达 | 第22-23页 |
| 2.2.9 表达产物的SDS-PAGE分析 | 第23页 |
| 2.2.10 阿魏酸酯酶酶活测定 | 第23页 |
| 2.2.11 重组酵母菌株的质粒稳定性分析 | 第23-24页 |
| 2.2.12 重组阿魏酸酯酶的发酵优化 | 第24-25页 |
| 2.2.13 重组阿魏酸酯酶的分离纯化 | 第25-26页 |
| 2.2.14 重组阿魏酸酯酶酶学性质的研究 | 第26-27页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第27-51页 |
| 3.1 A. niger阿魏酸酯酶基因的克隆及在E. coli中的验证表达 | 第27-28页 |
| 3.1.1 A. niger阿魏酸酯酶基因的克隆及E. coli重组表达载体的构建 | 第27-28页 |
| 3.1.2 A. niger阿魏酸酯酶基因在E. coli中的验证表达 | 第28页 |
| 3.2 阿魏酸酯酶在酵母中的表达 | 第28-40页 |
| 3.2.1 重组K. lactis的构建 | 第28-33页 |
| 3.2.2 重组P. pastoris的构建 | 第33-37页 |
| 3.2.3 重组S. cerevisiae菌株的构建 | 第37页 |
| 3.2.4 重组酵母菌株发酵上清的SDS-PAGE分析 | 第37-38页 |
| 3.2.5 重组酵母菌株发酵上清的阿魏酸酯酶酶活测定 | 第38-39页 |
| 3.2.6 重组酵母菌株质粒稳定性测定 | 第39-40页 |
| 3.3 重组菌摇瓶发酵优化 | 第40-47页 |
| 3.3.1 重组菌发酵培养基优化 | 第40-42页 |
| 3.3.2 重组菌发酵条件优化 | 第42-44页 |
| 3.3.3 最陡爬坡实验 | 第44页 |
| 3.3.4 响应面分析 | 第44-47页 |
| 3.4 重组阿魏酸酯酶的纯化及酶学性质的研究 | 第47-51页 |
| 3.4.1 重组阿魏酸酯酶的纯化 | 第47-48页 |
| 3.4.2 重组阿魏酸酯酶酶学性质的研究 | 第48-51页 |
| 主要结论与展望 | 第51-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-57页 |
| 附录: 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第57页 |
