| 符号说明 | 第4-9页 |
| 中文摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第13-26页 |
| 1.1 盐胁迫对果树的影响 | 第13-14页 |
| 1.1.1 盐胁迫对种子萌发的影响 | 第13-14页 |
| 1.1.2 盐对植物生长发育的影响 | 第14页 |
| 1.1.3 盐胁迫对植物光合作用的影响 | 第14页 |
| 1.2 盐胁迫对果树的伤害 | 第14-16页 |
| 1.3 植物对盐渍的适应机制 | 第16-19页 |
| 1.3.1 避盐的机理 | 第16页 |
| 1.3.2 耐盐的生理机制 | 第16-17页 |
| 1.3.3 植物耐盐的分子基础 | 第17-19页 |
| 1.4 提高植物抗盐性的途径 | 第19页 |
| 1.5 与抗性相关的CBL/CIPK信号转导 | 第19-20页 |
| 1.6 CBL蛋白家族 | 第20-22页 |
| 1.6.1 CBL家族的起源与进化 | 第20页 |
| 1.6.2 CBL蛋白的结构 | 第20-21页 |
| 1.6.3 CBL蛋白的亚细胞定位 | 第21-22页 |
| 1.7 CIPK蛋白家族 | 第22-23页 |
| 1.8 CBL-CIPK信号系统参与的生理功能及分子机制 | 第23页 |
| 1.9 CBL-CIPK信号系统参与植物响应高盐胁迫的信号转导 | 第23-24页 |
| 1.10 本研究的目的和意义 | 第24-26页 |
| 2 材料和方法 | 第26-40页 |
| 2.1 试验材料 | 第26-27页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第26页 |
| 2.1.2 植物材料培养与处理 | 第26页 |
| 2.1.3 菌株及载体 | 第26页 |
| 2.1.4 酶、试剂盒、引物及测序 | 第26页 |
| 2.1.5 试剂材料 | 第26-27页 |
| 2.1.6 实验仪器 | 第27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-40页 |
| 2.2.1 植物基因组DNA的提取和纯化 | 第27-30页 |
| 2.2.1.1 植物总 DNA 提取试剂盒（天根生物技术有限公司）提取 DNA | 第27-28页 |
| 2.2.1.2 质粒DNA的提取 | 第28页 |
| 2.2.1.3 小量法提取质粒DNA | 第28-29页 |
| 2.2.1.4 植物基因组DNA的纯化 | 第29-30页 |
| 2.2.1.5 基因组DNA含量与纯度检测 | 第30页 |
| 2.2.2 植物总RNA的提取 | 第30-32页 |
| 2.2.2.1 改良热硼酸法提取苹果果实RNA | 第30-31页 |
| 2.2.2.2 Trizol试剂盒提总RNA | 第31页 |
| 2.2.2.3 RNAplant Plus法提取植物总RNA | 第31-32页 |
| 2.2.3 RNA含量与纯度检测 | 第32页 |
| 2.2.4 植物RNA的纯化（除DNA）方法 | 第32-33页 |
| 2.2.5 反转录cDNA第一链的合成 | 第33页 |
| 2.2.6 基因扩增 | 第33页 |
| 2.2.7 PCR产物的回收 | 第33-34页 |
| 2.2.8 连接反应 | 第34-35页 |
| 2.2.9 大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第35页 |
| 2.2.9.1 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第35页 |
| 2.2.9.2 大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第35页 |
| 2.2.10 根癌农杆菌LBA4404和GV3101感受态细胞的制备与转化 | 第35-37页 |
| 2.2.10.1 电击法制备农杆菌感受态细胞 | 第35-36页 |
| 2.2.10.2 电击法转化农杆菌 | 第36-37页 |
| 2.2.11 拟南芥的转化以及转基因材料的获得 | 第37页 |
| 2.2.11.1 拟南芥的种植 | 第37页 |
| 2.2.11.2 转化拟南芥-花序侵染法（沾花法）（Clough et al.，1998） | 第37页 |
| 2.2.11.3 转基因拟南芥的获得 | 第37页 |
| 2.2.12 苹果的愈伤组织进行遗传转化 | 第37-38页 |
| 2.2.13 转基因材料的鉴定 | 第38页 |
| 2.2.13.1 转基因材料的DNA鉴定 | 第38页 |
| 2.2.13.2 半定量qRT-PCR分析转基因材料 | 第38页 |
| 2.2.14 相关生理指标测定 | 第38-40页 |
| 2.2.14.1 苹果愈伤组织和拟南芥成苗鲜样质量、幼苗根长的测定 | 第38-39页 |
| 2.2.14.2 丙二醛、脯氨酸、叶绿素含量的测定 | 第39-40页 |
| 3 结果与分析 | 第40-55页 |
| 3.1 苹果MdCBL3基因的克隆和序列分析 | 第40页 |
| 3.2 苹果MdCBL3基因组结构分析 | 第40页 |
| 3.3 MdCBL3系统进化树及氨基酸序列分析 | 第40-42页 |
| 3.4 苹果MdCBL3基因在不同组织中的表达分析 | 第42-43页 |
| 3.5 MdCBL3启动子顺式作用元件分析 | 第43页 |
| 3.6 MdCBL3对不同胁迫的响应 | 第43-45页 |
| 3.7 MdCBL3双元表达载体的构建 | 第45-46页 |
| 3.8 过量表达MdCBL3提高苹果愈伤组织盐抗性 | 第46-49页 |
| 3.9 异源表达MdCBL3提高拟南芥幼苗对盐、低温、干旱的抗性 | 第49-52页 |
| 3.10 异源表达MdCBL3提高了拟南芥成苗对盐胁迫的抗性 | 第52-55页 |
| 4 讨论 | 第55-58页 |
| 4.1 MdCBL3基因对盐胁迫的响应 | 第55页 |
| 4.2 MdCBL3基因对干旱和低温的抗性 | 第55-56页 |
| 4.3 CBL-CIPKs信号系统与植物生长发育 | 第56-58页 |
| 5 结论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-68页 |
| 附录 | 第68-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第71页 |
