| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 缩略词 | 第12-14页 |
| 第一部分 文献综述 | 第14-28页 |
| 第一章 猪支原体肺炎及肺炎支原体 | 第14-18页 |
| 1 猪支原体肺炎概述 | 第14页 |
| 2 猪肺炎支原体Mhp | 第14-16页 |
| 3 Mhp感染后的免疫应答反应 | 第16-18页 |
| 第二章 CYP1A1基因的研究进展 | 第18-22页 |
| 1 细胞色素P450酶概述 | 第18-19页 |
| 2 猪细胞色素酶P450 | 第19-20页 |
| 3 CYP1A1基因研究进展 | 第20-22页 |
| 3.1 CYP1A1基因的组织分布及表达水平 | 第20页 |
| 3.2 CYP1A1基因的诱导活化机制 | 第20-21页 |
| 3.3 CYP1A1基因的多态性 | 第21-22页 |
| 第三章 炎性细胞因子及过氧化物酶体增殖物激活受体-γ | 第22-28页 |
| 1 炎性细胞因子概述 | 第22-25页 |
| 1.1 肿瘤坏死因子 | 第22-23页 |
| 1.2 白细胞介素-1 | 第23-24页 |
| 1.3 白细胞介素-6 | 第24页 |
| 1.4 白细胞介素-8 | 第24-25页 |
| 2 过氧化物酶体增殖物激活受体-γ (PPAR-γ)与其转导途径 | 第25-28页 |
| 第二部分 实验研究 | 第28-72页 |
| 第一章 CYP1A1过表达PAM细胞系的建立及RNA干扰 | 第28-56页 |
| 1 实验材料 | 第28-33页 |
| 1.1 实验动物 | 第28页 |
| 1.2 实验材料 | 第28-33页 |
| 2 实验方法 | 第33-48页 |
| 2.1 CYP1A1基因的引物设计与合成 | 第33页 |
| 2.2 猪肺泡巨噬细胞3D4 (PAM)的复苏培养 | 第33-34页 |
| 2.3 PAM细胞的传代及冻存 | 第34页 |
| 2.4 总RNA的提取 | 第34-35页 |
| 2.5 RNA纯度含量的检测 | 第35页 |
| 2.6 目的基因反转录 | 第35-36页 |
| 2.7 目的基因PCR扩增 | 第36页 |
| 2.8 PCR产物的电泳鉴定、纯化及末端加A | 第36-38页 |
| 2.9 纯化后目的基因与pMD18-T载体的连接 | 第38页 |
| 2.10 目的基因转化感受态细胞 | 第38-39页 |
| 2.11 克隆载体的酶切鉴定 | 第39-40页 |
| 2.12 目的片段与真核表达载体的连接 | 第40页 |
| 2.13 重组质粒转化感受态细胞 | 第40-41页 |
| 2.14 菌液PCR、测序验证转化效果 | 第41页 |
| 2.15 去内毒素质粒大量提取 | 第41-42页 |
| 2.16 重组质粒的纯度检测与酶切鉴定 | 第42-43页 |
| 2.17 重组质粒转染PAM细胞 | 第43-44页 |
| 2.18 zeocin抗性筛选稳定表达细胞系与扩大培养 | 第44页 |
| 2.19 转染效果的检测 | 第44-47页 |
| 2.20 稳定转染细胞的保存 | 第47页 |
| 2.21 siRNA转染PAM细胞 | 第47-48页 |
| 3 结果 | 第48-53页 |
| 3.1 目的基因的克隆 | 第48页 |
| 3.2 DNA测序结果 | 第48-50页 |
| 3.3 真核表达载体质粒双酶切鉴定 | 第50-51页 |
| 3.4 最佳zeocin筛选浓度 | 第51页 |
| 3.5 RT-PCR/Western-blot检测重组细胞株CYP1A1基因的表达 | 第51-52页 |
| 3.6 siRNA的干扰效果评估 | 第52-53页 |
| 4 讨论 | 第53-56页 |
| 第二章 CYP1A1基因在猪支原体肺炎发生过程中的作用 | 第56-72页 |
| 1 实验材料 | 第56-58页 |
| 1.1 主要仪器设备 | 第56-57页 |
| 1.2 主要药品、试剂、耗材 | 第57-58页 |
| 1.3 菌株和细胞 | 第58页 |
| 2 实验方法 | 第58-61页 |
| 2.1 复苏PAM细胞 | 第58页 |
| 2.2 肺炎支原体(Mhp)感染猪肺泡巨噬细胞 | 第58-59页 |
| 2.3 Mhp感染肺泡巨噬细胞的效果鉴定 | 第59页 |
| 2.4 Real-time定量PCR检测炎性因子的表达 | 第59-61页 |
| 3 数据分析 | 第61页 |
| 4 结果 | 第61-69页 |
| 4.1 Mhp感染后细胞形态变化 | 第61页 |
| 4.2 Mhp感染巨噬细胞效果的PCR诊断 | 第61-62页 |
| 4.3 Mhp感染后各处理组细胞炎性因子表达水平 | 第62-67页 |
| 4.4 各处理组细胞PPAR-γ和细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8 mRNA表达水平比较 | 第67-69页 |
| 5 讨论 | 第69-72页 |
| 全文结论 | 第72-74页 |
| 参考文献 | 第74-82页 |
| 致谢 | 第82页 |
