| 中文摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-11页 |
| 英文缩略语 | 第11-12页 |
| 第一部分 文献综述 | 第12-28页 |
| 1 抗菌肽的作用机制 | 第12-14页 |
| ·作用于细胞膜的抗菌肽机制 | 第13页 |
| ·抑制细胞壁合成 | 第13页 |
| ·抑制核酸和蛋白质的合成 | 第13-14页 |
| 2 抗菌肽的来源 | 第14-21页 |
| ·动物源抗菌肽 | 第14-15页 |
| ·哺乳动物源抗菌肽 | 第14-15页 |
| ·两栖动物抗菌肽 | 第15页 |
| ·昆虫源抗菌肽 | 第15-18页 |
| ·双翅肽(Diptericins) | 第15页 |
| ·攻击素(Attacins) | 第15-16页 |
| ·肉蝇毒素(Sarcotoxins II) | 第16页 |
| ·膜翅肽(Hymenoptaecins) | 第16页 |
| ·鞘翅肽(Coleoptericin) | 第16-17页 |
| ·蛴螬菌素(Holotricin) | 第17页 |
| ·天蚕葛佬素(Gloverins) | 第17页 |
| ·天蚕素(Cecropin) | 第17-18页 |
| ·防御素(Defensins) | 第18页 |
| ·来源于海洋生物的抗菌肽 | 第18-19页 |
| ·虾类抗菌肽 | 第18-19页 |
| ·蟹类抗菌肽 | 第19页 |
| ·鱼类抗菌肽 | 第19页 |
| ·植物源抗菌肽 | 第19-21页 |
| ·番石榴中富含甘氨酸的抗菌肽Pg-AMP | 第20页 |
| ·小麦抗菌肽Tk-AMP | 第20页 |
| ·中果咖啡种子中的抗菌肽Cc-GPRs | 第20页 |
| ·燕麦多肽Avesin A | 第20-21页 |
| 3.存在的问题 | 第21-22页 |
| ·抗菌肽的来源 | 第21页 |
| ·抗菌肽的安全性 | 第21页 |
| ·抗菌肽的抗性 | 第21-22页 |
| 4.应用前景 | 第22-23页 |
| 参考文献 | 第23-28页 |
| 第二部分 实验部分 | 第28-83页 |
| 第一章 光滑鳖甲抗菌肽的基因克隆及生物信息学分析 | 第28-63页 |
| 引言 | 第28-29页 |
| 1. 材料和试剂 | 第29页 |
| ·材料 | 第29页 |
| ·主要试剂 | 第29页 |
| ·主要实验仪器 | 第29页 |
| 2 方法 | 第29-33页 |
| ·细菌针刺感染幼虫 | 第29-30页 |
| ·光滑鳖甲总RNA的提取 | 第30-31页 |
| ·cDNA模板的合成 | 第31-32页 |
| ·目的基因的扩增及构建pMD18‐T‐ApAMP55、pMD18‐T‐ApAMP85、pMD18‐T‐ApAMP1015重组质粒 | 第32-33页 |
| ·光滑鳖甲抗菌肽基因ApAMP85、ApAMP1015、ApAMP55的生物信息学分析 | 第33页 |
| 3.结果与分析 | 第33-58页 |
| ·光滑鳖甲幼虫总RNA的提取 | 第33-34页 |
| ·光滑鳖甲抗菌肽ApAMP55基因的克隆 | 第34-35页 |
| ·ApAMP55基因序列的生物信息学分析 | 第35-42页 |
| ·光滑鳖甲抗菌肽ApAMP55氨基酸序列分析 | 第35-36页 |
| ·光滑鳖甲抗菌肽ApAMP55序列比对 | 第36页 |
| ·光滑鳖甲抗菌肽ApAMP55遗传进化树 | 第36-37页 |
| ·多肽ApAMP55氨基酸一级结构及理化性质预测分析 | 第37-38页 |
| ·多肽ApAMP55保守结构域分析 | 第38页 |
| ·多肽ApAMP55亚细胞定位 | 第38页 |
| ·多肽ApAMP55信号肽的预测和分析 | 第38-39页 |
| ·多肽ApAMP55跨膜结构域预测和分析 | 第39-40页 |
| ·多肽ApAMP55疏水性\亲水性的预测和分析 | 第40-41页 |
| ·多肽ApAMP55二级结构的预测和分析 | 第41页 |
| ·多肽ApAMP55三级结构的预测和分析 | 第41-42页 |
| ·光滑鳖甲抗菌肽ApAMP85基因的克隆 | 第42页 |
| ·ApAMP85基因序列的生物信息学分析 | 第42-50页 |
| ·光滑鳖甲抗菌肽ApAMP85氨基酸序列分析 | 第42-43页 |
| ·光滑鳖甲抗菌肽ApAMP85序列比对 | 第43-44页 |
| ·光滑鳖甲抗菌肽ApAMP85遗传进化树 | 第44-45页 |
| ·多肽ApAMP85氨基酸一级结构及理化性质预测分析 | 第45-46页 |
| ·多肽ApAMP85蛋白的保守结构域分析 | 第46页 |
| ·多肽ApAMP85亚细胞定位 | 第46页 |
| ·多肽ApAMP85蛋白信号肽的预测和分析 | 第46-47页 |
| ·多肽ApAMP85跨膜结构域预测和分析 | 第47-48页 |
| ·ApAMP85蛋白氨基酸序列疏水性/亲水性的预测和分析 | 第48-49页 |
| ·ApAMP85蛋白的二级结构预测 | 第49页 |
| ·ApAMP85蛋白的三级结构预测 | 第49-50页 |
| ·光滑鳖甲抗菌肽ApAMP1015基因的克隆 | 第50-51页 |
| ·ApAMP1015基因序列的生物信息学分析 | 第51-58页 |
| ·光滑鳖甲抗菌肽ApAMP1015氨基酸序列分析 | 第51页 |
| ·光滑鳖甲抗菌肽ApAMP1015序列比对 | 第51-52页 |
| ·光滑鳖甲抗菌肽ApAMP1015遗传进化树 | 第52页 |
| ·多肽ApAMP1015的理化性质预测 | 第52-54页 |
| ·ApAMP1015蛋白的保守结构域分析 | 第54页 |
| ·多肽ApAMP1015亚细胞定位 | 第54页 |
| ·ApAMP1015蛋白信号肽的预测 | 第54-55页 |
| ·多肽ApAMP1015跨膜结构域预测和分析 | 第55-56页 |
| ·ApAMP1015蛋白氨基酸序列疏水性/亲水性的预测和分析 | 第56-57页 |
| ·ApAMP1015蛋白的二级结构预测 | 第57页 |
| ·ApAMP1015蛋白的三级结构预测 | 第57-58页 |
| 4 讨论 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-63页 |
| 第二章 光滑鳖甲抗菌肽原核表达、表达条件优化及生物学活性研究 | 第63-83页 |
| 引言 | 第63-64页 |
| 1 材料和试剂 | 第64页 |
| ·材料 | 第64页 |
| ·试剂 | 第64页 |
| ·主要仪器 | 第64页 |
| 2.方法 | 第64-72页 |
| ·原核表达载体的构建及鉴定 | 第64-67页 |
| ·融合蛋白表达菌株的筛选及原核表达 | 第67-68页 |
| ·融合蛋白TrxA‐ApAMP的亲和纯化及鉴定 | 第68-69页 |
| ·融合蛋白的亲和纯化 | 第68页 |
| ·蛋白的透析与浓缩 | 第68页 |
| ·融合蛋白TrxA-ApAMP的Western blotting鉴定 | 第68-69页 |
| ·融合蛋白TrxA‐ApAMP1015的原核表达条件的优化 | 第69-71页 |
| ·IPTG浓度对TrxA-ApAMP1015蛋白表达量的影响 | 第69-70页 |
| ·不同诱导温度对TrxA-ApAMP1015蛋白表达量的影响 | 第70页 |
| ·转速对TrxA-ApAMP1015蛋白表达量的影响 | 第70-71页 |
| ·不同诱导时间对TrxA-ApAMP1015蛋白表达量的影响 | 第71页 |
| ·光滑鳖甲抗菌肽ApAMP的抗菌活性检测 | 第71-72页 |
| ·融合蛋白TrxA-ApAMP的表达对宿主菌生长的影响 | 第71页 |
| ·融合蛋白TrxA-ApAMP的抗菌活性的研究 | 第71-72页 |
| 3.结果与分析 | 第72-78页 |
| ·光滑鳖甲抗菌肽的表达及鉴定 | 第72-74页 |
| ·融合蛋白TrxA-ApAMP55的表达与鉴定 | 第72页 |
| ·融合蛋白ApAMP85的表达与鉴定 | 第72-73页 |
| ·融合蛋白ApAMP1015表达与鉴定 | 第73-74页 |
| ·融合蛋白的亲和纯化 | 第74-75页 |
| ·光滑鳖甲抗菌肽ApAMP1015表达条件的优化 | 第75-77页 |
| ·不同IPTG浓度对蛋白的表达量的影响 | 第75页 |
| ·不同诱导温度对蛋白表达量的影响 | 第75-76页 |
| ·转速对蛋白表达量的影响 | 第76页 |
| ·不同诱导时间对蛋白表达量的影响 | 第76-77页 |
| ·光滑鳖甲抗菌肽基因ApAMP的抗菌活性检测 | 第77-78页 |
| 4.讨论 | 第78-81页 |
| 参考文献 | 第81-83页 |
| 第三部分 结论与展望 | 第83-85页 |
| 1.结论 | 第83-84页 |
| 2.展望 | 第84-85页 |
| 第四部分 附录 | 第85-90页 |
| 附录一 常用试剂的配制 | 第85-89页 |
| 附录二 个人简历 | 第89-90页 |
| 致谢 | 第90-91页 |
