| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 符号与缩略语说明 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-27页 |
| 1 沙门菌对酸性压力的应答机理 | 第13-20页 |
| ·鼠伤寒沙门菌的概述 | 第13页 |
| ·鼠伤寒沙门菌酸耐受 | 第13-19页 |
| ·展望 | 第19-20页 |
| 2 蛋白质乙酰化修饰进展 | 第20-24页 |
| ·真核生物乙酰化修饰 | 第20-22页 |
| ·原核生物乙酰化修饰 | 第22-24页 |
| 3 本研究的目的及主要内容 | 第24-27页 |
| ·研究目的 | 第24页 |
| ·主要内容 | 第24-27页 |
| 第二章 鼠伤寒沙门菌乙酰化酶/去乙酰化酶编码基因pat/cobB敲除株构建 | 第27-37页 |
| 1 实验材料 | 第27-29页 |
| ·菌株和质粒 | 第27-28页 |
| ·培养基 | 第28页 |
| ·酶、抗生素和化学试剂 | 第28页 |
| ·主要仪器 | 第28-29页 |
| 2 方法 | 第29-34页 |
| ·质粒DNA的小量提取 | 第30页 |
| ·打靶分子DNA片段扩增 | 第30-32页 |
| ·电转感受态细胞制备和转化 | 第32-33页 |
| ·制备含pKD46的沙门菌感受态细胞 | 第33页 |
| ·打靶分子DNA片段转化 | 第33页 |
| ·重组克隆的鉴定 | 第33页 |
| ·氯霉素抗性消除 | 第33-34页 |
| 3 实验结果 | 第34-36页 |
| ·扩增敲除片段 | 第34页 |
| ·同源重组 | 第34-35页 |
| ·消除抗性 | 第35-36页 |
| 4 讨论 | 第36-37页 |
| 第三章 鼠伤寡沙门菌酸耐受应答检测 | 第37-43页 |
| 1 实验材料 | 第37-38页 |
| ·菌株 | 第37页 |
| ·培养基 | 第37-38页 |
| ·化学试剂 | 第38页 |
| ·主要仪器 | 第38页 |
| 2 实验方法 | 第38-39页 |
| ·生长曲线测定 | 第38页 |
| ·对数期酸耐受应答检测 | 第38-39页 |
| ·平台期酸耐受应答检测 | 第39页 |
| 3 实验结果 | 第39-41页 |
| ·敲除前后菌株长势无差异 | 第39页 |
| ·对数期ATR | 第39-40页 |
| ·平台期ATR | 第40-41页 |
| 4 讨论 | 第41-43页 |
| 第四章 鼠伤寒沙门菌酸抗检测 | 第43-53页 |
| 1 实验材料 | 第43-44页 |
| ·菌株 | 第43页 |
| ·质粒 | 第43页 |
| ·试剂和酶 | 第43页 |
| ·引物 | 第43-44页 |
| 2 实验方法 | 第44-47页 |
| ·菌株构建 | 第44-46页 |
| ·转化 | 第46页 |
| ·对数期抗酸检测 | 第46-47页 |
| ·平台期抗酸检测 | 第47页 |
| ·诱导Pat时抗酸检测 | 第47页 |
| 3 实验结果 | 第47-51页 |
| ·pQE80YX1-pat构建 | 第47-48页 |
| ·对数期抗酸 | 第48-49页 |
| ·平台期抗酸 | 第49页 |
| ·诱导Pat时对数期抗酸 | 第49-50页 |
| ·诱导Pat时平台期抗酸 | 第50-51页 |
| 4 讨论 | 第51-53页 |
| 第五章 鼠伤寒沙门菌酸环境下乙酰化谱的变化 | 第53-59页 |
| 1 实验材料 | 第53-55页 |
| ·菌株 | 第53页 |
| ·试剂 | 第53-54页 |
| ·仪器 | 第54-55页 |
| 2 实验方法 | 第55-56页 |
| ·细菌培养 | 第55页 |
| ·细胞裂解物的制备 | 第55页 |
| ·免疫印迹试验(western blotting) | 第55-56页 |
| 3 赖氨酸乙酰化修饰的免疫印迹结果 | 第56-57页 |
| 4 讨论 | 第57-59页 |
| 第六章 鼠伤寒沙门菌胞内pH检测 | 第59-63页 |
| 1 实验材料 | 第59页 |
| ·质粒 | 第59页 |
| ·抗生素和化学试剂 | 第59页 |
| ·主要仪器 | 第59页 |
| 2 方法 | 第59-60页 |
| ·标准曲线绘制 | 第59-60页 |
| ·细菌胞内pH测量 | 第60页 |
| 3 实验结果 | 第60-62页 |
| ·pH-相对荧光强度标准曲线 | 第60页 |
| ·胞内pH测量 | 第60-62页 |
| 4 讨论 | 第62-63页 |
| 第七章 鼠伤寒沙门菌应对酸压力的相关基因转录水平检测 | 第63-75页 |
| 1 实验材料 | 第63-64页 |
| ·菌株 | 第63-64页 |
| ·试剂 | 第64页 |
| ·主要仪器 | 第64页 |
| 2 实验方法 | 第64-68页 |
| ·细菌培养 | 第64页 |
| ·RNA抽提 | 第64-65页 |
| ·总RNA的定量 | 第65-66页 |
| ·逆转录 | 第66页 |
| ·Quantitative Real-time PCR | 第66-68页 |
| 3 实验结果 | 第68-72页 |
| ·RNA抽提 | 第68-69页 |
| ·Quantitative Real-time PCR | 第69-72页 |
| 4 讨论 | 第72-75页 |
| 第八章 全文总结和讨论 | 第75-77页 |
| 1 全文总结 | 第75页 |
| 2 讨论 | 第75-77页 |
| 参考文献 | 第77-83页 |
| 致谢 | 第83-85页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第85页 |
