| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-16页 |
| 第一章 综述 | 第16-29页 |
| 1 植物耐盐性研究现状 | 第16-19页 |
| ·植物耐盐性研究的模式生物 | 第16-17页 |
| ·耐盐作物研究 | 第17页 |
| ·植物盐胁迫诱导信号转导途径研究 | 第17-19页 |
| ·MAPK激酶级联途径 | 第17-18页 |
| ·Ca~(2+)依赖型信号转导通路 | 第18-19页 |
| 2 盐藻概况 | 第19-21页 |
| ·盐藻生理特征及耐盐机制 | 第19-20页 |
| ·盐藻生物反应器的研究 | 第20-21页 |
| 3 MAPK的研究进展 | 第21-23页 |
| ·MAPK蛋白结构 | 第21-22页 |
| ·植物MAPK的分类 | 第22页 |
| ·MAPK的功能研究 | 第22-23页 |
| 4 反义技术 | 第23-26页 |
| ·反义方法的分类 | 第23-24页 |
| ·反义RNA技术 | 第24-25页 |
| ·反义技术在植物改良上的应用 | 第25页 |
| ·植物淀粉合成的控制 | 第25页 |
| ·植物的抗病性 | 第25页 |
| ·油料植物种子中脂肪酸合成的控制 | 第25页 |
| ·改变花卉的颜色 | 第25页 |
| ·反义技术的研究展望 | 第25-26页 |
| 5 蛋白质亚细胞定位方法 | 第26-27页 |
| ·免疫胶体金标记 | 第26页 |
| ·免疫荧光技术 | 第26页 |
| ·融合报告基因定位法 | 第26-27页 |
| 6 研究目的和意义 | 第27页 |
| 7 研究内容 | 第27-29页 |
| 第二章 盐藻DsMAPK基因的原核表达与纯化 | 第29-46页 |
| 1 实验材料 | 第29-30页 |
| ·菌种与质粒 | 第29页 |
| ·主要试剂 | 第29-30页 |
| ·实验仪器 | 第30页 |
| 2 实验方法 | 第30-41页 |
| ·原核表达载体pGS-21a-DsMAPK的构建 | 第30-37页 |
| ·目的基因DsMAPK的PCR扩增 | 第32页 |
| ·目的基因的回收以及与pMD~(TM)18-T Simple Vector的连接 | 第32-34页 |
| ·大肠杆菌DH5α 感受态细胞的制备与转化 | 第34页 |
| ·克隆载体pMD~(TM)18-T Simple-DsMAPK的质粒小量提取 | 第34-35页 |
| ·克隆载体pMD~(TM)18-T simple-DsMAPK的鉴定与测序 | 第35-36页 |
| ·克隆载体与表达载体的双酶切 | 第36-37页 |
| ·目的基因与表达载体大片段的连接与转化 | 第37页 |
| ·融合蛋白的原核表达 | 第37-39页 |
| ·原核表达载体转化 E. coli .BL21 (DE3) | 第37页 |
| ·融合蛋白的诱导表达 | 第37-38页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第38-39页 |
| ·融合蛋白表达形式分析 | 第39页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第39-40页 |
| ·蛋白样品的制备 | 第39-40页 |
| ·纯化方式 | 第40页 |
| ·融合蛋白的Western Blotting检测 | 第40-41页 |
| 3 实验结果 | 第41-45页 |
| ·原核表达载体pGS-21a-DsMAPK的构建 | 第41-42页 |
| ·融合蛋白的诱导表达及形式分析 | 第42-43页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第43-44页 |
| ·融合蛋白的Western Blotting检测 | 第44-45页 |
| 4 讨论 | 第45-46页 |
| 第三章 盐藻DsMAPK基因的反义表达 | 第46-62页 |
| 1 实验材料 | 第46-47页 |
| ·藻种、菌种和质粒 | 第46页 |
| ·主要试剂 | 第46页 |
| ·实验仪器 | 第46-47页 |
| 2 实验方法 | 第47-56页 |
| ·盐藻DsMAPK基因反义植物表达载体的构建 | 第47-50页 |
| ·反义片段的PCR扩增 | 第49页 |
| ·凝胶回收目的片段并与pMD~(TM)18-T Simple Vector连接 | 第49页 |
| ·连接产物pMD-aMAPK的转化与鉴定 | 第49页 |
| ·pMD-aMAPK与pMDCMGN-Cat的双酶切与连接反应 | 第49-50页 |
| ·大量提取反义表达载体质粒pMDCaMGN-Cat | 第50-51页 |
| ·盐藻细胞的培养与转化 | 第51-52页 |
| ·盐藻的培养 | 第51页 |
| ·盐藻反义表达载体pMDCaMGN-Cat的转化及筛选 | 第51-52页 |
| ·半定量RT-PCR方法分析盐胁迫下DsMAPK的表达情况 | 第52-56页 |
| ·盐藻盐胁迫处理及总RNA提取 | 第52-53页 |
| ·RT-PCR反转录合成cDNA | 第53-54页 |
| ·引物设计 | 第54页 |
| ·半定量RT-PCR体系的优化 | 第54-55页 |
| ·半定量RT-PCR分析盐胁迫下DsMAPK的表达水平 | 第55-56页 |
| 3 实验结果 | 第56-60页 |
| ·反义表达载体的PCR与酶切鉴定 | 第56页 |
| ·转基因盐藻的氯霉素筛选 | 第56-57页 |
| ·盐藻总RNA提取 | 第57-58页 |
| ·PCR最佳循环数的确定 | 第58-60页 |
| ·盐胁迫下DsMAPK表达水平的半定量分析 | 第60页 |
| 4 讨论 | 第60-62页 |
| ·半定量RT-PCR可行性 | 第60-61页 |
| ·RT-PCR扩增的相关问题 | 第61页 |
| ·半定量RT-PCR循环数的确定 | 第61页 |
| ·关于本研究的分析与展望 | 第61-62页 |
| 第四章 盐藻DsMAPK蛋白的亚细胞定位 | 第62-68页 |
| 1 实验材料 | 第62-63页 |
| ·菌种与质粒 | 第62页 |
| ·主要试剂 | 第62页 |
| ·实验仪器 | 第62-63页 |
| 2 实验方法 | 第63-65页 |
| ·植物表达载体pMDCGN-Cat和pMDCMGN-Cat的大量提取 | 第63页 |
| ·载体质粒转化农杆菌 | 第63-64页 |
| ·根癌农杆菌GV3101 感受态细胞的制备 | 第63-64页 |
| ·冻融法转化农杆菌感受态细胞 | 第64页 |
| ·菌液PCR验证载体质粒是否导入农杆菌 | 第64页 |
| ·根癌农杆菌介导法侵染洋葱表皮细胞 | 第64-65页 |
| 3 实验结果 | 第65-66页 |
| ·农杆菌菌液PCR | 第65页 |
| ·盐藻Ds MAPK蛋白的亚细胞定位分析 | 第65-66页 |
| 4 讨论 | 第66-68页 |
| 结论与展望 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-75页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第75-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 附录 | 第79-81页 |
