| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 目录 | 第6-10页 |
| 1 引言 | 第10-16页 |
| ·尖孢镰刀菌简介 | 第10-11页 |
| ·植物-病原菌互作机制 | 第11-12页 |
| ·香蕉枯萎病菌简介 | 第12-13页 |
| ·MAPK信号途径 | 第13-14页 |
| ·植物病原真菌中的MAPK信号途径 | 第14-16页 |
| 2 材料与方法 | 第16-34页 |
| ·材料 | 第16-18页 |
| ·菌株和质粒 | 第16-17页 |
| ·试剂 | 第17页 |
| ·培养基及试剂配方 | 第17-18页 |
| ·仪器 | 第18页 |
| ·方法 | 第18-34页 |
| ·CTAB法提取基因组DNA | 第18-19页 |
| ·质粒的小量提取 | 第19页 |
| ·总RNA的提取 | 第19-20页 |
| ·反转录反应 | 第20页 |
| ·基因的PCR和RT-PCR扩增 | 第20页 |
| ·目的基因的生物信息学分析 | 第20-21页 |
| ·FoMsb2和FoHog1基因敲除载体的构建 | 第21-25页 |
| ·FoFmk1基因敲除载体的构建 | 第25-28页 |
| ·PEG介导的原生质体转化 | 第28-29页 |
| ·ΔFoMsb2和ΔFoHog1突变体的鉴定 | 第29页 |
| ·ΔFoMsb2+ΔFoFmk1突变体的鉴定 | 第29页 |
| ·突变体的显微形态观察 | 第29-30页 |
| ·突变体的培养形态观察 | 第30页 |
| ·突变体的产孢量测定 | 第30页 |
| ·液体培养基中突变体的菌丝干重测定 | 第30页 |
| ·突变体核染色观察 | 第30页 |
| ·不同碳源条件下突变体生长速率及菌落形态观察 | 第30页 |
| ·不同氮源条件下突变体生长速率及菌落形态观察 | 第30页 |
| ·不同温度条件下突变体的生长及菌落形态 | 第30-31页 |
| ·不同pH条件下突变体的生长及菌落形态 | 第31页 |
| ·渗透压胁迫对突变体生长的影响 | 第31页 |
| ·细胞壁选择性压力对突变体生长的影响 | 第31页 |
| ·外源氧胁迫对突变体生长的影响 | 第31页 |
| ·锂离子胁迫对突变体生长的影响 | 第31页 |
| ·抑菌物质对突变体的抑制作用 | 第31页 |
| ·突变体的酶活平板测试 | 第31页 |
| ·玻璃纸穿透实验 | 第31-32页 |
| ·香蕉汁培养基上的菌落形态观察 | 第32页 |
| ·香蕉活体叶片定殖能力测定 | 第32页 |
| ·苹果定殖能力测定 | 第32页 |
| ·粗毒素的假茎致病力测定 | 第32页 |
| ·突变体毒素提取与测定 | 第32页 |
| ·盆栽香蕉苗致病力测定 | 第32-33页 |
| ·基因功能回复验证 | 第33-34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-63页 |
| ·目的基因的PCR和RT-PCR扩增 | 第34页 |
| ·目的基因的生物信息学分析 | 第34-39页 |
| ·蛋白理化性质分析 | 第34-35页 |
| ·蛋白跨膜结构域分析 | 第35页 |
| ·蛋白磷酸化位点分析 | 第35-36页 |
| ·蛋白信号肽预测 | 第36页 |
| ·蛋白亚细胞定位 | 第36页 |
| ·蛋白功能域预测 | 第36-37页 |
| ·蛋白卷曲螺旋结构预测 | 第37页 |
| ·蛋白同源性分析及系统进化树构建 | 第37-39页 |
| ·FoMsb2和FoHog1基因敲除载体的构建 | 第39-41页 |
| ·同源臂的PCR扩增 | 第39页 |
| ·FoMsb2-A-T和FoHog1-A-T重组质粒的酶切鉴定 | 第39-40页 |
| ·FoMsb2-A-pCT74和FoMsb2-B-pCT74重组质粒的酶切鉴定 | 第40-41页 |
| ·FoMsb2-A-pCT74-B和FoMsb2-B-pCT74-B重组质粒的酶切鉴定 | 第41页 |
| ·ΔFoMsb2和ΔFoHog1突变体的鉴定 | 第41-44页 |
| ·检测上游的同源重组的发生 | 第41-42页 |
| ·检测下游的同源重组的发生 | 第42-43页 |
| ·敲除片段整合到基因组的检测 | 第43-44页 |
| ·目的基因的检测 | 第44页 |
| ·FoFmk1基因敲除载体的构建 | 第44-47页 |
| ·同源臂的PCR扩增 | 第44-45页 |
| ·FoFmk1-A-T和FoFmk1-B-T重组质粒的酶切鉴定 | 第45页 |
| ·FoFmk1-A-pKOV21重组质粒的酶切鉴定 | 第45-46页 |
| ·FoFmk1-A-pKOV21-B重组质粒的酶切鉴定 | 第46页 |
| ·FoFmk1基因的检测 | 第46-47页 |
| ·突变体的表型观察 | 第47-59页 |
| ·突变体的培养形态观察 | 第47页 |
| ·突变体的菌丝显微形态观察 | 第47-48页 |
| ·突变体的产孢量测定 | 第48-49页 |
| ·突变体的菌丝干重测定 | 第49页 |
| ·突变体核染色观察 | 第49-50页 |
| ·不同碳源条件下突变体生长速率及菌落形态观察 | 第50页 |
| ·不同氮源条件下突变体生长速率及菌落形态观察 | 第50-51页 |
| ·不同温度条件下突变体的生长及菌落形态 | 第51-52页 |
| ·不同pH条件下突变体的生长及菌落形态 | 第52-53页 |
| ·渗透压胁迫对突变体生长的影响 | 第53页 |
| ·外源氧胁迫对突变体生长的影响 | 第53-54页 |
| ·锂离子胁迫对突变体生长的影响 | 第54页 |
| ·细胞壁选择性压力对突变体生长的影响 | 第54-55页 |
| ·抑菌物质对突变体的抑制作用 | 第55页 |
| ·突变体的酶活平板测定 | 第55-56页 |
| ·玻璃纸穿透实验 | 第56页 |
| ·香蕉汁培养基上的菌落形态观察 | 第56页 |
| ·活体叶片定殖能力测定 | 第56-57页 |
| ·苹果组织定殖能力测定 | 第57页 |
| ·粗毒素假茎致病实验 | 第57-58页 |
| ·突变体毒素提取与测定 | 第58页 |
| ·盆栽香蕉苗致病力测定 | 第58-59页 |
| ·基因功能回复验证 | 第59-63页 |
| ·FoMsb2和FoHog1基因互补片段的获得 | 第59-60页 |
| ·互补载体酶切验证 | 第60页 |
| ·互补突变体的鉴定 | 第60-61页 |
| ·互补突变体的生物学特性分析 | 第61-63页 |
| 4 讨论 | 第63-66页 |
| ·目的基因的克隆及生物信息学分析 | 第63页 |
| ·基因敲除载体的构建 | 第63页 |
| ·基因敲除和转化子的鉴定 | 第63页 |
| ·突变体的表型变化分析 | 第63-64页 |
| ·突变体的生物学特性分析 | 第64-65页 |
| ·突变体致病力测定 | 第65页 |
| ·基因功能回复验证 | 第65-66页 |
| 5 结论 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-71页 |
| 附录 | 第71-74页 |
| 缩略语 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
