| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-13页 |
| 常见英文符号缩略表 | 第13-15页 |
| 第一章 引言 | 第15-24页 |
| ·蜱的概况 | 第15页 |
| ·蛋白酶抑制分子 | 第15-18页 |
| ·Kunitz 型的蛋白酶抑制分子 | 第16-18页 |
| ·Kunitz 型蛋白酶抑制分子结构 | 第17-18页 |
| ·Kunitz 型蛋白酶抑制分子作用机理 | 第18-19页 |
| ·BPTI 抑制分子作用原理 | 第18-19页 |
| ·TFPI（人组织因子途径抑制分子）抑制分子作用原理 | 第19页 |
| ·功能作用 | 第19-22页 |
| ·Kunitz 抑制凝血酶 | 第19-20页 |
| ·抑制丝氨酸蛋白酶 | 第20页 |
| ·其他蛋白酶的抑制作用 | 第20-21页 |
| ·在微生物感染防御系统的作用 | 第21页 |
| ·细胞毒性 | 第21页 |
| ·调节吸血过程 | 第21页 |
| ·作用于激肽释放酶-激肽系统 | 第21-22页 |
| ·抑制血小板凝集 | 第22页 |
| ·展望 | 第22-24页 |
| 第二章 亚洲璃眼蜱 B26 和 P15 的原核表达和初步功能研究 | 第24-52页 |
| ·材料 | 第24页 |
| ·方法 | 第24-37页 |
| ·B26 和 P15 全长序列分析 | 第24-25页 |
| ·P15 原核表达构建载体 | 第25-29页 |
| ·P15 原核表达引物的设计 | 第25页 |
| ·PCR 扩增 | 第25页 |
| ·PCR 产物鉴定后胶回收 | 第25-26页 |
| ·pGEX-4T-1 空质粒的提取 | 第26-27页 |
| ·P15 双酶切 | 第27页 |
| ·P15 与 pGEX-4T-1 空质粒连接 | 第27-28页 |
| ·P15-pGEX-4T-1 转化至感受态 E.coli DH5α | 第28页 |
| ·P15-pGEX-4T-1/DH5α阳性鉴定 | 第28页 |
| ·P15-pGEX-4T-1/DH5α转化至 E.coli BL21 | 第28-29页 |
| ·B26 原核表达构建载体 | 第29页 |
| ·B26-pGEX-4T-3/DH5α转化至 E.coli BL21 | 第29页 |
| ·重组蛋白表达 | 第29-37页 |
| ·重组蛋白表达形式分析 | 第29-30页 |
| ·诱导时相表达 | 第30页 |
| ·SDS-PAGE 电泳 | 第30-31页 |
| ·蛋白提取和纯化 | 第31-33页 |
| ·GST 标签蛋白的纯化 | 第31页 |
| ·GST 树脂纯化 GST 标签蛋白 | 第31-32页 |
| ·蛋白透析 | 第32页 |
| ·BSA 定量 | 第32页 |
| ·BCA 定量 | 第32-33页 |
| ·动物免疫保护和抗蜱疫苗实验 | 第33-34页 |
| ·Western blot | 第34-35页 |
| ·P15 酶活实验 | 第35-36页 |
| ·B26 和 P15 活化部分凝血酶时间（即 APTT）和凝血酶原时间（即 PT)检测 | 第36-37页 |
| ·结果 | 第37-49页 |
| ·B26 和 P15 全长序列分析 | 第37-39页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第39-44页 |
| ·P15 和 B26 原核表达 | 第39-44页 |
| ·P15 和 pGEX-4T-1 双酶切 | 第39-40页 |
| ·P15 和 B26 诱导形式表达 | 第40-41页 |
| ·P15 和 B26 重组蛋白时相表达 | 第41-43页 |
| ·P15 和 B26 重组蛋白纯化及 BSA 定量 | 第43-44页 |
| ·P15 和 B26 BCA 定量 | 第44页 |
| ·动物免疫保护和抗蜱疫苗试验 | 第44-45页 |
| ·Western blot | 第45页 |
| ·酶活实验 | 第45-47页 |
| ·B26 和 P15 活化部分凝血酶时间和凝血酶原时间 | 第47-49页 |
| ·B26 和 P15 活化部分凝血酶时间（APTT) | 第47-48页 |
| ·B26 和 P15 活化部分凝血酶时间(PT) | 第48-49页 |
| ·讨论 | 第49-52页 |
| 第三章 Real-time PCR 分析 B26 和 P15 基因的表达特点和分布情况 | 第52-59页 |
| ·材料 | 第52页 |
| ·方法 | 第52-55页 |
| ·亚洲璃眼蜱各发育阶段以及各组织器官的收集 | 第52-54页 |
| ·亚洲璃眼蜱的饲养 | 第52页 |
| ·亚洲璃眼蜱各发育阶段的收集 | 第52页 |
| ·亚洲璃眼蜱各组织器官的收集 | 第52-53页 |
| ·亚洲璃眼蜱各发育阶段以及各组织器官的 RNA 提取 | 第53页 |
| ·亚洲璃眼蜱各发育阶段以及各组织器官的 cDNA 合成 | 第53-54页 |
| ·Real-Time PCR 鉴定 | 第54-55页 |
| ·引物设计 | 第54页 |
| ·Real-Time PCR 分析 B26 和 P15 在各发育阶段以及各组织器官的表达特点 | 第54-55页 |
| ·Real-Time PCR 结果 | 第55-57页 |
| ·B26 在亚洲璃眼蜱各发育阶段以及各组织器官的表达特点 | 第55-56页 |
| ·P15 在亚洲璃眼蜱各发育阶段以及各组织器官的表达特点 | 第56-57页 |
| ·讨论 | 第57-59页 |
| 第四章 亚洲璃眼蜱 P15 和 B26 的 RNA 干扰 | 第59-68页 |
| ·材料 | 第59页 |
| ·方法 | 第59-64页 |
| ·dsRNA 合成和纯化 | 第59-62页 |
| ·引物设计 | 第59-60页 |
| ·PCR 扩增 | 第60-61页 |
| ·PCR 产物鉴定后胶回收 | 第61页 |
| ·dsRNA 的合成 | 第61页 |
| ·dsRNA 的纯化 | 第61-62页 |
| ·亚洲璃眼蜱显微注射 | 第62页 |
| ·亚洲璃眼蜱的接种和饲养 | 第62页 |
| ·RNAi 效果分析 | 第62-64页 |
| ·Real-time PCR 引物设计 | 第62-63页 |
| ·Real-time PCR | 第63-64页 |
| ·RNAi 对亚洲璃眼蜱的生物学特性影响的分析 | 第64页 |
| ·结果 | 第64-66页 |
| ·B26 的 RNAi 结果 | 第64-65页 |
| ·Real-time PCR 分析干扰效果 | 第64-65页 |
| ·B26 RNAi 对亚洲璃眼蜱生物学特性的影响 | 第65页 |
| ·P15 的 RNAi 结果 | 第65-66页 |
| ·Real-time PCR 分析干扰效果 | 第65-66页 |
| ·P15 RNAi 对亚洲璃眼蜱生物学特性的影响 | 第66页 |
| ·讨论 | 第66-68页 |
| 第五章 全文总结 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69-71页 |
| 参考文献 | 第71-77页 |
| 附录 | 第77-87页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第87页 |
