| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 第一章 引言 | 第12-26页 |
| 第一节 阿尔兹海默病 | 第12-14页 |
| ·阿尔兹海默病概况 | 第12-13页 |
| ·阿尔兹海默病的病理特征 | 第13页 |
| ·阿尔兹海默病发病机制 | 第13页 |
| ·阿尔兹海默病相关蛋白 | 第13-14页 |
| 第二节 Mint蛋白家族 | 第14-19页 |
| ·Mint蛋白家族简介 | 第14-15页 |
| ·Mint蛋白家族的结构 | 第15-19页 |
| 第三节 APP蛋白 | 第19-24页 |
| ·APP蛋白简介 | 第19-22页 |
| ·APP蛋白的降解过程 | 第22-24页 |
| 第四节 研究意义 | 第24-26页 |
| 第二章 实验方法原理和材料 | 第26-52页 |
| 第一节 分子克隆 | 第26-32页 |
| ·cDNA的获取 | 第26-28页 |
| ·体外DNA片段扩增 | 第28-31页 |
| ·载体构建 | 第31-32页 |
| 第二节 蛋白表达 | 第32-35页 |
| ·表达体系的选择 | 第32-33页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第33-34页 |
| ·影响原核表达的条件 | 第34-35页 |
| 第三节 蛋白纯化 | 第35-40页 |
| ·蛋白纯化的基本原理 | 第35-36页 |
| ·亲和色谱层析 | 第36-37页 |
| ·离子交换色谱层析 | 第37页 |
| ·分子排阻色谱层析 | 第37-38页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第38-40页 |
| 第四节 晶体筛选与结构解析 | 第40-43页 |
| ·蛋白质结晶的理论基础 | 第40-41页 |
| ·影响蛋白质结晶的因素 | 第41页 |
| ·蛋白质结晶的方法 | 第41-42页 |
| ·蛋白质晶体的解析 | 第42-43页 |
| 第五节 相关的生化实验 | 第43-46页 |
| ·GST pull-down技术 | 第43页 |
| ·覆盖印迹分析 | 第43-44页 |
| ·分析型超速离心实验(AUC) | 第44页 |
| ·酶联免疫吸附测定法(ELISA) | 第44-45页 |
| ·等温滴定量热(ITC) | 第45-46页 |
| 第六节 相关的细胞学实验 | 第46-49页 |
| ·人胚肾细胞(HEK293T)的培养 | 第46页 |
| ·细胞的转染及检测 | 第46-48页 |
| ·激光扫描共聚焦显微镜技术 | 第48-49页 |
| 第七节 材料 | 第49-52页 |
| 第三章 Mint2“打开”和“闭合”构象的晶体结构 | 第52-81页 |
| 第一节 Mint蛋白家族碳端区域的确定 | 第52-55页 |
| 第二节 Mints-PPC区域的表达纯化尝试 | 第55-58页 |
| ·表达载体的构建 | 第55页 |
| ·Mintl、Mint3和Lin10的PPC区域的表达纯化 | 第55-58页 |
| 第三节 Mint2-PPC区域的“闭合”结构 | 第58-71页 |
| ·Mint2-PPC区域的表达纯化 | 第58-62页 |
| ·硒代甲硫氨酸化的Mint2—PPC晶体筛选 | 第62-65页 |
| ·稳定Mint2—PPC构象的尝试 | 第65-67页 |
| ·Mint2—PPC晶体结构 | 第67-71页 |
| 第四节 APP诱导Mint2-PARM区域的“打开”结构 | 第71-81页 |
| ·结合APP多肽的Mint2碳端区域的筛选 | 第71-73页 |
| ·Mint2-PARM结合APP多肽的晶体筛选及结构解析 | 第73-81页 |
| 第四章 Mint2“打开—闭合”构象变化机制 | 第81-100页 |
| 第一节 “打开”和“闭合”构象的晶体结构分析 | 第81-83页 |
| 第二节 突变体蛋白的表达纯化 | 第83-86页 |
| ·Mint2-PPC突变体蛋白的表达纯化 | 第83-84页 |
| ·APPcyto蛋白的表达纯化 | 第84-86页 |
| 第三节 Mint2和APP结合的检测方法探索 | 第86-92页 |
| ·ITC、GST Pull-Down检测Mint2结合APP多肽 | 第86-88页 |
| ·覆盖印迹分析检测Mint2结合APP多肽 | 第88-90页 |
| ·改良的覆盖点印迹分析检测Mint2结合APP多肽 | 第90-92页 |
| 第四节 AUC检测Mint2“打开—闭合”构象变化 | 第92-100页 |
| ·沉降速率法测定摩擦系数比 | 第92-95页 |
| ·沉降平衡法测定Mint2和APP的结合常数 | 第95-100页 |
| 第五章 Mint2“打开—闭合”构象变化调节APP代谢 | 第100-117页 |
| 第一节 质粒的构建和APP代谢体系的建立 | 第100-102页 |
| ·全长Mint2的基因获取及质粒构建 | 第100-101页 |
| ·APP代谢体系的建立 | 第101-102页 |
| 第二节 Mint2“打开”构象抑制APP降解 | 第102-103页 |
| 第三节 Mint2“闭合”构象破坏抑制APP降解 | 第103-105页 |
| 第四节 氧化还原试剂影响Mint突变体的调节作用 | 第105-108页 |
| 第五节 Mint2动态调节APP代谢机制 | 第108-111页 |
| 第六节 Mint2和APP在细胞中的定位 | 第111-117页 |
| 第六章 结果与讨论 | 第117-119页 |
| 第七章 串联排列L27结构域的结构研究 | 第119-122页 |
| 参考文献 | 第122-128页 |
| 致谢 | 第128-129页 |
| 个人简历 在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第129页 |
