| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-9页 |
| 目录 | 第9-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-17页 |
| 1 前言 | 第13页 |
| 2 草鱼机体防御系统 | 第13-15页 |
| ·草鱼的免疫与防御系统 | 第13-14页 |
| ·草鱼的凝血机制 | 第14-15页 |
| 3 凝血因子的研究进展 | 第15-16页 |
| ·凝血因子的功能及其在水产动物中的应用 | 第15页 |
| ·凝血因子Ⅱ的相关研究 | 第15-16页 |
| 4 研究目的和意义 | 第16-17页 |
| 第二章 草鱼凝血因子Ⅱ基因CDNA全长克隆及生物信息学分析 | 第17-45页 |
| 1 实验材料 | 第17-19页 |
| ·实验对象 | 第17页 |
| ·克隆载体 | 第17页 |
| ·实验主要仪器设备 | 第17-18页 |
| ·实验药品及主要试剂 | 第18页 |
| ·实验引物 | 第18-19页 |
| 2 实验方法 | 第19-28页 |
| ·实验材料的准备 | 第19页 |
| ·动物组织总RNA的提取 | 第19-20页 |
| ·草鱼凝血因子Ⅱ基因中间片段的克隆 | 第20-24页 |
| ·引物设计 | 第20页 |
| ·逆转录cDNA的合成 | 第20页 |
| ·中间片段PCR扩增 | 第20-21页 |
| ·PCR产物的回收及纯化 | 第21-22页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第22页 |
| ·目的片段的连接、转化及蓝白斑筛选 | 第22-23页 |
| ·菌液PCR的阳性鉴定及送检测序 | 第23-24页 |
| ·草鱼凝血因子Ⅱ基因3’端克隆 | 第24-26页 |
| ·引物设计 | 第24页 |
| ·RACE 3’端cDNA第一链的合成 | 第24-25页 |
| ·RACE 3’端PCR扩增 | 第25-26页 |
| ·RACE 3’端PCR扩增产物验证、回收纯化、连接、转化和PCR阳性鉴定及送检测序 | 第26页 |
| ·草鱼凝血因子Ⅱ基因5’端克隆 | 第26-28页 |
| ·引物设计 | 第26页 |
| ·RACE 5’端cDNA第一链的合成 | 第26页 |
| ·cDNA的纯化 | 第26页 |
| ·cDNA3’端加Poly(A)尾 | 第26-27页 |
| ·RACE 5’端PCR扩增 | 第27-28页 |
| ·RACE 5’端PCR扩增产物验证、回收纯化、连接、转化和PCR阳性鉴定及送检测序 | 第28页 |
| ·草鱼凝血因子Ⅱ基因cDNA全长序列拼接 | 第28页 |
| ·草鱼凝血因子Ⅱ基因生物信息学分析 | 第28页 |
| ·系统发育树的构建 | 第28页 |
| 3 实验结果 | 第28-43页 |
| ·RNA质量检测 | 第28-29页 |
| ·草鱼凝血因子Ⅱ基因的3’RACE和5’RACE扩增结果 | 第29-30页 |
| ·草鱼凝血因子Ⅱ基因全长序列拼接及分析 | 第30-34页 |
| ·草鱼凝血因子Ⅱ蛋白生物信息学分析 | 第34-43页 |
| ·氨基酸组成及其理化性质 | 第34-35页 |
| ·草鱼凝血因子Ⅱ蛋白序列二级结构预测 | 第35-37页 |
| ·草鱼凝血因子Ⅱ蛋白序列三级结构预测 | 第37-38页 |
| ·草鱼凝血因子Ⅱ蛋白序列同源性分析 | 第38-42页 |
| ·草鱼凝血因子Ⅱ蛋白系统进化树的构建 | 第42-43页 |
| 4 讨论 | 第43-44页 |
| 5 小结 | 第44-45页 |
| 第三章 草鱼凝血因子Ⅱ基因的荧光定量及组织差异表达分析 | 第45-55页 |
| 1 实验材料 | 第45-46页 |
| ·实验对象 | 第45页 |
| ·实验主要仪器设备 | 第45页 |
| ·实验药品及主要试剂 | 第45-46页 |
| ·实验引物的设计与合成 | 第46页 |
| 2 实验方法 | 第46-49页 |
| ·人工攻毒 | 第46-47页 |
| ·实验材料的采集 | 第47页 |
| ·动物组织总RNA的提取 | 第47-48页 |
| ·逆转录cDNA的合成 | 第48页 |
| ·待测样品荧光定量PCR | 第48-49页 |
| ·基因表达量的计算 | 第49页 |
| 3 结果分析 | 第49-53页 |
| ·不同组织荧光定量表达结果 | 第49-50页 |
| ·草鱼凝血因子Ⅱ基因的组织差异表达 | 第50-53页 |
| 4 讨论 | 第53-54页 |
| 5 小结 | 第54-55页 |
| 结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 作者简介 | 第61页 |
