| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 第1章 综述及引言 | 第10-21页 |
| ·水产养殖现状简介 | 第10页 |
| ·迟钝爱德华氏菌的简介 | 第10-11页 |
| ·转录机器扰动的概述 | 第11-18页 |
| ·细菌中的sigma因子(σ) | 第12-16页 |
| ·sigma因子(σ)之间的相互作用相关研究 | 第16-17页 |
| ·rpoN及rpoS之间相互作用研究 | 第17-18页 |
| ·相关的实验技术及方法的概述 | 第18-20页 |
| ·基因缺失技术 | 第18-19页 |
| ·LD_(50)的测定 | 第19页 |
| ·竞争性实验(CIA) | 第19-20页 |
| ·本课题研究的预期工作目标 | 第20-21页 |
| 第2章 材料及方法 | 第21-36页 |
| ·仪器和材料 | 第21-28页 |
| ·化学试剂及药品 | 第21页 |
| ·生物药品与试剂 | 第21-22页 |
| ·培养基 | 第22页 |
| ·相关缓冲液 | 第22-24页 |
| ·实验仪器设备 | 第24-25页 |
| ·相关菌种 | 第25-26页 |
| ·相关质粒 | 第26页 |
| ·相关引物 | 第26-28页 |
| ·相关软件 | 第28页 |
| ·微生物学相关方法 | 第28-29页 |
| ·大肠杆菌的培养方法 | 第28-29页 |
| ·迟钝爱德华氏菌的培养方法 | 第29页 |
| ·保藏菌种 | 第29页 |
| ·遗传学相关方法 | 第29-30页 |
| ·制备大肠杆菌的感受态细胞(分为长期用及短期用) | 第29页 |
| ·转化大肠杆菌 | 第29页 |
| ·制备迟钝爱德华氏菌的感受态 | 第29-30页 |
| ·分子生物学相关方法 | 第30-32页 |
| ·抽提质粒DNA | 第30页 |
| ·DNA的酶切、回收以及连接 | 第30-32页 |
| ·RNA水平的操作 | 第32-33页 |
| ·RNA抽提之前的相关准备工作 | 第32页 |
| ·RNA抽提使用到的仪器 | 第32页 |
| ·RNA抽提的具体步骤 | 第32-33页 |
| ·RNA质检 | 第33页 |
| ·荧光定量PCR(qRT-PCR) | 第33-34页 |
| ·银染方法对DNA条带进行着色 | 第34-35页 |
| ·银染法基本原理 | 第34页 |
| ·银染法主要步骤 | 第34-35页 |
| ·裂解法测定β-半乳糖苷酶的酶活 | 第35-36页 |
| 第三章 结果与分析 | 第36-66页 |
| ·迟钝爱德华氏菌EIB202中ΔrpoNΔrpoS(rnrs)缺失株的构建 | 第36-42页 |
| ·自杀质粒pREDrpoS的构建 | 第36-39页 |
| ·pREDrpoS转化SM10λpir | 第39-41页 |
| ·迟钝爱德华氏菌EIB202的结合转移 | 第41页 |
| ·突变株的筛选及其鉴定 | 第41-42页 |
| ·rpoN及rpoS的同时缺失对迟钝爱德华氏菌EIB202毒力的影响 | 第42-44页 |
| ·rpoN及rpoS在压力耐受方面所表现出的相互协同作用 | 第44-46页 |
| ·EIB202株rpoN对rpoS的转录调控 | 第46-53页 |
| ·RNA的抽提 | 第47页 |
| ·抽提的RNA定量 | 第47-48页 |
| ·RNA的反转及其基因组污染去除的验证 | 第48页 |
| ·逆转录PCR(RT-PCR) | 第48-49页 |
| ·荧光定量PCR(qRT-PCR)数据显示rpoN调控rpoS的转录 | 第49页 |
| ·体外测定启动子活性验证rpoN调控rpoS的转录 | 第49-53页 |
| ·rpoS及rpoN调控fliA及其他与鞭毛相关的基因 | 第53-56页 |
| ·通过差示PCR(DD-RT-PCR)筛选差异转录的基因 | 第56-58页 |
| ·E.tarda EIB202中fkpA基因功能的初步探究 | 第58-66页 |
| ·fkpA基因的缺失株的构建 | 第58-59页 |
| ·fkpA基因回补株的构建 | 第59-61页 |
| ·fkpA基因与迟钝爱德华氏菌EIB202菌体生长的关系 | 第61-62页 |
| ·fkpA基因与EIB202毒力的关系 | 第62页 |
| ·fkpA基因与热应激及乙醇压力的关系 | 第62-64页 |
| ·fkpA基因分子伴侣活性的初步探索 | 第64-66页 |
| 第四章 讨论 | 第66-74页 |
| ·RpoN及RpoS在菌体压力耐受方面协同作用分析 | 第66-67页 |
| ·RpoN及RpoS对菌体毒力影响的分析 | 第67-68页 |
| ·RpoN及RpoS之间的相互调控关系分析 | 第68-69页 |
| ·RpoN,RpoS及FliA之间的相互调控关系分析 | 第69-71页 |
| ·微生物体内其他sigma因子之间相互调节作用分析 | 第71-74页 |
| 第五章 结论与展望 | 第74-76页 |
| ·本课题所取得的关键性结论 | 第74-75页 |
| ·后续的课题展望 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-81页 |
| 致谢 | 第81页 |
