| 致谢 | 第1-8页 |
| 摘要 | 第8-9页 |
| 1 文献综述 | 第9-13页 |
| ·硫辛酸的概述 | 第9-10页 |
| ·硫辛酸合成酶 Lias 的概述 | 第10-12页 |
| ·丙酮酸脱氢酶复合体的概述 | 第12-13页 |
| 2 引言 | 第13-14页 |
| 3 材料与方法 | 第14-28页 |
| ·猪 Lias 基因的克隆、序列分析与结构预测 | 第14-23页 |
| ·样品采集 | 第14页 |
| ·菌株和质粒 | 第14页 |
| ·主要仪器设备 | 第14页 |
| ·试剂 | 第14-18页 |
| ·试验常规试剂 | 第14-16页 |
| ·SDS-PAGE 电泳所用试剂及配制 | 第16-18页 |
| ·Western blot 所用试剂及配制 | 第18页 |
| ·猪 Lias 基因的克隆 | 第18-22页 |
| ·猪 Lias 基因克隆引物设计与合成 | 第18-19页 |
| ·猪肝脏总 RNA 的提取 | 第19页 |
| ·RNA 的检测 | 第19页 |
| ·RT-PCR 扩增 | 第19-20页 |
| ·反转录 | 第19-20页 |
| ·PCR 扩增 | 第20页 |
| ·PCR 产物切胶纯化 | 第20-21页 |
| ·连接反应 | 第21页 |
| ·大肠杆菌 DH5a 感受态细胞的制备(CaCl2法) | 第21页 |
| ·转化 | 第21-22页 |
| ·DNA 序列测定 | 第22页 |
| ·DNA 序列分析 | 第22页 |
| ·猪 Lias 基因的组织分布 | 第22-23页 |
| ·样品采集 | 第22页 |
| ·猪 Lias 基因特异性引物设计与合成 | 第22页 |
| ·各组织总 RNA 的提取 | 第22页 |
| ·RNA 的检测 | 第22页 |
| ·RT-PCR 扩增 | 第22-23页 |
| ·猪 pET-28a（+）-Lias 原核表达载体的构建与鉴定 | 第23-26页 |
| ·样品采集 | 第23页 |
| ·猪 Lias 基因表达引物设计与合成 | 第23页 |
| ·PCR 扩增 | 第23页 |
| ·PCR 产物纯化回收 | 第23页 |
| ·连接反应及转化 | 第23页 |
| ·重组表达载体 pET-28a（+）-Lias 的构建 | 第23-25页 |
| ·表达载体的纯化与扩增 | 第23页 |
| ·表达载体的质粒提取 | 第23-24页 |
| ·目的片断与表达载体 pET-28a（+）的酶切回收 | 第24-25页 |
| ·目的片段与表达载体的连接 | 第25页 |
| ·重组质粒的转化和筛选 | 第25页 |
| ·重组质粒 pET-28a（+）-Lias 的鉴定 | 第25-26页 |
| ·重组质粒的菌液 PCR 鉴定 | 第25页 |
| ·重组质粒的提取 | 第25页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第25-26页 |
| ·重组表达质粒的序列测定 | 第26页 |
| ·猪 Lias 基因在大肠杆菌中的表达 | 第26-27页 |
| ·重组质粒 pET-28a（+）-Lias 的表达鉴定 | 第26页 |
| ·重组质粒在原核细胞中的诱导表达 | 第26-27页 |
| ·IPTG 最佳诱导浓度的确定 | 第27页 |
| ·最佳诱导表达时间的确定 | 第27页 |
| ·大量诱导表达 | 第27页 |
| ·融合表达产物的可溶性鉴定 | 第27页 |
| ·猪 Lias 蛋白的 Western blot 鉴定 | 第27-28页 |
| ·Western blot 鉴定 | 第27-28页 |
| 4 结果与分析 | 第28-38页 |
| ·猪 Lias 基因克隆 | 第28-32页 |
| ·猪 Lias 基因的 RT-PCR 扩增 | 第28-29页 |
| ·猪 Lias 克隆序列分析 | 第29-31页 |
| ·同源性分析 | 第31页 |
| ·猪 Lias 基因的组织分布 | 第31-32页 |
| ·猪 pET-28a（+）-Lias 原核表达载体的构建与鉴定 | 第32-35页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第32页 |
| ·重组表达载体的鉴定 | 第32-35页 |
| ·重组质粒的菌落 PCR 鉴定 | 第32页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第32页 |
| ·重组质粒的测序鉴定 | 第32-35页 |
| ·猪 Lias 基因在大肠杆菌中的表达 | 第35-37页 |
| ·猪 Lias 蛋白的 Western blot 鉴定 | 第37-38页 |
| ·Western blot 鉴定 | 第37-38页 |
| 5 讨论与结论 | 第38-41页 |
| ·讨论 | 第38-39页 |
| ·猪 Lias 基因的克隆与序列分析 | 第38-39页 |
| ·猪 Lias 基因的组织分布 | 第39页 |
| ·猪 pET-28a（+）-Lias 的表达和鉴定 | 第39页 |
| ·结论 | 第39-41页 |
| 参考文献 | 第41-46页 |
| Abstract | 第46-47页 |
