| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-14页 |
| 缩略词表 | 第14-15页 |
| 前言 | 第15-17页 |
| 第一部分 海港柴油降解菌 Acinetobacter sp. Y9 的分离、筛选和鉴定 | 第17-31页 |
| 一、实验目的 | 第17页 |
| 二、实验材料及仪器 | 第17-20页 |
| （一）菌种来源 | 第17页 |
| （二）主要仪器 | 第17-18页 |
| （三）主要试剂 | 第18页 |
| （四）试剂盒 | 第18页 |
| （五）常用培养基及试剂 | 第18-20页 |
| 三、实验方法 | 第20-26页 |
| （一）柴油降解菌的富集驯化 | 第20-21页 |
| （二）柴油降解菌的分离 | 第21页 |
| （三）柴油降解能力的测定 | 第21-22页 |
| （四）柴油降解菌的鉴定 | 第22-26页 |
| 1、形态学观察 | 第22-23页 |
| 2、生理生化鉴定 | 第23-24页 |
| 3、16S rDNA 序列分析及系统发育分析 | 第24-26页 |
| 四、结果与分析 | 第26-30页 |
| （一）海洋港柴油降解菌驯化分离结果 | 第26页 |
| （二）柴油降解细菌的鉴定结果 | 第26-30页 |
| 1、形态学和生理生化特征测定结果 | 第26-28页 |
| 2、16S rDNA 序列分析及系统发育树构建 | 第28-30页 |
| 五、小结 | 第30-31页 |
| 第二部分 Acinetobacter sp. Y9 对柴油降解特性的研究 | 第31-44页 |
| 一、实验目的 | 第31页 |
| 二、实验材料及仪器 | 第31-32页 |
| （一）菌种来源 | 第31页 |
| （二）主要仪器 | 第31页 |
| （三）主要试剂 | 第31页 |
| （四）常用培养基 | 第31-32页 |
| 三、实验方法 | 第32-35页 |
| （一）生长曲线测定 | 第32页 |
| （二）紫外分光光度计法测柴油的降解率 | 第32页 |
| （三）降解影响因素研究 | 第32-33页 |
| 1、培养温度对菌株生长和降解率的影响 | 第33页 |
| 2、初始 pH 对菌株生长和降解率的影响 | 第33页 |
| 3、初始柴油浓度对菌株生长和降解率的影响 | 第33页 |
| 4、菌种接种量对菌株生长和降解率的影响 | 第33页 |
| （四）Acinetobacter sp. Y9 在最优降解条件下柴油降解率的测定和GC-MS 分析 | 第33-35页 |
| 四、结果与讨论 | 第35-43页 |
| （一）Acinetobacter sp. Y9 生长曲线的测定 | 第35-36页 |
| （二）柴油标准曲线的测定 | 第36-37页 |
| （三）降解影响因素研究 | 第37-40页 |
| 1、培养温度对 Acinetobacter sp. Y9 生长和降解率的影响 | 第37-38页 |
| 2、初始 pH 对 Acinetobacter sp. Y9 生长和降解率的影响 | 第38页 |
| 3、初始柴油浓度对 Acinetobacter sp. Y9 生长和降解率的影响 | 第38-39页 |
| 4、菌种接种量对 Acinetobacter sp. Y9 生长和降解率的影响 | 第39-40页 |
| （四）Acinetobacter sp. Y9 在最优降解条件下柴油降解率的测定和 GC-MS 分析 | 第40-43页 |
| 1、紫外分光光度法测菌株 Acinetobacter sp. Y9 对柴油的降解率 | 第40-41页 |
| 2、GC-MS 分析 Acinetobacter sp. Y9 对柴油的降解 | 第41-43页 |
| 五、小结 | 第43-44页 |
| 第三部分 Acinetobacter sp. Y9 中烷烃羟化酶基因 alkB 和 CYP153A 的克隆与分析 | 第44-58页 |
| 一、实验目的 | 第44页 |
| 二、实验材料及仪器 | 第44-46页 |
| （一）菌种来源 | 第44页 |
| （二）主要仪器 | 第44页 |
| （三）主要试剂 | 第44-45页 |
| （四）试剂盒 | 第45页 |
| （五）常用培养基及试剂 | 第45-46页 |
| 三、实验方法 | 第46-51页 |
| （一）降解柴油的酶基因分析与筛选 | 第46页 |
| （二）降解酶基因扩增的引物设计 | 第46页 |
| （三）Acinetobacter sp. Y9 基因组 DNA 的提取 | 第46-47页 |
| （四）Acinetobacter sp. Y9 降解菌质粒的提取 | 第47页 |
| （五）Acinetobacter sp. Y9 中 alkB 和 CYP153A 基因的克隆 | 第47-51页 |
| 1、目的基因的扩增 | 第48页 |
| 2、PCR 产物纯化和鉴定 | 第48-49页 |
| 3、PCR 产物与 pUCm-T 载体的连接 | 第49页 |
| 4、转化 | 第49-50页 |
| 5、转化子筛选 | 第50页 |
| 6、酶切鉴定重组质粒 | 第50-51页 |
| （六）测序及生物信息学分析 | 第51页 |
| 四、结果与分析 | 第51-57页 |
| （一）Acinetobacter sp. Y9 基因组 DNA 的提取 | 第51-52页 |
| （二）Acinetobacter sp. Y9 质粒的提取 | 第52页 |
| （三）Acinetobacter sp. Y9 中 alkB 和 CYP153A 基因的克隆 | 第52-54页 |
| 1、目的基因 PCR 产物的鉴定 | 第52-53页 |
| 2、PCR 产物的克隆 | 第53-54页 |
| 3、酶切筛选转化子 | 第54页 |
| （四）测序及生物信息学分析 | 第54-57页 |
| 五、小结 | 第57-58页 |
| 第四部分 总结 | 第58-60页 |
| 综述 | 第60-77页 |
| 参考文献 | 第77-82页 |
| 在读期间发表论文和参加科研工作情况说明 | 第82-83页 |
| 致谢 | 第83页 |
