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山羊痘病毒ORF31、ORF117、ORF72基因的原核表达及磷酸酶活力分析

摘要第1-4页
Abstract第4-7页
第一章 文献综述第7-13页
   ·病原学第7-8页
     ·病毒的形态第7页
     ·理化性质第7-8页
   ·羊痘病毒基因组学第8-9页
   ·病毒的致病机理第9页
   ·流行病学第9-10页
     ·传染源与易感动物第9页
     ·传播途径第9页
     ·地理分布第9-10页
     ·分子流行病学第10页
   ·临床症状第10-11页
   ·诊断方法第11-12页
     ·临床诊断第11页
     ·实验室诊断第11-12页
   ·免疫与疫苗第12页
   ·山羊痘病毒蛋白研究意义第12-13页
第二章 山羊痘病毒ORF31/ORF117/ORF72基因的克隆与分析第13-22页
   ·材料第13页
     ·细胞系、菌株和载体第13页
     ·主要试剂第13页
     ·培养基与溶液第13页
   ·实验方法第13-17页
     ·病毒的分离培养第13-14页
     ·病毒DNA的提取第14页
     ·目的基因的克隆第14-17页
     ·目的基因的序列分析第17页
   ·结果第17-21页
     ·目的基因的PCR扩增第17页
     ·重组质粒的鉴定第17-18页
     ·基因的生物信息学分析第18页
     ·理化性质参数第18-20页
     ·跨膜结构的预测分析第20页
     ·信号肽序列的预测分析第20页
     ·二级结构的预测分析第20-21页
   ·讨论第21-22页
第三章 山羊痘病毒ORF31/ORF117/ORF72蛋白的表达及纯化第22-37页
   ·材料第22-23页
     ·载体与菌种第22页
     ·主要试剂第22页
     ·培养基与溶液第22-23页
   ·方法第23-27页
     ·目的基因的扩增和回收第23-24页
     ·目的基因原核表达质粒的构建第24-26页
     ·目的基因的诱导表达及条件优化第26页
     ·重组蛋白表达产物的纯化第26-27页
     ·纯化的pE30T-31/pET30-117/pET30-72重组蛋白分析第27页
   ·结果第27-35页
     ·目的基因的PCR扩增第27-28页
     ·重组原核表达载体的构建及鉴定第28页
     ·目的蛋白的诱导表达及其表达条件优化第28-33页
     ·目的蛋白的纯化和定量第33-35页
     ·目的蛋白的western-blotting检测第35页
   ·讨论第35-37页
第四章 山羊痘病毒ORF72蛋白的酶活力分析第37-46页
   ·材料第37-38页
     ·材料和试剂第37页
     ·仪器第37页
     ·溶液第37-38页
   ·方法第38-39页
     ·ORF72蛋白的磷酸酶活力鉴定第38页
     ·酶的最适pH值第38页
     ·酶的最适温度第38页
     ·金属离子对酶活力的影响第38页
     ·化学修饰剂对酶活力的影响第38页
     ·磷酸酶抑制剂对酶活力的影响第38-39页
   ·结果分析第39-45页
     ·ORF72蛋白的最适pH值第39页
     ·ORF72蛋白的最适温度第39-41页
     ·不同金属离子对ORF72蛋白酶活性的影响第41-44页
     ·化学修饰剂对酶活力的影响第44-45页
     ·磷酸酶抑制剂对酶活力的影响第45页
   ·讨论第45-46页
第五章 全文结论第46-47页
参考文献第47-52页
致谢第52-53页
作者简介第53页

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