| 中文摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-17页 |
| 1 超氧化物歧化酶（SOD） | 第9页 |
| 2 锰超氧化物歧化酶（MnSOD） | 第9-10页 |
| 3 锰超氧化物歧化酶（MnSOD）与肿瘤 | 第10-13页 |
| 4 蛋白转导域 | 第13-15页 |
| 5 课题思路 | 第15-16页 |
| 6 技术路线 | 第16-17页 |
| 第二章 hMnSOD-R9 表达载体的构建 | 第17-28页 |
| 1 实验仪器和材料 | 第17-18页 |
| ·实验材料 | 第17-18页 |
| ·实验仪器 | 第18页 |
| 2 实验方法 | 第18-24页 |
| ·目的基因的扩增 | 第18-20页 |
| ·pET-15b 载体的制备 | 第20-21页 |
| ·pET-15b-hMnSOD-R9 表达载体的制备 | 第21-24页 |
| 3 实验结果 | 第24-27页 |
| ·hMnSOD-R9 目的基因的扩增 | 第24-25页 |
| ·pET-15b 载体的制备 | 第25-26页 |
| ·构建重组表达质粒 pET-15b-hMnSOD-R918 | 第26-27页 |
| 4 讨论 | 第27-28页 |
| 第三章 蛋白的诱导表达及纯化 | 第28-42页 |
| 1 实验仪器和材料 | 第28-30页 |
| ·实验材料 | 第28-30页 |
| ·实验仪器 | 第30页 |
| 2 实验方法 | 第30-36页 |
| ·重组质粒的转化及鉴定阳性克隆 | 第30页 |
| ·重组 pET-15b-hMnSOD-R9 表达菌株的培养与诱导 | 第30-32页 |
| ·Western bloting 检测目的蛋白的表达 | 第32页 |
| ·蛋白表达产物的可溶性分析 | 第32-33页 |
| ·目的蛋白表达条件的优化 | 第33页 |
| ·目的蛋白的大量表达及纯化 | 第33-34页 |
| ·目的蛋白的浓度测定及产量估算 | 第34-35页 |
| ·目的蛋白的活力测定 | 第35-36页 |
| 3 实验结果 | 第36-40页 |
| ·hMnSOD-R9 的表达及可溶性分析 | 第36页 |
| ·hMnSOD-R9 的 Western Blotting 鉴定 | 第36-37页 |
| ·hMnSOD-R9 蛋白表达条件的优化 | 第37-39页 |
| ·hMnSOD-R9 的纯化 | 第39-40页 |
| ·hMnSOD-R9 的产率估算 | 第40页 |
| ·hMnSOD-R9 的活力测定 | 第40页 |
| 4 讨论 | 第40-42页 |
| 第四章 不同种类细胞中 SOD 含量、活力及 ROS 含量测定 | 第42-51页 |
| 1 实验仪器和材料 | 第42-43页 |
| ·实验材料 | 第42页 |
| ·主要实验仪器 | 第42-43页 |
| 2 实验方法 | 第43-44页 |
| ·不同种类细胞中 SOD 水平的测定 | 第43页 |
| ·不同种类细胞中 SOD 活力的测定 | 第43-44页 |
| ·不同种类细胞中 ROS 水平测定 | 第44页 |
| 3 实验结果 | 第44-48页 |
| ·不同种类细胞 SOD 水平 | 第44-47页 |
| ·不同种类细胞中总 SOD 活力 | 第47-48页 |
| ·不同种类细胞中 ROS 水平 | 第48页 |
| 4 讨论 | 第48-51页 |
| 第五章 hMnSOD-R9 融合蛋白的体外活性研究 | 第51-66页 |
| 1 实验仪器和材料 | 第51-52页 |
| ·实验材料 | 第51-52页 |
| ·主要实验仪器 | 第52页 |
| 2 实验方法 | 第52-57页 |
| ·融合蛋白抗氧化能力的鉴定 | 第52页 |
| ·融合蛋白穿膜性质的鉴定 | 第52-53页 |
| ·MTT 法检测融合蛋白对癌细胞增殖能力的影响 | 第53页 |
| ·PI 染色检验融合蛋白对 Hela 细胞周期的影响 | 第53-54页 |
| ·Annexin V/PI 染色检测 Hela 细胞凋亡 | 第54-55页 |
| ·Q-PCR 检测 Hela 细胞凋亡相关基因 | 第55-56页 |
| ·Western blot 检测 Hela 细胞凋亡相关蛋白 | 第56-57页 |
| 3 实验结果 | 第57-63页 |
| ·hMnSOD-R9 的氧化损伤保护作用 | 第57-58页 |
| ·免疫荧光法鉴定 hMnSOD-R9 的穿膜作用 | 第58-59页 |
| ·hMnSOD-R9 对不同癌细胞的生长抑制作用 | 第59-60页 |
| ·hMnSOD-R9 对 Hela 细胞周期的影响 | 第60-61页 |
| ·hMnSOD-R9 对 Hela 细胞凋亡的影响 | 第61页 |
| ·Q-PCR 实验分析 Hela 细胞凋亡相关基因 | 第61-62页 |
| ·Western blot 实验分析 Hela 细胞凋亡相关蛋白 | 第62-63页 |
| 4 讨论 | 第63-66页 |
| 结论 | 第66-67页 |
| 展望 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-76页 |
| 附录 | 第76-77页 |
| 英文缩略词表 | 第77-78页 |
| 硕士期间发表的论文 | 第78-79页 |
| 致谢 | 第79页 |
