| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-14页 |
| 第一章 前言 | 第14-34页 |
| 1 生命起源研究进展 | 第14-26页 |
| ·生命起源的地质时期 | 第14-15页 |
| ·原始地球的环境条件 | 第15-16页 |
| ·生命起源于“原始汤”还是“海底热液系统”？ | 第16-21页 |
| ·生命起源于“原始汤”假说 | 第16-19页 |
| ·生命起源于“海底热液喷口”假说 | 第19-21页 |
| ·“复制先起源”还是“新陈代谢先起源”？ | 第21-26页 |
| ·“生命”的定义和“鸡”-“蛋”悖论 | 第21-22页 |
| ·“新陈代谢先起源”假说 | 第22-23页 |
| ·“复制先起源”假说 | 第23-26页 |
| 2 原始蛋白质起源研究进展 | 第26-32页 |
| ·原始蛋白质的氨基酸来源 | 第26-29页 |
| ·原始蛋白质的结构和功能特征 | 第29页 |
| ·蛋白质世界的进化史 | 第29-31页 |
| ·蛋白质起源的小分子诱导/选择假说 | 第31-32页 |
| 3 本论文的研究目的和意义 | 第32-33页 |
| 4 本论文的组织结构 | 第33-34页 |
| 第二章 早起源氨基酸构成的黄素氧化还原蛋白的结构和性质 | 第34-49页 |
| 1 实验材料 | 第35-36页 |
| ·菌株和载体 | 第35页 |
| ·试剂 | 第35页 |
| ·实验仪器 | 第35-36页 |
| 2 实验方法 | 第36-40页 |
| ·突变型 flavodoxin 的理性设计 | 第36页 |
| ·突变型 flavodoxin 基因的合成： | 第36-37页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第37页 |
| ·突变型 flavodoxin 的表达和纯化 | 第37页 |
| ·SDS-PAGE 和 Western-blotting 检测 | 第37-38页 |
| ·holoflavodoxin 及 apoflavodoxin 的制备 | 第38页 |
| ·远紫外圆二色性光谱的测定 | 第38页 |
| ·氧化还原电位的测定 | 第38-39页 |
| ·解离平衡常数的测定和结合自由能的计算 | 第39-40页 |
| 3 结果与讨论 | 第40-48页 |
| ·突变型 flavodoxin 的理性设计 | 第40-41页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第41页 |
| ·突变型 flavodoxin 的表达和纯化 | 第41-43页 |
| ·突变型 apoflavodoxin 和 holoflavodoxin 的紫外-可见光吸收光谱 | 第43页 |
| ·突变型 apoflavodoxin 和 holoflavodoxin 的远紫外圆二色性光谱 | 第43-44页 |
| ·突变型 flavodoxin 的氧化还原电位 | 第44-45页 |
| ·突变型 flavodoxin 的 FMN 结合性质 | 第45-48页 |
| 本章小结 | 第48-49页 |
| 第三章 有机辅因子对四种氨基酸随机共聚肽构象转变的影响 | 第49-59页 |
| 1 实验材料 | 第50页 |
| ·试剂 | 第50页 |
| ·实验仪器 | 第50页 |
| 2 实验方法 | 第50-52页 |
| ·四种 L-氨基酸-N-内羧酸酐的合成 | 第50-52页 |
| ·L-缬氨酸-N-内羧酸酐的合成[172] | 第50-51页 |
| ·O-苄基-L-丝氨酸-N-内羧酸酐的合成[173] | 第51页 |
| ·N-碳苄氧基-L-赖氨酸-N-内羧酸酐[174] | 第51页 |
| ·γ-苄酯-L-谷氨酸及γ-苄酯-L-谷氨酸-N-内羧酸酐合成[175] | 第51-52页 |
| ·随机共聚肽的合成 | 第52页 |
| ·随机共聚肽分子量的表征 | 第52页 |
| ·远紫外圆二色性光谱测定 | 第52页 |
| 3 结果与讨论 | 第52-58页 |
| ·随机共聚肽的合成和表征 | 第52-54页 |
| ·三种有机辅因子对随机共聚肽构象转变的影响 | 第54-58页 |
| 本章小结 | 第58-59页 |
| 第四章 15 种氨基酸随机肽库的小盒式 DNA 编码文库的构建 | 第59-73页 |
| 1 实验材料 | 第59-62页 |
| ·菌株和载体 | 第59页 |
| ·FPP 接头的合成 | 第59-60页 |
| ·小盒式 DNA 编码文库模板 R8 的合成 | 第60页 |
| ·引物的合成 | 第60-61页 |
| ·试剂 | 第61页 |
| ·实验仪器 | 第61-62页 |
| 2 实验方法 | 第62-65页 |
| ·尿素-PAGE 电泳 | 第62页 |
| ·核酸产物的回收 | 第62页 |
| ·感受态细胞制备 | 第62页 |
| ·小盒式 DNA 编码文库的预选择 | 第62-64页 |
| ·小盒式 DNA 编码文库的预选择流程 | 第62-63页 |
| ·体外转录 | 第63页 |
| ·mRNA 的纯化 | 第63页 |
| ·mRNA 与 FPP 接头的单链酶连接 | 第63-64页 |
| ·体外翻译 | 第64页 |
| ·随机肽库的纯化 | 第64页 |
| ·样品的缓冲液置换和浓缩 | 第64页 |
| ·RT-PCR | 第64页 |
| ·随机肽库的小盒式 DNA 编码文库构建策略 | 第64-65页 |
| ·文库冗余度及多样性的评估 | 第65页 |
| 3 结果与讨论 | 第65-72页 |
| ·第一轮小盒式 DNA 编码文库的组装 | 第65-67页 |
| ·第二轮小盒式 DNA 编码文库的组装 | 第67-72页 |
| 本章小结 | 第72-73页 |
| 第五章 辅因子对 15 种氨基酸组成的随机多肽构象转变的影响 | 第73-87页 |
| 1 实验材料 | 第73-75页 |
| ·15 种氨基酸随机肽库的小盒式 DNA 编码文库 | 第73页 |
| ·引物的合成 | 第73-74页 |
| ·菌株和载体 | 第74页 |
| ·试剂 | 第74页 |
| ·实验仪器 | 第74-75页 |
| 2 实验方法 | 第75-77页 |
| ·15 种氨基酸多肽原核表达载体的构建 | 第75页 |
| ·15 种氨基酸组成蛋白质的原核表达 | 第75-76页 |
| ·15 种氨基酸随机肽库的制备 | 第76页 |
| ·15 种氨基酸随机肽库的 SDS-Page 和 Native-Page 检测 | 第76页 |
| ·蛋白质浓度测定 | 第76页 |
| ·远紫外圆二色性光谱分析 | 第76-77页 |
| ·bis-ANS 结合实验的荧光光谱分析 | 第77页 |
| 3. 结果与讨论 | 第77-86页 |
| ·15 种氨基酸多肽的原核表达载体构建和表达 | 第77-80页 |
| ·15 种氨基酸随机多肽的 SDS-Page 和 Native-Page 检测 | 第80-81页 |
| ·辅因子对 15 种氨基酸随机多肽构象转变的影响 | 第81-84页 |
| ·辅因子对 15 种氨基酸随机多肽疏水结构域的影响 | 第84-86页 |
| 本章小结 | 第86-87页 |
| 总结和展望 | 第87-88页 |
| 附表 1 | 第88-89页 |
| 附表 2 | 第89-90页 |
| 附表 3 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-108页 |
| 发表论文及参加科研项目的情况说明 | 第108-109页 |
| 致谢 | 第109页 |
