| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-9页 |
| 引言 | 第9-14页 |
| 一、 研究背景 | 第9-13页 |
| （一） 骨的发生 | 第9-10页 |
| （二） 影响骨发育的转录因子 Runx2 和 Osterix | 第10-11页 |
| （三） 影响骨发育的其他因子 | 第11-12页 |
| （四） Sirt2 的生理作用 | 第12-13页 |
| 二、 研究内容与意义 | 第13-14页 |
| 材料与方法 | 第14-25页 |
| 一、 实验材料 | 第14-19页 |
| （一） 细胞及培养试剂 | 第14页 |
| （二） 质粒 | 第14页 |
| （三） 引物 | 第14-15页 |
| （四） 抗体 | 第15页 |
| （五） 试剂 | 第15-16页 |
| （六） 仪器设备 | 第16页 |
| （七） 部分试剂的配制方法 | 第16-19页 |
| 二、 实验方法 | 第19-25页 |
| （一） 细胞培养 | 第19页 |
| （二） 蛋白质的提取和制备 | 第19页 |
| （三） Western Blot | 第19-20页 |
| （四） ALP 染色 | 第20页 |
| （五） RT-PCR | 第20-21页 |
| （六） 感受态大肠杆菌细胞转化 | 第21-22页 |
| （七） 质粒小量制备 | 第22页 |
| （八） DNA 快速纯化与回收 | 第22页 |
| （九） 免疫荧光 | 第22-23页 |
| （十） pREP4-pOCN-Luc 构建质粒 | 第23页 |
| （十一）瞬时转染 | 第23页 |
| （十二）荧光素酶双报告检测分析 | 第23-25页 |
| 结果与分析 | 第25-31页 |
| 一、 建立稳转细胞系与检测多种细胞系中内外源 Sirt2 蛋白水平 | 第25-26页 |
| 二、 Sirt2 对 Runx2 或 Osterix 介导 OCN 启动子活性和基因表达的影响 | 第26-28页 |
| 三、 Sirt2 对 Runx2 或 Osterix 介导的成骨细胞分化影响的作用机制 | 第28-29页 |
| 四、 Sirt2 影响过表达 Runx2 的 C3H10T1/2 的细胞增殖 | 第29-31页 |
| 讨论 | 第31-33页 |
| 一、 Sirt2 抑制 Runx2 对 OCN 启动子的激活作用 | 第31-32页 |
| 二、 Sirt2 可能不影响成骨分化过程中早期指标 ALP 的表达 | 第32页 |
| 三、 Sirt2 影响 Runx2 或 Osterix 对成骨细胞分化的作用机制的探讨 | 第32-33页 |
| 结论 | 第33-34页 |
| 参考文献 | 第34-38页 |
| 致谢 | 第38页 |
