| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-21页 |
| 1 亚麻韧皮纤维发育研究进展 | 第12-15页 |
| ·韧皮纤维细胞伸长 | 第12-13页 |
| ·韧皮纤维细胞次生壁加厚 | 第13-14页 |
| ·纤维特异性半乳聚糖和高尔基体在次生细胞壁加厚中的作用 | 第14页 |
| ·ESTs和基因芯片分析在亚麻韧皮纤维发育中的研究进展 | 第14-15页 |
| 2 植物纤维素合成酶基因研究进展 | 第15-17页 |
| ·纤维素合成酶基因的结构特点 | 第16页 |
| ·纤维素合成酶基因的功能及表达调控 | 第16-17页 |
| ·亚麻纤维素合成酶基因的研究进展 | 第17页 |
| 3 木质素合成相关酶基因研究进展 | 第17-19页 |
| ·木质素合成途径 | 第18-19页 |
| ·木质素合成途径相关酶基因研究 | 第19页 |
| ·亚麻木质素合成相关酶基因研究 | 第19页 |
| 4 转基因技术在亚麻中的研究进展 | 第19-20页 |
| 5 本研究的目的和意义 | 第20-21页 |
| 第二章 OsCesA4基因过表达载体构建 | 第21-30页 |
| 1 材料 | 第21-22页 |
| ·质粒载体与菌种 | 第21页 |
| ·试剂 | 第21页 |
| ·基本培养基 | 第21-22页 |
| 2 实验方法 | 第22-27页 |
| ·OsCesA4过表达载体构建技术路线 | 第22-23页 |
| ·OsCesA4全长cDNA的获得 | 第23-24页 |
| ·表达载体酶切 | 第24页 |
| ·目的片段与表达载体的连接反应 | 第24页 |
| ·大肠杆菌感受态制备及质粒的热激转化 | 第24-25页 |
| ·重组子的鉴定 | 第25-26页 |
| ·菌落PCR | 第25页 |
| ·质粒PCR | 第25-26页 |
| ·酶切检测 | 第26页 |
| ·质粒测序检测 | 第26页 |
| ·农杆菌质粒转化及保存 | 第26-27页 |
| ·大肠杆菌质粒的热激转化 | 第26页 |
| ·农杆菌质粒的冻融法转化 | 第26-27页 |
| ·农杆菌质粒检测 | 第27页 |
| ·重组质粒的农杆菌保存 | 第27页 |
| 3 结果与分析 | 第27-29页 |
| ·OsCesA4全长cDNA酶切片段获得 | 第27-28页 |
| ·pOsCesA4-OE重组质粒检测 | 第28页 |
| ·重组质粒酶切检测 | 第28页 |
| ·重组质粒测序结果 | 第28页 |
| ·表达载体转化农杆菌检测 | 第28-29页 |
| 4 讨论 | 第29-30页 |
| 第三章 亚麻木质素合成相关基因RNA干扰载体构建 | 第30-40页 |
| 1 材料 | 第30-31页 |
| ·质粒载体与菌种 | 第30页 |
| ·试剂 | 第30-31页 |
| ·基本培养基 | 第31页 |
| 2 实验方法 | 第31-34页 |
| ·亚麻木质素合成相关基因RNAi载体的构建技术路线 | 第31-32页 |
| ·引物设计 | 第32页 |
| ·PCR扩增目的片段 | 第32-33页 |
| ·顺式片段与中间载体的连接 | 第33页 |
| ·反式片段与顺式+3D-Linker的连接 | 第33页 |
| ·顺式+3D-linker+反式片段与表达载体的连接 | 第33-34页 |
| ·农杆菌重组质粒的转化及保存 | 第34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-38页 |
| ·木质素合成相关基因RNAi顺、反式片段PCR扩增 | 第34-35页 |
| ·重组质粒检测 | 第35-38页 |
| ·顺式片段与中间载体pB3D连接 | 第35-36页 |
| ·反式片段与中间载体连接 | 第36-37页 |
| ·顺式片段+3D-linker+反式片段与表达载体的连接 | 第37-38页 |
| ·重组质粒测序结果 | 第38页 |
| ·表达载体转化农杆菌检测 | 第38页 |
| 4 讨论 | 第38-40页 |
| 第四章 亚麻遗传转化的研究 | 第40-52页 |
| 1 材料 | 第40-41页 |
| ·植物材料 | 第40页 |
| ·表达载体 | 第40页 |
| ·主要试剂 | 第40-41页 |
| ·培养基 | 第41页 |
| 2 实验方法 | 第41-44页 |
| ·亚麻遗传转化条件的优化 | 第42-43页 |
| ·亚麻无菌苗的获得 | 第42页 |
| ·潮霉素、头孢霉素、羧苄青霉素敏感性实验 | 第42页 |
| ·亚麻下胚轴的预培养 | 第42页 |
| ·农杆菌浸染 | 第42页 |
| ·农杆菌与亚麻下胚轴的共培养 | 第42页 |
| ·抗性筛选培养 | 第42页 |
| ·抗性芽的生根培养 | 第42-43页 |
| ·转基因亚麻的检测 | 第43-44页 |
| ·GUS瞬时检测 | 第43页 |
| ·DNA水平上检测转基因亚麻 | 第43页 |
| ·RNA水平上检测转基因亚麻 | 第43-44页 |
| 3 结果与分析 | 第44-50页 |
| ·潮霉素、头孢霉素、羧苄青霉素对亚麻分化能力的影响 | 第44-45页 |
| ·潮霉素选择压力的确定 | 第44页 |
| ·头孢霉素和羧苄青霉素敏感性实验 | 第44-45页 |
| ·预培养时间对转化的影响 | 第45-46页 |
| ·农杆菌浸染时间对转化的影响 | 第46-47页 |
| ·共培养时间对转化的影响 | 第47页 |
| ·亚麻遗传转化体系的建立 | 第47页 |
| ·转基因亚麻的GUS检测 | 第47-49页 |
| ·DNA水平上检测转基因亚麻 | 第49页 |
| ·RT-PCR检测转基因亚麻 | 第49-50页 |
| 4 讨论 | 第50-52页 |
| ·预培养对遗传转化的影响 | 第50页 |
| ·浸染、共培养时间对转化的影响 | 第50页 |
| ·抗生素对筛选的影响 | 第50-51页 |
| ·筛选对亚麻再生的影响 | 第51-52页 |
| 第五章 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-59页 |
| 附录 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 作者简介 | 第61页 |
