| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-21页 |
| ·小麦赤霉病概况 | 第12-13页 |
| ·禾谷镰刀菌概况 | 第13-16页 |
| ·禾谷镰刀菌基本生物学特性概述 | 第13-14页 |
| ·禾谷镰刀菌基因功能研究概述 | 第14-16页 |
| ·蛋白激酶研究概况 | 第16-20页 |
| ·激酶基因概述 | 第16-17页 |
| ·主要的蛋白激酶介绍 | 第17-18页 |
| ·本研究有关的基因研究进展 | 第18-20页 |
| ·本研究的目的意义和技术路线 | 第20-21页 |
| 第二章 禾谷镰刀菌FGSG_04053基因敲除和突变体的验证 | 第21-34页 |
| ·实验材料、仪器、试剂和培养基 | 第21-22页 |
| ·实验材料 | 第21页 |
| ·实验仪器 | 第21-22页 |
| ·试验方法 | 第22-29页 |
| ·禾谷镰刀菌Puf1基因序列分析 | 第22页 |
| ·引物设计 | 第22-23页 |
| ·CTAB法提取基因组DNA | 第23页 |
| ·大肠杆菌DH1OB感受态制备 | 第23-24页 |
| ·质粒PCB1003的提取 | 第24页 |
| ·重叠PCR和split PCR | 第24-25页 |
| ·琼脂糖凝胶DNA回收 | 第25页 |
| ·PCR产物浓缩 | 第25-26页 |
| ·制备原生质体及PEG介导转化 | 第26页 |
| ·快速提取转化子DNA | 第26-27页 |
| ·PCR检测转化子 | 第27页 |
| ·Southern blot验证突变体 | 第27-29页 |
| ·实验结果与分析 | 第29-33页 |
| ·FGSG_04053基因序列分析 | 第29-30页 |
| ·基因敲除引物设计 | 第30-32页 |
| ·Southern blot验证结果 | 第32-33页 |
| ·讨论 | 第33-34页 |
| 第三章 PUF1基因缺失突变体表型分析 | 第34-40页 |
| ·实验材料、仪器耗材和培养基 | 第34页 |
| ·实验方法 | 第34-35页 |
| ·菌落形态观察和生长速率测定 | 第34页 |
| ·产孢量测定和孢子形态观察 | 第34页 |
| ·孢子萌发观察 | 第34页 |
| ·菌落边缘形态观察 | 第34页 |
| ·有性杂交实验 | 第34-35页 |
| ·小麦穗侵染 | 第35页 |
| ·结果与分析 | 第35-39页 |
| ·菌落形态观察和生长速率 | 第35-36页 |
| ·孢子形态、产孢量和孢子萌发 | 第36-37页 |
| ·突变体菌落边缘观察 | 第37-38页 |
| ·突变体有性不育 | 第38页 |
| ·小麦穗侵染分析 | 第38-39页 |
| ·讨论 | 第39-40页 |
| 第四章 PUF1基因功能回复验证 | 第40-45页 |
| ·材料、试剂和仪器 | 第40页 |
| ·实验材料 | 第40页 |
| ·试剂和仪器 | 第40页 |
| ·实验方法 | 第40-43页 |
| ·互补引物设计 | 第40-42页 |
| ·互补载体构建 | 第42-43页 |
| ·互补载体PUF1-PHZ100转化突变体菌株M15 | 第43页 |
| ·互补转化子的筛选 | 第43页 |
| ·互补转化子表型分析 | 第43页 |
| ·结果与分析 | 第43-44页 |
| ·互补载体PUF1-PHZ100的构建 | 第43页 |
| ·互补转化子的获得 | 第43-44页 |
| ·互补转化子表型分析 | 第44页 |
| ·讨论 | 第44-45页 |
| 第五章 PUF1基因亚细胞定位 | 第45-50页 |
| ·实验材料、试剂和仪器 | 第45页 |
| ·实验方法 | 第45-48页 |
| ·引物设计 | 第45-46页 |
| ·亚细胞定位载体构建 | 第46-48页 |
| ·结果与分析 | 第48-49页 |
| ·亚细胞定位载体的构建 | 第48页 |
| ·荧光显微镜检测基因表达部位 | 第48-49页 |
| ·讨论 | 第49-50页 |
| 第六章 角变子DNA测序验证自发突变 | 第50-53页 |
| ·材料、仪器和试剂 | 第50页 |
| ·试验方法 | 第50-51页 |
| ·分析与PUF1基因互作的基因并下载序列和设计引物 | 第50页 |
| ·角变子DNA提取和基因片段扩增 | 第50页 |
| ·角变子测序 | 第50页 |
| ·角变子序列比对 | 第50-51页 |
| ·结果 | 第51-52页 |
| ·引物设计 | 第51页 |
| ·角变子测序结果 | 第51-52页 |
| ·讨论 | 第52-53页 |
| 第七章 结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 作者简介 | 第60页 |
