目录 | 第1-7页 |
缩写词 | 第7-8页 |
摘要 | 第8-9页 |
Abstract | 第9-10页 |
引言 | 第10-12页 |
文献综述 | 第12-27页 |
1 植物叶色突变的研究进展 | 第12-18页 |
·植物叶色突变概述 | 第12页 |
·植物叶色突变的分子机制 | 第12-15页 |
·叶绿素生物合成途径中的基因突变 | 第12-14页 |
·叶绿体分化与发育相关基因表达受阻 | 第14页 |
·参与卟啉循环的各物质之间相互抑制 | 第14-15页 |
·编码其它叶绿体蛋白的基因突变 | 第15页 |
·植物叶色突变的应用 | 第15-17页 |
·植物叶色突变体在植物生理学方面的应用 | 第15-16页 |
·植物叶色突变体在功能基因组学研究中的应用 | 第16-17页 |
·水稻叶色突变体的基因定位 | 第17-18页 |
2 PPR 蛋白基因家族 | 第18-27页 |
·PPR 蛋白基因家族的分类及结构特征 | 第19-21页 |
·PPR 蛋白的分子机理 | 第21-24页 |
·参与叶绿体 RNA 加工的 PPR 蛋白 | 第22-24页 |
·参与线粒体 RNA 加工的 PPR 蛋白 | 第24页 |
·PPR 蛋白与 RNA 编辑 | 第24-27页 |
材料与方法 | 第27-32页 |
1 材料 | 第27-28页 |
·植物材料 | 第27页 |
·菌种 | 第27页 |
·载体 | 第27-28页 |
·试剂 | 第28页 |
2 方法 | 第28-32页 |
·生物信息学分析 | 第28-29页 |
·亚细胞定位分析 | 第29-30页 |
·GFP 亚细胞定位载体 pCAMBIA1302-CISC(t)的构建 | 第29页 |
·pCAMBIA 1302-CISC(t)转化拟南芥原生质体 | 第29-30页 |
·荧光共聚焦电子显微镜观察 | 第30页 |
·遗传互补试验 | 第30页 |
·遗传互补载体 pCAMBIA1300-CISC(t)的构建 | 第30页 |
·遗传互补载体的转化 | 第30页 |
·遗传互补表型观察 | 第30页 |
·GUS 表达分析 | 第30-31页 |
·GUS 表达载体的构建 | 第30-31页 |
·GUS 载体的转化 | 第31页 |
·GUS 组织化学染色观察 | 第31页 |
·半定量 RT-PCR 分析 cisc(t)的时空表达 | 第31页 |
·RNA 编辑位点分析 | 第31-32页 |
结果与分析 | 第32-41页 |
1 CISC(t)基因的生物信息学分析 | 第32-34页 |
·CISC(t)蛋白属于 PPR 家族中 PLS 亚族的 DYW 群 | 第32-33页 |
·生物信息学预测 CISC(t)蛋白定位于叶绿体 | 第33-34页 |
2 CISC(t)表达产物的亚细胞定位分析 | 第34-36页 |
·GFP 亚细胞定位载体 pCAMBIA1302-CISC(t)的构建 | 第34-36页 |
·绿色荧光蛋白检测 CISC(t)的亚细胞定位 | 第36页 |
3 遗传互补苗的表型 | 第36-37页 |
4 pCAMBIA 1309Z-CISC(t)转基因植株的 GUS 表达 | 第37-39页 |
5 半定量 RT-PCR 检测 CISC(t)的表达量分析 | 第39页 |
6 RNA 编辑位点分析 | 第39-41页 |
讨论 | 第41-44页 |
1 CISC(t)的功能鉴定分析 | 第41页 |
2 CISC(t)基因的表达模式 | 第41页 |
3 CISC(t)参与 rpoB 的 RNA 编辑 | 第41-42页 |
4 CISC(t)基因与叶绿体生物合成 | 第42-43页 |
5 下一步工作 | 第43-44页 |
参考文献 | 第44-52页 |
附录 | 第52-58页 |
1 载体构建相关实验方法 | 第52-55页 |
·载体构建中 PCR 扩增体系 | 第52页 |
·转基因植株的检测体系 | 第52页 |
·水稻总 DNA 提取 | 第52-53页 |
·大肠杆菌 DH5 感受态细胞制备 | 第53页 |
·质粒提取 | 第53-54页 |
·琼脂糖凝胶 DNA 回收(试剂盒购自 Bioteke 公司) | 第54页 |
·重组载体转化大肠杆菌 | 第54页 |
·CISC(t)亚细胞定位相关溶液配制 | 第54-55页 |
2 候选基因的半定量 RT-PCR 体系 | 第55-56页 |
3 RNA 编辑位点分析的相关实验方法 | 第56-57页 |
·水稻总 RNA 提取(TRIzol 法) | 第56页 |
·cDNA 合成 | 第56-57页 |
·RNA 编辑位点分析所需引物 | 第57页 |
4 染料 | 第57-58页 |
致谢 | 第58页 |